奶牛妊娠的实验室诊断技术

奶牛妊娠的实验室诊断技术

【摘要】动物妊娠诊断的实验室诊断方法也比较多，在此仅将几种比较实用的实验室诊断方法和具有一定应用前景的诊断方法作以简要介绍。

【关键词】奶牛妊娠；实验室；诊断

动物怀孕后，在胎儿、胎盘等作用下，会导致母体的新陈代谢发生一系列变化，从而导致母体血、尿、乳等成分发生变化，这就是实验室妊娠诊断的理论基础。在早期妊娠诊断方面，大家做了许多研究探索工作，但目前尚无一种完美的实验室诊断方法，理想的早期妊娠诊断技术应该具备下面的几个条件：

一是在配种后一个发情周期之内显示出诊断结果。二是妊娠诊断的诊断准确率应在85％V A上。三是对母体和胎儿安全无害。四是方法简便、经济实用。

动物妊娠诊断的实验室诊断方法也比较多，在此仅将几种比较实用的实验室诊断方法和具有一定应用前景的诊断方法作以简要介绍。

1.牛乳孕酮诊断法

动物妊娠后，外周血液和乳中孕酮浓度升高，牛在妊娠早期(配种后18-24天)就表现出了这一内分泌学变化，通过精确定量分析可以确定妊娠早期(配种21天后)母牛乳汁中孕酮的临界值，根据此临界值则可对应调节测定系统，使其满足定性测定的要求，再通过显色反应或乳胶凝集特征判定是否妊娠。临床验证表明，在配种后第23天采样，进行孕酮诊断是牛早期妊娠诊断的最佳时间。

1.1孕酮—ELISA(P-ELISA)诊断法

P-ELISA诊断法利用抗原(孕酮)、酶标抗原(酶标记孕酮)与抗体(孕酮抗体)的饱和竞争性结合反应原理，来监测乳样中孕酮浓度．的高低，依据反应系统中所产生的颜色(蓝、黄和粉红)深浅程度，用肉眼定性孕酮在乳样中的浓度范围，从而达到妊娠诊断的目的。荷兰等国已生产出相应的商品性P-ELISA诊断试剂盒，但我国尚无此类型的商品试剂盒上市，此方法早期妊娠诊断的准确率为84．5％，成本较高。

1.2孕酮乳胶凝集抑制试验

1.2.1诊断原理

孕酮乳胶凝集抑制试验(PLAIT)是一种利用孕酮单克隆抗体和由孕酮包被的胶珠进行乳汁孕酮快速定性测定的免疫学方法。．其诊断原理是将孕酮包被在特化的乳胶珠上，使奶样中的游离孕酮和胶珠上的孕酮竞争与单克隆抗体上的有限位点相结合，以此来定性显示乳样中孕酮水平高低。

1.2.2诊断方法

将等量乳样、孕酮单克隆抗体和孕酮包被乳胶珠混合在一起，并涂于反应玻板上，当混合物在一狭槽中扩散横过玻片时，乳胶珠与溶液相互作用，形成乳汁薄膜。

如果乳样孕酮含量高，游离态孕酮竞争与孕酮抗体非凝集性结合，在玻板小室内形成平滑状乳膜；相反，如果样品中孕酮含量低，胶珠上的孕酮则与孕酮抗体结合的多，造成胶珠凝集，在玻板上形成粒状乳膜。此诊断方法操作简便，设备简单，成本也低。

2.早孕因子检测法

早孕因子(EPF)是妊娠早期母体血清中最早出现的一种免疫抑制因子。它通过抑制母体的细胞免疫使胎儿，免受免疫排斥，得以在母体子宫中存活，所以也叫免疫抑制性早孕因子。EPF在交配后6-48小时即能在血清中用玫瑰花环抑制试验测出，这给超早期妊娠诊断和受精检查提供了可能。目前，在牛、羊、猪、兔、人等动物体内均发现EPF存在，EPF将在胚胎移植；不孕症诊断、家畜育种方面发挥重要作用。

哺乳动物胎儿有一半遗传信息来源于父亲，这对母体来说是一种外来异物，但在正常情况下，整个妊娠期并不发生母体排斥胎儿的现象。母体为何能忍受胎儿这种半非己物的存在呢?人们注意到，母体怀孕后自体免疫防御机能降低是其中的一个重要因素，EPF就是动物在受精后数小时即出现在母体血液中的一种能抑制母体细胞免疫的物质，早期胚胎的发育和存活离不开EPF存在。

目前，EPF测定只能用玫瑰花环抑制试验，这种方法虽然灵敏度高、所用仪器设备简单，但特异性差、费时费工、变异性较大，所以还不能作为一种常规方法在生产上广泛应用。如果能研究出更好的EPF检测方法，则有可能在动物早期妊娠诊断上取得重大突破。

3.牛胶体金法快速诊断试纸

此方法是近年来研究出的另一种牛妊娠快速诊断方法，准确率高、简单、费用低，很适合于临床生产应用，牛胶体金法快速诊断试纸类似于人妊娠诊断上的“早早孕试纸条”。目前我国尚在研制阶段，国外已有此产品上市。但由于牛年复一年的怀孕、泌乳，导致牛乳中总有一定水平的绒毛膜促性腺激素(HCG)存在，所以就难以像人的“早早孕试纸条”一样只考虑定性测定。国外生产的此类试纸条，尚．不能肉眼判读，必须借助相应的阅读仪器，将此仪器装在挤奶机上，在挤奶过程中就可完成牛的妊娠诊断。