γ-干扰素释放法检测奶牛结核病的比较试验(1)
无锡地区应用γ-干扰素试验法检测牛结核病的临床应用
无锡地区应用γ-干扰素试验法检测牛结核病的临床应用作者：盛瑜范峰来源：《农业开发与装备》 2015年第2期盛瑜，范峰（无锡市动物疫病预防控制中心，江苏无锡 214021）摘要：通过对无锡地区2011～2013年所有规模场奶牛应用γ-干扰素试验进行结核病监测，从而淘汰监测结核阳性牛最终达到牛场结核净化。
2011年检出淘汰阳性牛45头，2012年检出淘汰21头，2013检出淘汰6头。
结果显示阳性牛检出率逐年下降明显，γ-干扰素试验法有更好的特异性和敏感性，对净化牛群效果显著。
关键词：无锡地区；应用；γ-干扰素试验法；检测；牛结核病；临床应用牛结核病作为一种重要的人兽共患病不仅严重影响奶牛养殖业的发展，更是公共卫生的重大威胁。
近年来，随着人们生活水平的日益提高，人们对牛肉、奶制品特别是牛奶的需求量与日俱增，为了保证百姓能喝上放心奶，各级政府高度重视，出台系列净化奶牛结核病的政策措施。
目前我省奶牛结核病按照现阶段国家动物疫病监测计划分类标准属二类地区，奶牛结核病不治疗，而采取严格的隔离、扑杀患病牛的政策。
我国国标用于牛结核病的检测方法为牛结核菌素皮内变态反应试验，但是皮内变态反应检测存在非特异性高和人为判读假阴性的特点，常造成检测结果的误判，在实际的牛结核检疫中造成了很大压力。
因此，笔者在2011～2013年间，对无锡地区所有规模奶牛场运用了新型的γ-干扰素（IFN-γ）释放试验进行检测，为无锡市奶牛结核病防控措施进行验证和分析，从而为今后开展本市奶牛结核病的检测提高科学有效的依据。
1 材料与方法1.1 待检奶牛2011～2013年间，连续3年监测无锡市所有规模奶牛场（存栏100头以上），共计13家。
除初生犊牛、怀孕后期母牛及隔离病牛未开展监测，3年连续监测数量分别为：4000头/次、5000头/次、5000头/次，共计14000头/次。
1.2 BOVIGAMTMMycobacterium bovis Gamma Interferon Test Kit for cattle、刺激原Avian PPD、Bovine PPD 购自瑞士Prionics公司。
γ-干扰素释放法检测奶牛结核病的比较试验
64牛结核病（bovine tuberculosis）是由牛型分枝杆菌等所引起的一种人兽共患的慢性消耗性传染病，被世界动物卫生组织（OIE）列为需通报的动物疫病。
目前，我国主要采用牛型提纯结核菌素（PPD）进行单纯颈部皮试变态反应（SCT）来进行牛结核病的检疫，对于阳性牛应进行隔离或扑杀，但是许多被扑杀的牛并没有区分检疫方法可能造成的假阳性，这对牛结核病的检疫，奶牛业的发展造成了巨大的阻力。
掌握我市奶牛结核病现状、检测淘汰感染奶牛意义重大，因此采用灵敏度更高、特异性更好的检测方法具有广泛应用价值。
为此，本研究旨在γ—干扰素释放试验（IGRA）的应用优势，通过比对单纯颈部皮试变态反应（SCT）、比较皮试变态反应（CCT）和γ—干扰素释放试验（IGRA）之间的效果，为临床实际应用提供依据。
1 材料与方法1.1 PPD与试剂盒皮肤试验用牛型PPD和禽型γ—干扰素释放法检测奶牛结核病的比较试验倪谷音1，毛爱民2，范 锋2（1.无锡市动物园管理处，江苏无锡 214000；2.无锡市动物疫病预防控制中心，江苏无锡 214021）摘要：目的评价γ—干扰素释放试验（IGRA）牛结核病检疫过程中的效果。
方法在牛结核病检疫过程中对皮试初筛为结核病和疑似结核病的89（74/15）头奶牛同时进行r干扰素试验、单纯颈部皮试变态反应（SCT）和比较皮试变态反应（CCT）检测，结果单纯颈部皮试变态反应二次检疫中89头牛均判为阳性，单纯颈部皮试变态反应与比较皮试变态反应的阳性符合数为67头。
阳性符合率为75.3％；γ—干扰素释放试验和单纯颈部皮试变态反应检测两者的阳性符合数为64头，阳性符合率为71.9％；γ—干扰素释放试验与比较皮试变态反应的阳性符合数为58头，阳性符合率为79.5 ％。
阴性符合数为16头，阴性符合率为48.4 ％；结论γ—干扰素释放试验在保持较高灵敏度的同时，具有比变态反应更好的特异性。
关键词：牛结核；γ—干扰素试验；单纯颈部皮试变态反应；比较皮试变态反应中图分类号：S852.618；S855.2 文献标识码：B 文章编号：1005-944X（2014）01-0064-03A Comparative Study of γ—Interferon Release Assay in Bovine TuberculosisNi Guyin1，Mao Aimin2，Fan Feng2（1.Wuxi Zoo Management Offi ce， Wuxi， Jiangsu 214000；2. Wuxi Center for Animal Disease Prevention And Control， Wuxi， Jiangsu 214021）Abstract：Objective To evaluate the effect of γ—interferon release assay （IGRA） in bovine tuberculosis detection.Method 89（74 positive/15 suspicious） dairy cows preliminarily screened with skin test were tested byγ—inerfer-on release assay （IGRA）， simple cervical allergy skin test （SCT） and comparative allergy cervical test （CCT）.Result 89 cows were considered as bovine tuberculosis positive in SCT， and 67 of them were considered as posi-tive in CCT with the positive coincidence of 75.3%. 64 cows were considered as positive both in IGRA and SCT with the positive coincidence of 71.9%. 58 cows were considered as positive both in IGRA and CCT， with the positive coin-cidence of 79.5%. 16 cows were considered as negative， with the negative coincidence of 48.4%. Conclusion The γ—interferon release was of higher sensitivity and better specifi city than the other two allergy tests.Key words：bovine tuberculosis；γ—interferon release assay； simple cervical allergy skin test； comparative aller-gy skin test基金项目：江苏省2012农业三新工程《奶牛布病，结核病防治集成技术的推广应用》项目资助，SXGC[2012]0322014年第31卷第1期PPD购自中国兽医监察所；IGRA试剂盒购自瑞士Prionics公司。
γ - 干扰素释放法检测奶牛结核病的比较试验
2013年第10期社,1979:20-64.[2]李璞.黑龙江省的淡水螺类采集报告[J].哈尔滨医科大学学报,1956(3):41-52.[3]齐钟彦,等.中国动物图谱—软体动物第四册[M].北京:科学出版社.1985:4-23.[4]刘月英.白洋淀及其附近地区的淡水螺类[J].动物学报,1961,13(1-4):123-132.[5]刘月英,等.淡水螺类与人们的关系[J ].动物学杂志,1977,3:46-48.[6]周贵,等.东毕血吸虫中间宿主—淡水螺的研究[J].吉林农业大学学报,1996,18(1):59-63.[7]唐崇惕,等.内蒙古科尔沁草原绵羊不同虫龄土耳其斯坦东毕吸虫及虫卵孵化的实验观察[J].动物学报,1990,36(4):366-375.[8]唐崇惕,等.内蒙科尔沁草原淡水螺吸虫幼虫期的调查研究[J ].动物学报,1986,32(4):335-341.牛结核病(bovine tuberculosis )是由牛型分枝杆菌等所引起的一种人兽共患的慢性消耗性传染病,被国际动物卫生组织OIE 列为需通报的动物疫病。
目前,我国主要采用牛型提纯结核菌素(PPD )进行单纯颈部皮试变态反应(S CT )来进行牛结核病的检疫,对于阳性牛应进行隔离或扑杀,但是许多被扑杀的牛并没有区分可能检疫方法照成的假阳性或,这对于牛结核病的检疫,奶牛业的发展造成了巨大的阻力。
掌握我市奶牛结核病现状、检测淘汰感染奶牛意义重要。
因此采用灵敏度更高、特异性更好的检测方法具有广泛应用价值。
为此,本研究旨在γ-干扰素释放试验(IGRA )的应用优势,通过比较单纯颈部皮试变态反应(S CT )、比较皮试变态反应(CCT )和γ-干扰素释放试验(IG RA )之间的效果,为临床实际应用提供依据。
1材料与方法皮肤试验用牛型PPD 、禽型PPD 为中国兽医监察所购买。
BOVIG AM ’试剂盒购自瑞士Prionics 公司。
两种方法在奶牛结核病检疫中的对比试验
72020.02·试验研究 | Experimental research0 引言牛结核病主要是由牛分枝杆菌引起的慢性细菌性人兽共患病，在全球范围内广泛流行[1]。
该病不仅严重影响奶牛业发展，也是公共卫生的重大威胁。
传统诊断方法，如涂片镜检、细菌培养等存在较多缺点，因此要求研究人员开发新的诊断技术或对传统的诊断方法进行改进。
目前基层兽医常用的牛结核病检疫方法是皮内变态反应，牛结核病γ干扰素ELISA 是个很好补充。
2019年10月18日，崇明奶牛“两病”区域净化示范区项目以高分通过国家验收，并获得授牌，成为国内首个疫病区域净化示范区，为奶业振兴打造了“崇明案例”。
下一步上海将在全辖区内整建制推进奶牛“两病”区域净化模式，示范引领全国奶牛“两病”净化工作。
本试验选用崇明某场选用皮内变态反应和γ干扰素ELISA 检疫，进行净化牛结核病的尝试，以期为该病的检疫添砖加瓦。
1 材料与方法1.1 试验及采样上海某区3个奶牛场饲养984头奶牛，近年偶尔有结核病可疑牛和阳性牛出现，为根除牛结核病对该奶牛场的威胁，技术人员根据该奶牛场情况制定了检疫计划，选用皮内变态反应与γ干扰素ELISA 检测相结合的方法，进而达到检疫的目的。
1年2次检疫使用牛型结核病PPD （纯化蛋白衍生物）皮内变态反应，出现阳性或可疑牛后，再对其以及接触较为密切的牛进行γ干扰素ELISA ，目的在于更好地净化牛结核病。
1.2 主要试剂及设备牛结核菌素购自某生物疫苗有限公司，批号为201008；BOVIGAM?牛结核分枝杆菌γ-干扰素检测试剂盒购自上海某生物有限公司，批号为6332607801；瑞士Tecan Sunris 酶标读数仪。
1.3 牛结核变态反应试验奶牛结核病按照国家标准（GB/T18645-2002），用牛型结核分支杆菌PPD 皮内变态反应试验进行奶牛结核病检测。
局部炎性反应明显，皮厚差≥4 mm 判定为阳性牛；局部炎性反应不明显，2 mm ≤皮厚差＜4 mm 判定为可疑牛；无炎性反应，皮厚差＜2 mm 判定为阴性牛[2]。
奶牛结核病不同检疫方法比较
牛结核病主要是由牛型结核分支杆菌引起的一种人畜共患、慢性、消耗性传染病，病原菌可通过空气、接触或牛奶感染人畜，严重威胁着动物和人类健康[1]。
牛结核病的监测和净化在活畜上需要依赖快速、敏感、特异性强的诊断方法。
目前广泛应用的诊断方法主要包括结核菌素皮内变态反应（TST）、欧盟皮内比较变态反应试验（SICTT）和牛γ干扰素酶联免疫吸附试验（IFN-γ-ELISA）。
TST作为OIE指定法定检疫方法，优点是敏感性高，但操作费时费力，特异性差，容易出现假阳性或早期感染易漏检[2-3]。
SICTT是TST方法的改进，可排除检疫中禽结核干扰导致的非特异性变态反应的影响，以避免不必要的淘汰和损失，目前欧盟等国普遍作为活畜检疫确认试验[4]。
IFN-γ-ELISA检测试剂盒是外周血γ-干扰素体外释放检测法在实际中的应用，操作简单、敏感性和特异性高，目前已经得到全世界的广泛认可[5]。
本研究同时采用以上3种方法对河北省石家庄市栾城县某奶牛场进行平行检测，比较不同检疫方法对奶牛结核病阳性率的影响，为今后检疫和奶牛结核病的净化提供技术支撑。
1材料与方法1.1材料1）试验奶牛。
中国荷斯坦奶牛300头，试验奶牛外观健康，无任何结核病临床症状，统一TMR饲喂，自由饮水。
2）主要试剂。
牛型提纯结核菌素（牛PPD，青岛瑞尔生物技术有限公司，批号：P201906-001）；禽型结核菌素（禽PPD，青岛瑞尔生物技术有限公司，批号：P201906-001）；牛结核分枝杆菌IFN-γ检测试剂盒（青岛瑞尔生物技术有限公司，批号：P201906-001）。
3）器材。
剃毛刀、注射器、游标卡尺、酶标仪，CO2培养箱、细胞培养板、肝素钠采血管、移液器、枪奶牛结核病不同检疫方法比较路广计1王晓芳2*马宏伟1张涛3范京慧4刘天驹1轩秋燕1范葶莉5邵丽玮2程丽华6边青岩61.河北省动物疫病预防控制中心，石家庄050000；2.河北省畜牧兽医研究所，河北保定071000；3.河北省石家庄市动物疫病预防控制中心，石家庄050000；4.河北农业大学，河北保定071000；5.沧州职业技术学院，河北沧州061000；6.河北省饶阳县农业农村局，河北饶阳053900摘要采用牛结核菌素皮内变态反应试验（TST）、欧盟比较变态反应试验（SICTT）和牛结核γ干扰素酶联免疫吸附试验（IFN-γ-ELISA）对河北省石家庄市栾城县某奶牛场300头奶牛进行结核病平行检测，比较不同检疫方法对奶牛结核病诊断结果的影响，并分析对比检测结果。
深圳某养殖场奶牛结核分枝杆菌γ-干扰素检测与皮内变态反应比对试验
的 OD 值 - 禽 PPD 的 OD 值 <0.1 （2） 结果的有效性。只有当阳性对照 OD 值大于 0.700，
阴性对照 OD 值小于 0.150 时该试验才有效。 4 试验结果
（1） 牛型结核分枝杆菌 PPD 皮内变态反应试验结果 A 养殖场的 2 头奶牛呈阳性，其余均为阴性；B 养殖场 的 8 头奶牛呈阳性，其余均呈阴性。 （2） 牛结核 γ- 干扰素检测试验结果。 针对 A,B 场牛型结核分枝杆菌 PPD 皮内变态反应呈阳 性的 10 头奶牛进行该实验。A 养殖场的 1 头奶牛呈阳性，其 余均为阴性；B 养殖场的 5 头奶牛呈阳性，其余均呈阴性。 试验结果比对，见表 1。 5 结果分析 从表 1 中可知，对经初检皮内变态反应的试验筛选出的 阳性牛进行牛结核 γ- 干扰素检测试验和皮内变态反应复 检试验，两试验检测符合率较低。 （1） 牛型结核分枝杆菌 PPD 皮内变态反应试验 初检有 2 头结果呈现阳性的牛，不排除受禽型结核分枝 杆菌等引起非特异性假阳性的影响；复检结果呈现 0 头阳性 牛的情况，不排除主观肉眼观察皮皱差出现误差的影响。 综上所述：只靠皮内变态反应实验就确诊牛结核病是不 科学合理理的。 （2） 牛结核 γ- 干扰素检测试验 牛结核 γ- 干扰素检测试验通过用牛 PPD 和禽 PPD 分 别刺刺激全血，检测各全血样品中释放的 γ- 干扰素的差异 来判断牛结核病的阴阳性，排除了禽型结核杆菌引起的非特 异性反应的情况。试验结果表明：γ- 干扰素检测试验的阳 性率比皮内变态反应的阳性率高，可能与皮内变态反应存在 假阳性情况有关。 6讨论 现行国家标准有关牛结核病检测方法只有结核分枝杆 菌 PPD 皮内变态反应，但此法需肉眼观察皮皱差，主观性太 强，而且受其他型结核杆菌的干扰极大，假阳性率较高。若实 际检疫工作中用此法判定牛结核病，可能会有误判，会直接 导致养殖场的经济利益受损。γ- 干扰素检测试验，匹配相 应试剂盒标准说明，当前实验室检测牛结核工作大多使用国 外成熟产品，且该产品灵敏度高，具有较高的特异性，在现实 操作中更简便，结果判定更直接。鉴于以上优点，γ- 干扰素 检测试验用于检测牛结核病较现行国标方法具有更为广阔 的应用前景。
两种牛结核病检测方法的比较探索
两种牛结核病检测方法的比较探索作者：东毛来源：《农家致富顾问·下半月》2017年第12期摘要目的：比较两种牛结核病的检测方法。
方法：选择某奶牛场16头奶牛，分别利用变态反应试验与y-干扰素平行对比试验进行科学检测，比较两种方法的检测结果。
结果：两种检测方法的相符率高达93.75%，有且只有一头牛出现两种检测方法不一致的情况。
结论：变态反应试验适合在基层疫控机构推广，y-干扰素平行对比试验基于目前我国没有引进且成本高，推广起来有很大的难度。
关键词牛结核病；检测方法；比较探索本次研究的主要目的是对两种方法检测牛结核病的结果进行科学比较，从某奶牛场中挑选16头奶牛为分析对象，同时给予不同的方法进行检测，具体情况分析如下：1 材料与方法1.1 一般资料试剂：从哈药集团生物疫苗有效公司选购牛结核菌素，批号为201001；进口分装y-干扰素检测试剂由我国动物卫生与流行病学中心诊断试剂研究室所提供。
试验动物：选择某奶牛场的存栏奶牛为研究对象，该牛场大约有70头寸栏奶牛，产奶量普遍较低，奶牛的消瘦呈现出非常明显的渐进性，在2016年9月秋季检测出牛结核病阳性牛，现从中选出严重消瘦的奶牛共16头，进行从1到16进行编号。
1.2 方法1.2.1 牛分支杆菌结核菌素变态反应严格根据《动物结核病诊断》中的规定进行操作，不管牛大小，统一在皮下注射牛型结核分支杆菌PPD0.1ml，在72小时之内对各种炎性反应进行仔细观察，如局部是否出现肿胀和热痛等，在此基础上利用卡尺对皮皱厚度进行仔细测量。
若皮厚差在2毫米以下则为阴性牛，皮厚差超过4毫米则为阳性牛，皮厚差在2～4毫米之间则为疑似牛[1]。
1.2.2 y-干扰素平行对比试验严格按照相关规程进行操作。
第一，进行全血培养，利用肝素真空采血管将16头奶牛的血液采集起来，在25摄氏度下的条件下放置6小时，然后在24孔组织培养板中加入，将三管1.5ml分装抗凝血分别给每头牛，比高分别将PBS、禽PPD和牛PPD（刺激抗原）分别加入到三管中，在37摄氏度湿温培养箱中进行18小时的孵育，将上层血浆每孔400ul收集起来；第二，进行牛y-干扰素酶免疫试验[2]；第三，4个小时后在酶标仪上对OD450mm数值进行读取。
牛结核分枝杆菌γ-干扰素ELISA试验和牛结核菌素PPD试验检测奶牛结核病的探讨
关 键 词： 奶 牛； 结 核 病； 牛 结 核 分 枝 杆 菌；γ- 干 扰 素 ELISA 试验
结核病是由结核分枝杆菌引起的人畜共患的一种慢性传 染病。其病理特点是在多种组织器官形成肉芽肿和干酪样坏 死、钙化结核病变。牛结核病主要由牛型、人型和禽型结核 分枝杆菌引起，特别是奶牛最易感染本病。奶牛养殖做为经 济价值高，直接关系到我县农牧民的切身利益，虽然 2003 年 全县范围内奶牛存栏 100% 检测过结核病，但随着奶牛业不 断发展扩大，引进奶牛的同时，此病也被带入，已威胁到奶 牛业和从业相关人员的健康。
关键词：复合益生菌；白羽肉鸡；地养；球虫防控 近年来，白羽商品肉鸡的饲养已迈向规模化和集约化的 新阶段，随肉鸡品种生长速度和饲养密度的增加，地养肉鸡 的肠道问题尤为突出，其中以球虫病和有害菌的感染最为普 遍，随着抗球虫药物的长期使用，鸡球虫出现严重的抗药性， 甚至普遍存在单一虫株同时对多种抗球虫药物存在不同程度 抗药性情况，而有害细菌的耐药性更为严重，另外，消费者 对食品安全的要求不断提高，国家相继颁布了对各种药物的
γ-干扰素检测技术和皮内变态反应在奶牛结核病检测中的应用比较
γ-干扰素检测技术和皮内变态反应在奶牛结核病检测中的应
用比较
张强;王玉舜;鲍士兵
【期刊名称】《今日畜牧兽医》
【年(卷),期】2016(000)004
【摘要】本文对牛型提纯结核菌素（PPD）皮内变态反应试验和新型牛结核杆菌γ-干扰素检测技术进行比较，分析其优劣势。
实验结果表明，γ-干扰素检测技术特异性好、敏感性高、操作简便、易于标准化，但价格较高。
该方法可作为PPD皮内变态反应的平行试验，用于复核检查目前国家标准方法PPD皮内变态反应阳性牛。
【总页数】2页(P67-68)
【作者】张强;王玉舜;鲍士兵
【作者单位】[1]吉林大学动物医学学院,吉林130000;[2]天津市北辰区养殖业发展服务中心,天津300400
【正文语种】中文
【中图分类】S858.23
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1.γ-干扰素试验和皮试变态反应对检测奶牛结核病的比较 [J], 陈祥;徐正中;时振华;范峰;蒋锁俊;孟闯;黄根成;单锋丽;焦新安
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研究 [J], 豆思远;曹丽萍;王佳;周峰;程文杰
3.奶牛结核病PPD皮内变态反应检测技术应用中的问题讨论 [J], 何明发;李红伟;敖义鹏
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牛γ-干扰素EIA与TST检测牛结核病的比较
１ ２ ２ 肝 素 抗 凝 全 血 的 预 处 理 ： １ 定 量 吸 取 肝 素 抗 凝 全 ．． （） 血 ： 全 血 分 装 至 两 无 菌 Ｅ ｐ ｎ ｏ ｆ 中 ， 管 １ ５ｍｌ （ ） 将 ｐ ｅｄ ｒ 管 每 ． 。 ２
加 入 抗 原 ： 一 Ｅ ｐｎ ｏｆ 中加 入 牛 提 纯 结 核 菌 素 １ ｌ 在 ｐ ｅｄ ｒ 管 ５ ；
抗 凝。
着人 类 和 动物 的 健 康 ， 成 了 巨 大 的 经 济 损 失 。很 久 以 来 ， 造
Ｔ Ｔ一 直 是 诊 断牛 ＴＢ的唯 一 检 测 手 段 。Ｔ Ｔ 早 在 ｌ ９ Ｓ Ｓ ８ ０年 就 被 提 出 ， 至 今 仍 在 使 用 的 最 古 老 的 诊 断 试 验 ０ ”。ＴＳ 是 。 ｊ Ｔ 的 原 理 是 检 测 针 对 结 核 菌 纯 化 蛋 白衍 生 物 Ｐ Ｄ 的 以 细 胞 免 Ｐ 疫 为 基础 的迟 发 型超 敏 反 应 。最 近 ， 多 学 者 对外 周 血 Ｔ 淋 很
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１ ２ ３ 牛 一 干 扰 素 Ｅ Ａ 方 法 按 Ｂ ｖｇ ｍ 试 剂 盒 操 作 程 ．． Ｉ ｏ ｉａ
序 进 行 ：１ 加 入 ５ ｌ 释 液 至 需 要 的孔 内 。 （ ） 入 ５ １ （） Ｏ 稀 ２加 Ｏ 检 测 和 对 照样 本 至 含 有 稀 释 液 的 相 应 孔 内 。在 微 孔 板 震 摇
公 司 。牛 Ｐ Ｄ， 自黑 龙 江 省 生 物 制 品 一 厂 。 采 血 器 ， 自 Ｐ 购 购 浙 江 省 温 岭 求 精 塑 料 医 械 厂 。 游 标 卡 尺 ， 自上 海 市 牛 奶 购
牛型结核菌素皮内变态反应试验和_干扰素ELISA试验检测奶牛结核病的比较研究
牛结核病是由牛结核分枝杆菌引起的动物和人 的一种慢性细菌 性 疾 病。 在 家 畜 中，奶 牛 最 易 感 染
结核 病，其 次 是 水 牛 和 黄 牛。 世 界 动 物 卫 生 组 织
（ＯＩＥ）将牛结核病列为 Ｂ 类动物疫病。 多数国家均
畜 牧 兽 医 杂 志 第 ３３ 卷 第 ６ 期 ２０１４ 年
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的方法，不 仅 消 除 了 结 核 菌 素 试 验 结 果 的 主 观 性， 而且也使 检 测 更 及 时。 本 研 究 旨 在 通 过 比 较 ＰＰＤ 皮内变 态 反 应 法 和 ＩＦＮ－γＥＬＩＳＡ 方 法 在 检 测 奶 牛 结核病时的优缺点，旨 确 定 快 速 准 确 的 奶 牛 结 核 病 诊断方法提供参考，同 时 也 为 摸 清 甘 肃 省 奶 牛 结 核 病的流行情况提供技术支撑。
师，主要从事动物疫病防 控 工 作。Ｅ－ｍａｉｌ：ｄｏｕｌｉｎｇ １６３＠１６３．ｃｏｍ
“检疫－扑杀”的策略消灭 牛 结 核 病。 由 于 ＰＰＤ 皮 内 变 态 反 应 存 在 非 特 异 性 高 的 缺 点 ，常 会 造 成 误 杀 ， 因而探寻准确判断奶牛结核病的诊断新技术非常必 要。γ－干扰素（ＩＦＮ－γ）ＥＬＩＳＡ 检 测 是 利 用 结 核 杆 菌 抗原致敏的 Ｔ 淋 巴 细 胞，若 再 次 遇 到 相 同 抗 原 时， 可在短时间内产生ＩＦＮ－γ，通过 ＥＬＩＳＡ 方法定量测 定培养上清液中 的ＩＦＮ－γ 的 量，以 间 接 检 测 牛 结 核 病。ＩＦＮ－γＥＬＩＳＡ 检 测 法 的 敏 感 性 明 显 高 于 ＰＰＤ 皮内变态反应试验，作 为 最 大 限 度 检 测 奶 牛 结 核 病
两种方法检测奶牛结核病的比较分析
两种方法检测奶牛结核病的比较分析作者：王丽霞李爱华王会杰刘翠梅刘天驹李狲韩庆安来源：《中国动物保健》2015年第01期摘要：采用常规皮内变态反应（TST方法）对唐山、秦皇岛、沧州和石家庄四个市共计2204头奶牛进行牛结核病检测，采用IFN-γ试验方法对PPD检测结果为阳性、可疑的牛以及部分阴性牛进行复检。
将IFN-γ试验与TST检测结果相比较，其敏感性为78.26%，特异性为89.09%，符合率为84.33%。
研究表明单独使用PPD皮内变态反应方法在牛结核病的诊断方面存在特异性差的缺点，用IFN-γ试验对TST试验阳性和可疑牛进行复检可以提高特异性，避免造成假阳性牛的误杀；该方法在临床上适合推广应用。
关键词：奶牛结核病；皮内变态反应；IFN-γ试验牛结核病（Bovine Tuherculosis）是由分支杆菌属牛分枝杆菌所引起的一种慢性消耗性传染病，由于该病也感染人，所以是人畜共患病。
该病虽然能够感染猪、鹿、猴等动物，但牛最易感；而在牛中，黄牛和牦牛感染级别较大，水牛易感性较高，但奶牛最易感染。
我国将该病列为二类动物疫病，而OIE将其列为需通报的B类动物疫病。
当前，人民对牛奶和牛肉的需求量较大，我国奶牛业发展较快，但通过对人结核病患者病原统计分析，有10%结核病病原为牛分枝杆菌，故该病控制的好坏，直接关系到奶牛养殖业的发展和居民的身体健康，因此及时检测、淘汰结核感染的奶牛具有重要的现实意义。
牛全血干扰素试验方法（牛IFN-γ试验方法）是牛结核诊断的一种新型的牛结核诊断方法，由Wood等首先将该方法用于牛结核病的检测，而澳大利亚利采用该方法作为牛结核病根除计划的首选试验方法运用于临床，效果显著，并于1997年底宣布消灭了牛结核病。
当前，该方法在欧盟和美国等发达国家也得到了承认，成为继TET方法之外的唯一的法定活畜牛结核病诊断试验。
当前我国主要采用颈部皮试变态反应（TST法）来进行牛结核病的检疫，对阳性牛进行扑杀，对可疑牛隔离后再次进行检疫，而国外采用的用于牛结核病检疫的牛IFN-γ试验方法目前在我国尚未正式推荐使用。
γ-干扰素检测技术对奶牛结核病检疫的初步应用
γ-干扰素检测技术对奶牛结核病检疫的初步应用
徐继鹏;刘建文
【期刊名称】《中国动物保健》
【年(卷),期】2013(15)2
【摘要】本文在应用牛型提纯结核菌素(PPD)变态反应试验进行奶牛结核病检疫的基础上，引进牛结核分枝杆菌γ-干扰素检测技术，初步开展了新型检疫技术的应用研究，证明γ-干扰素技术特异性好，敏感性高，操作简便，易于标准化，可作为目前国家标准牛型PPD变态反应的平行试验，完善我国奶牛结核病检疫和净化工作的技术体系。
【总页数】3页(P33-35)
【作者】徐继鹏;刘建文
【作者单位】天津市武清区动物疫病预防控制中心天津301700;天津市动物疫病预防控制中心天津301700
【正文语种】中文
【相关文献】
1.γ-干扰素检测技术和皮内变态反应在奶牛结核病检测中的应用比较 [J], 张强;王玉舜;鲍士兵;
2.皮试法与γ-干扰素ELISA法在奶牛结核病检疫中的对比试验 [J], 杨显超;李凯航;吴秀娟;陶田谷晟;王建
3.应用皮内变态反应和γ-干扰素体外释放试验检测奶牛结核病的比较研究 [J], 邓永强;阳爱国;郭莉;侯薇;文豪;陈冬;吴宣;邢坤;张代芬
4.牛结核γ-干扰素ELISPOT方法在奶牛结核病检疫的应用 [J], 杨显超; 李凯航; 陶田谷晟; 赵洪进; 杨德全; 吴秀娟; 卢军; 王建
5.奶牛结核病与布病杆菌病的检疫应用 [J], 潘冰
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牛结核分枝杆菌γ—干扰素在牛结核病检测中的优势
牛结核分枝杆菌γ—干扰素在牛结核病检测中的优势作者：孙涛来源：《现代畜牧科技》2015年第01期牛结核病是由牛结核枝杆菌引起的一种人畜共患的慢性传染病。
近年来，人结核病阳性检出率逐年上升，世界卫生组织在1993年4月宣布“全球结核病紧急状态”，1998年又重申“遏制结核病的行动刻不容缓”，并将每年3月24日定为“世界防治结核病日”。
根报道，约有10.6%的人结核是由牛分枝杆菌引起的，牛结核病中的7%是由人结核杆菌引起。
WHO同时指出，在那些还存在牛结核病的国家中，人类始终受到牛结核病的威胁，除非着手将其消灭，否则人类结核病的防治是不会成功的。
因此，控制牛结核病的是关系到控制人类结核病能否成功的重要因素。
1 流行特点牛结核分枝杆菌可以感染不同种属的温血动物，甚至包括一些禽类，其中牛是家畜中最易感的，特别是奶牛。
该病主要通过呼吸道和消化道传播，也可通过交配传播。
结核病牛可通过痰液、奶、粪便等向外排出结核杆菌污染环境，吸入被污染的飞沫是牛结核病传染的最主要方式，且少量牛分枝杆菌即可引起感染。
采食有传染的粘液、粪便、尿液甚至牛奶都可引起感染。
人类多因牛结核分枝杆菌或结核分枝杆菌感染而致病，其感染途径主要是食入未经检疫的畜产品，尤其是饮用未经巴氏消毒或煮沸的患有结核牛的奶而经消化道感染，犊牛感染牛结核分枝杆菌者最多。
另外，经常与患结核病牛接触的人员，可由于病畜的咳嗽而经呼吸道感染结核病。
牛结核病不仅古老，而且分布很广，世界各地都有发生。
美国是世界上第1个消灭牛结核病的国家，美国早在1957年就宣布为无结核病牛群，但由于其他动物感染结核杆菌，特别是野生动物和观赏动物的结核病以及人类结核病的存在，有感染牛的可能性，所以美国的牛群仍在不断地接受检疫并被处于高度戒备之中。
在广大的第三世界国家仍严重地流行，感染率在5%～10%不等，高者可达20%，严重影响着人类的健康和养牛业的发展。
近年来，我国奶牛养殖规模不断扩大，牛饲养量迅速增长，饲养模式呈现多元化，牛结核病的风险随之增加，控制和消灭牛结核病已经成为主要目标之一。
牛结核分枝杆菌y-干扰素在牛结核病检测中的优势
牛结核分枝杆菌y-干扰素在牛结核病检测中的优势牛结核是一种常见的传染病，在全球范围内都有发生。
它由分枝杆菌通过呼吸道或消化道等途径传播，会引起牛只的呼吸系统、淋巴组织、胸腺和泌乳器等部位的感染。
牛结核对于农业和畜牧业的发展会造成重大的经济损失，而且它也是一种致病性很强的病原体，会对牛只的身体健康和人类的健康造成直接或间接的危害。
为了及早发现牛结核的感染情况，可采用很多种方法，其中牛结核分枝杆菌y-干扰素检测方法是一种具有优势的检测方法。
牛结核分枝杆菌y-干扰素检测方法牛结核分枝杆菌y-干扰素是一种注射剂，由基因重组技术制备而成。
它含有重组的人类y-干扰素基因和牛结核的菌株，能够诱导牛只体内分泌y-干扰素，通过检测牛只的血清y-干扰素含量，来对牛结核进行诊断。
牛结核分枝杆菌y-干扰素检测方法的优势灵敏度高牛结核分枝杆菌y-干扰素检测方法可以检测到牛只体内非常微小的牛结核分枝杆菌感染，因此它的灵敏度非常高。
通过对标准菌株和实际样本的检测，研究人员发现该方法可以检测到1-10个CFU/mL的分枝杆菌。
特异性好牛结核分枝杆菌y-干扰素检测可以特异性地检测到牛结核分枝杆菌，不会对其他的细菌或病原体产生干扰。
因此，该方法可以避免错误的诊断和误判。
操作简便牛结核分枝杆菌y-干扰素检测的操作比较简便，只需要提取牛只血清并将其置于检测板中，加入指定稀释的检测液，进行相应的反应，最后读取检测结果即可。
该检测方法的简便性有助于加快检测速度，提高检测效率。
确诊效果好牛结核分枝杆菌y-干扰素检测结果非常准确和可靠，不同于其他检测方法可能会因为疫苗接种等原因产生假阳性或假阴性的结果。
此外，通过对大量临床真实样本的检测，牛结核分枝杆菌y-干扰素检测方法可以发现一些被其他检测方法无法发现的牛结核患者。
结论牛结核分枝杆菌y-干扰素检测方法具有灵敏度高、特异性好、操作简便以及确诊效果好等优势，可以在牛结核病的诊断和监测中被广泛应用。
两种奶牛结核病检测方法与PPD检测符合率比较
２０１８年第３５卷第１０期87两种奶牛结核病检测方法与PPD 检测符合率比较石 琴，袁立岗，蒲敬伟，沙 丽，柳 炜（新疆生产建设兵团第十二师畜牧兽医工作站，新疆乌鲁木齐 830009）摘 要：对新疆某规模化奶牛场的2 106头奶牛用PPD 进行普检，共检出结核病阳性牛26头；随机采集20头阴性牛和26头阳性牛抗凝血和全血，进行牛结核γ-干扰素ELISA 试验和胶体金检测，然后将检测结果与PPD 检测结果进行比对。
结果显示：3种方法检测均为阳性的16份，均为阴性的10份，总符合率为57%。
PPD 和γ-干扰素ELISA 相比，均为阳性的23份，阳性符合率为88%（23/26），均为阴性的11份，阴性符合率为55%（11/20）；PPD 和胶体金检测相比，均为阳性的19份，阳性符合率为73%（19/26），均为阴性的19份，阴性符合率为95%（19/20）。
结果表明：3种检测方法的符合率较低；每种检测方法各有优缺点，γ-干扰素ELISA 敏感性较高，而胶体金特异性较高。
因此，在实际操作中应根据需要，合理选择相应检测方法。
关键词：奶牛结核病；PPD ；γ-干扰素；胶体金；符合率中图分类号：S 855.2 文献标识码：B 文章编号：1005-944X （2018）10-0087-03DOI ：10.3969/j.issn.1005-944X.2018.10.023Comparative Analysis on the Coincidence Ratesbetween PPD and Two Other Methods in Cow Tuberculosis DetectionShi Qin ，Yuan Ligang ，Pu Jingwei ，Sha Li ，Liu Wei（Animal Husbandry and Veterinary Stations of 12th Division of Xinjiang Production and Construction Corps ，Urumuqi ，Xinjiang 830009，China ）Abstract ：In this study ，using the PPD method ，2 106 cows in a large-scale dairy farm in Xinjiang were tested ，a total of 26 cows were detected tuberculosis （TB ）positive. Then whole blood derived from 20 TB-negative cows and 26 TB-positive cows were randomly collected to carry out γ-interferon ELISA test and colloidal gold test. Then the detection results were compared with PPD method. According to the comparative results ，there were 16 samples detected TB-positive and 10 samples detected negative by both three methods ，the detection coincidence rate was 57%. For the comparison between PPD and γ-interferon method ，23 samples were detected TB-positive ，with a positive coincidence rate of 88%（23/26）；11 samples were detected TB-negative ，with a negative coincidence rate of 55%（11/20）. For the comparison between PPD and colloidal gold test ，19 samples were detected positive ，with a positive coincidence rate of 73%（19/26），19 samples were detected negative ，with a negative rate of 95%（19/20）. As a conclusion ，the coincidence rates among the three methods for TB detection were relatively low. Each method had its advantage and disadvantage ，such as the sensitivity of γ-interferon ELISA test was highest ，while colloidal gold test possessed the highest specificity. Hence ，the detection method should be reasonable selected on the basis of actual requirements and needs.Key words ：cow tuberculosis ；PPD ；γ-interferon ；colloidal gold test ；coincidence rate牛结核病是由牛型结核分支杆菌引起的一种人兽共患传染病，奶牛最易感，水牛、黄牛、牦牛、鹿等多种动物也易感。
γ-干扰素法检测奶牛结核病的试验报告
Key words: Bovine tuberculosis; Gamma-interferon
牛结核病是由结核分枝杆菌引起的人畜共患慢
学等[2]，传统的细菌培养方法虽然结果准确，但需
性传染病，季节性不明显，病原主要有三个型，通
耗时数周时间，不适用于活畜的检疫[3]；而常用的
常牛结核病的主要病原是牛型结核分枝杆菌，对奶
省去 3 次牛型结核菌素皮内变态反应检测的繁琐，既减少养殖场户经济损失，又节省人力、物力。
关键词：牛结核；γ-干扰素
中图分类号：S858.23
文献标识码：A
文章编号：1672-9692(2019)11-0029-04
Gamma-interferon assay for tuberculosis in cows
均 OD 值：牛 γ-干扰素阴性对照 OD 值＜0.130，各阴
1
样品及来源
性对照重复孔 OD 值差值≤0.040。牛 γ-干扰素阳性
牛结核菌素皮肤试验后的牛全血。
对照 OD 值＞0.700，阳性对照重复孔 OD 值的变化幅
诊断试剂及原理
度不超过其平均 OD 值得 30%。如果有一条标准不符
BOVIGAMTM 牛结核分枝杆菌 γ-干扰素检测试剂
结核菌素试验受影响因素较多，准确性也不是很高，
牛而言，致病力最强，人型和禽型结核分枝杆菌也
需在活体上进行，也不是一种理想的方法。γ-干扰
能引起牛结核。病牛通常表现为低热、咳嗽、消瘦、
素释放试验是一种活体外检测技术，被 OIE 确认为
生产性能下降，最后死亡。人类可通过直接接触、
作为牛结核病辅助确诊试验，也是继结核菌素变态
modern journal
γ-干扰素试验和皮试变态反应对检测奶牛结核病的比较
ＣＨＥＮ ａ ｇ ＸＵ ｈ ｎ —ｈ ｎ Ｓ ｈ ｎ ｈ ａ Ｆ ｎ 。 Ｊ ＡＮＧ ｕ —ｕ 。 Ｍ ＥＮＧ ｕ ｎ ， Ｘｉｎ ， Ｚ ｅ ｇ ｚ ｏ ｇ ， ＨＩＺ ｅ — ｕ ， ＡＮ Ｆｅ ｇ ，Ｉ Ｓ ｏｉ ｎ ， Ｃｈ ａ ｇ
９ ８
中 国 人 兽 共 患 病 学 报 验室 ， 在采 血后 ８ ｈ内进行 刺激 培养 。将 全血样 品无
业 的发 展 ， 是公 共卫 生 的重大 威胁 。据 统计 ， 结 也 人 核 病有 １ 以上 由牛 分 枝 杆 菌 引起 ｌ 。 因此 掌 握 ０ ２ ］
菌分装 至 ２ ４孔 板 中 ， 份 血 样 分装 ３孔 ， ． ｍＩ 每 １５ ／
Ｈ ＵＡＮＧ ｎ ｃ ｅ ｇ Ｓ ＡＮ ｎ ～ｉ Ｊ ＡＯ ｎ ａ Ｇｅ —ｈ ｎ ， Ｈ Ｆｅ ｇ ｌ ，Ｉ Ｘｉ—ｎ
（ ． ａ ｇｓ ｙ Ｌ ｂｏ ｏ ｏｉ ，Ｙ ｎ ｚ ｏ ｉｅ ｓｔ １ Ｊｉｎ ｕＫｅ ａ ｙ Ｚｏ ｎ ｓｓ ａ ｇ ｈ ｕ Ｕｎ ｖ ｒｉｙ，Ｙ ｎ ｚ ｏ ２ ０ ９，Ｃｈｎ ａ ｇ ｈ ｕ ２ ５０ ｉａ；
孔 。 向各 孔 中 分 别 无 菌 加 入 １ ０ Ｉ Ｂ 、 ｉ ０ ￣ Ｐ Ｓ Ａｖａ ｎ
我 国奶 牛结 核病 现 状 、 测 淘 汰感 染 奶 牛 具 有重 要 检
的意 义 。
Ｐ Ｄ、 ｏ ｉｅＰ Ｄ， 荡 混 匀 ｌ ｎ Ｐ Ｂ ｖｎ Ｐ 震 ｍｉ。将 含 有 血 液 与 抗原的 ２ ４孔 板 置 于 ３ ℃ 湿 温 培 养 箱 中 孵 育 ２ ｈ ７ ４。 次 日从 各培 养 孔 吸取 ５ ０ Ｌ血 浆 上 清转 入 １ ５ｎ ０ｆ ． ｒＩ 离 心管 中 ， 即为刺 激产 生 的 一 干扰 素 上 清 。以 Ｍｙ —
γ- 干扰素释放法检测奶牛结核病的比较试验
Ａ Ｃｏｍｐａ ｒ ａ ｔ ｉ ｖｅ Ｓ ｔ ｕ ｄｙ ｏ ｆ Ｙ — Ｉ ｎｔ ｅ ｒ ｆ ｅ ｒ ｏ ｎ Ｒｅ ｌ ｅ ａ ｓ ｅ Ａｓ ｓ ａ ｙ ｉ ｎ Ｂｏ ｖ ｉ ｎ ｅ Ｔｕ ｂｅ ｒ ｃ ｕｌ ｏ ｓ ｉ ｓ
Ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ８ ９（ ７ ４ ｐ ｏ ｓ ｉ ｔ ｉ ｖ ｅ ／ １ ５ ｓ ｕ ｓ ｐｉ ｃ ｉ ｏ ｕ ｓ ） ｄ ａ ｉ ｒ ｙ Ｃ Ｏ ＷＳ ｐ ｒ ｅ ｌ ｉ ｍｉ ｎ ａ ｒ ｉ ｌ ｙ ｓ ｃ ｒ ｅ ｅ ｎ ｅ ｄ ｗｉ ｈ ｔ ｓ ｋ ｉ ｎ ｔ ｅ ｓ ｔ ｗｅ ｒ ｅ ｔ ｅ ｓ ｔ ｅ ｄ ｂ ｙ Ｙ— ｉ ｎ ｅ ｒ ｆ ｅ ｒ ．
Ｙ 干扰素释放法检测奶牛结核病 的比较试 验
倪 谷 音 ， 毛 爱 民 ，范 锋 （ １ ． 无锡 市 动物 园管理 处 ，江 苏无锡 ２ １ ４ ０ ０ ０ ； ２ ． 无锡 市动物 疫 病预 防控 制 中心 ，江苏无锡
摘
２ １ ４ ０ ２ １ ）
要： 目的 评价 ｙ 一 干扰 素释放 试验 （ Ｉ Ｇ Ｒ Ａ）牛结核 病检 疫过程 中的效果 。方法 在牛结核病检疫过程 中对
ｏ ｎ ｒ ｅ ｌ ｅ ａ ｓ ｅ ａ ｓ ｓ ａ ｙ （ Ｉ ＧＲＡ） ， ｓ ｉ ｍｐ ｌ ｅ ｃ ｅ ｒ ｖ ｉ ｃ ａ ｌ ａ ｌ ｌ ｅ ｒ ｇ ｙ ｓ ｋ ｉ ｎ ｔ ｅ ｓ ｔ（ Ｓ ＣＴ） ａ ｎｄ ｃ ｏ ｍｐ ａ ｌ ｔ ｅ ｓ ｔ（ ＣＣＴ）．
Ａ ｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ：０ｂ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ Ｔ ｏ ｅ ｖ ａ ｌ ｕ ａ ｔ ｅ ｔ ｈ ｅ ｅ ｆ ｆ ｅ ｃ ｔ ｏ ｆ Ｙ －ｉ ｎ ｔ ｅ ｒ ｆ ｅ ｒ ｏ ｎ ｒ ｅ ｌ ｅ ａ ｓ ｅ ａ ｓ ｓ ａ ｙ （ Ｉ Ｇ ＲＡ） ｉ ｎ ｂ ｏ ｖ ｉ ｎ ｅ ｔ ｕ ｂ ｅ ｒ ｃ ｕ ｌ ｏ ｓ ｉ ｓ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ．
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2013年第10期畜牧兽医科技信息社,1979：20-64.[2]李璞.黑龙江省的淡水螺类采集报告[J].哈尔滨医科大学学报,1956（3）:41-52.[3]齐钟彦,等.中国动物图谱—软体动物第四册[M].北京:科学出版社.1985：4-23.[4]刘月英.白洋淀及其附近地区的淡水螺类[J].动物学报,1961,13（1-4）:123-132.[5]刘月英，等.淡水螺类与人们的关系[J].动物学杂志,1977,3:46-48.[6]周贵,等.东毕血吸虫中间宿主—淡水螺的研究[J].吉林农业大学学报,1996,18（1）:59-63.[7]唐崇惕,等.内蒙古科尔沁草原绵羊不同虫龄土耳其斯坦东毕吸虫及虫卵孵化的实验观察[J].动物学报,1990,36（4）:366-375.[8]唐崇惕,等.内蒙科尔沁草原淡水螺吸虫幼虫期的调查研究[J].动物学报,1986,32（4）:335-341.牛结核病（bovine tuberculosis）是由牛型分枝杆菌等所引起的一种人兽共患的慢性消耗性传染病，被国际动物卫生组织OIE列为需通报的动物疫病。
目前，我国主要采用牛型提纯结核菌素（PPD）进行单纯颈部皮试变态反应（SCT）来进行牛结核病的检疫，对于阳性牛应进行隔离或扑杀，但是许多被扑杀的牛并没有区分可能检疫方法照成的假阳性或，这对于牛结核病的检疫，奶牛业的发展造成了巨大的阻力。
掌握我市奶牛结核病现状、检测淘汰感染奶牛意义重要。
因此采用灵敏度更高、特异性更好的检测方法具有广泛应用价值。
为此，本研究旨在γ-干扰素释放试验（IGRA）的应用优势，通过比较单纯颈部皮试变态反应（SCT）、比较皮试变态反应（CCT）和γ-干扰素释放试验（IGRA）之间的效果，为临床实际应用提供依据。
1材料与方法皮肤试验用牛型PPD、禽型PPD为中国兽医监察所购买。
BOVIGAM’试剂盒购自瑞士Prionics公司。
我市春季奶牛两病监测中单纯牛型PPD初筛为结核病阳性或疑似阳性的奶牛，共计89头。
其中粗筛判为阳性的74头，可疑的15头。
奶牛尾静脉无菌采血5mL／头，将采集的血液置于肝素钠抗凝管中，轻轻颠倒混匀，使肝素钠溶解。
室温下将血样运送到实验室，在采血后8h内进行刺激培养。
将全血样品无菌分装至24孔板中，每份血样分装3孔，1.5mL／孔。
向各孔中分别无菌加入100μL PBS、A-VianPPD、Bovine PPD，震荡混匀1min。
将含有血液与抗原的24孔板置于37℃湿温培养箱中孵育24h。
次日从各培养孔吸取500μL血浆上清转入1.5mL离心管中，即为刺激产生的γ-干扰素上清。
以Prionics公司购得的试剂盒检测牛全血上清液中的γ-干扰素，具体操作参照试剂盒说明书进行。
结果判定标准：牛型PPD刺激上清的OD值-PBS刺激上清的OD值≥0.1，且牛型PPD刺激上清的0D值-禽型PPD刺激上清的0D值≥0.1判为阳性；牛型PPD刺激上清的OD值-PBS刺激上清的OD值<0.1或牛型PPD刺激上清的0D值-禽型PPD刺激上清的0D值<0.1，则判为阴性。
试验参照国家标准《动物结γ-干扰素释放法检测奶牛结核病的比较试验毛爱民1，倪谷音2，范锋1（1.江苏省无锡市动物疫病预防控制中心；2.无锡市动物园管理处，无锡214000）摘要：目的评价r干扰素释放试验（IGRA）牛结核病检疫过程中的效果。
在牛结核病检疫过程中对皮试初筛为结核病和疑似结核病的89（74/15）头奶牛同时进行γ-干扰素试验、单纯颈部皮试变态反应（SCT）和比较皮试变态反应（CCT）检测，结果单纯颈部皮试变态反应二次检疫中89头牛均判为阳性，单纯颈部皮试变态反应与比较皮试变态反应的阳性符合数为67头。
阳性符合率为75.3%；γ-干扰素释放试验和单纯颈部皮试变态反应检测两者的阳性符合数为64头，阳性符合率为71.9%；γ-干扰素释放试验与比较皮试变态反应的阳性符合数为58头，阳性符合率为79.5%。
阴性符合数为16头，阴性符合率为48.4%。
结论γ-干扰素释放试验在保持较高灵敏度的同时，具有比变态反应更好的特异性。
关键词：牛结核；r干扰素试验；单纯颈部皮试变态反应；比较皮试变态反应DOI:10．3969/J.ISSN．1671-6027．2013．10.013试验研究302013年第10期畜牧兽医科技信息核病诊断技术（GB／T18645—2002）》进行，仅采用牛型PPD在奶牛颈部进行皮试变态反应，剂量为2000U（IU）／头，分别于注射前和注射后72h测量皮肤厚度，并计算出皮厚差，依据国家标准判断结果，对粗筛和二次复核均为可疑的判为阳性。
试验参照OIE《动物疫苗和诊断手册》中牛结核病诊断方法进行，该方法在欧盟（EU）国家广泛使用，并以议会指令64／432／EEC推荐。
在牛颈部同时分点注射牛型和禽型PPD，使用剂量均为2000IU／头，禽型PPD注射位点在牛型PPD下方间隔约10～15cm处。
分别于注射前和注射后72h测量牛型PPD和禽型PPD注射处的皮肤厚度，并计算出各自的皮厚差。
如果牛型PPD的皮厚差大于禽型PPD的皮厚差且超过4mm判为阳性，1～4mm为可疑，小于或等于禽型PPD的皮厚差为阴性。
2结果SCT、CCT、IGRA三种方法对89头牛的检疫结果为：SCT检出阳性89头，检出率（复核判定）100%，CCT检出阳性67头，检出率（与SCT符合率）75.3%，IGRA检出阳性64头，检出率（与SCT符合率）71.9%。
（表1）CCT、IGRA二种方法对检出的阳性牛的结果差异为：共同检出为阳性的58头，阳性符合率79.5%，共同检出阴性的16头，阴性符合率48.4%，检出结果有差异的15头，其中CCT阳性而IGRA阴性的9头，IGRA阳性而CCT阴性的6头。
（表2）表2CCT、IGRA二种方法对检出的阳性牛的结果比较3分析和讨论牛结核病的诊断方法主要有病原学诊断和免疫学诊断。
病原学诊断包括传统的细菌学检测和分子生物学诊断技术。
但目前分子生物学诊断技术（PCR诊断）敏感性较差，细菌学检测则需要采集死亡家畜的病料来检测,因此病原学诊断不适合大规模的活畜检疫。
牛结核病的免疫学检测方法包括血清学检测和细胞免疫检测，一般认为分枝杆菌引起的机体免疫应答以细胞免疫为主，因此检测特异性抗体的EILSA方法应用价值受限。
目前在我国牛结核病检疫过程中，主要采用SCT，但该方法存在较多的假阳性。
另外，该方法具有操作过程困难。
试验所需时间较长、受外界干扰因素较多、结果判定主观性较强等一系列缺点。
在本实验过程中，我们将SCT、CCT、IGRA进行了比较分析。
结果显示虽SCT具有较高的检出率，但其特异性不好。
该方法的基本原理同结核菌素皮内变态反应。
但整个操作过程在体外进行。
牛型、禽型PPD同时刺激可以有效区分牛分枝杆菌感染和环境中的禽分枝杆菌的干扰。
该方法克服了皮试变态反应的技术性、主观性以及环境分枝杆菌的干扰问题，同时还可以同其他疾病的检测相结合，尤其是奶牛两病普查时可以进行一次采血后可以同时进行牛结核病和布鲁氏菌病的检测，既节省了人力物力和时间，又可以减少对奶牛的刺激，防止造成产奶量的下降。
IGRA已被OIE认可，可作为牛结核病的辅助确诊试验，并在欧盟、美国、澳大利亚和新西等被批准为正式试验。
以IGRA作为结果判定标准，可排除25头牛感染牛结核病，削减损失。
实验结果显示，SCT虽具有较好的敏感性，阳性检出率明显高于IGRA，但与IGRA相比。
特异性较低，可能的主要原因之一是SCT检出的阳性牛中，有相当一部分是由禽结核感染照成的干扰，通过CCT法也可证实这一特点。
IGRA法敏感性和特异性与OIE《动物疫苗和诊断手册》在欧盟（EU）国家广泛使用CCT法对比，本实验显示者的差异性不大，可推荐使用，切前者保持较高灵敏度的同时，具有后者更好的特异性。
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