γ-干扰素体外释放试验
γ干扰素释放实验的原理
γ干扰素释放实验的原理γ干扰素（Interferon gamma，IFN-γ）是一种由免疫细胞产生的重要分子信号物质，对机体的免疫反应起着重要的调节作用。
γ干扰素释放实验是一种评估机体免疫功能的常用方法之一，可以检测特定细胞（通常是T细胞）对某种刺激物质引起的γ干扰素分泌反应。
γ干扰素释放实验的原理主要涉及以下几个方面：1. 细胞样本的准备：γ干扰素释放实验通常使用外周血单个核细胞（Peripheral blood mononuclear cells，PBMCs）或组织细胞作为细胞样本。
这些细胞样本可以通过静脉采集外周血或组织活检等方式获取。
在实验前，需要对细胞进行处理，如离心、洗涤和培养，以确保细胞的状态良好并有足够的数量。
2. 刺激物质的选择：γ干扰素释放实验中常用的刺激物质主要包括抗原、药物或其他具有免疫刺激性的物质。
抗原可以是病原体的特异性成分，如细菌、病毒或其他微生物产生的蛋白质或多肽。
药物刺激物可以是某些药物对机体免疫系统的直接或间接作用引起的免疫反应。
刺激物质的选择应该与样本来源和实验目的相匹配。
3. 实验方法的选择：γ干扰素释放实验可以通过多种方法进行，如ELISA（酶联免疫吸附测定法），ELISPOT（酶联免疫斑点法），流式细胞术等。
这些方法的选择取决于实验的需要和可用设备的条件。
比较常用的方法是ELISPOT法，该方法可以评估单个细胞生产γ干扰素的能力，形成的斑点数量与细胞产生的γ干扰素水平成正比。
4. 数据分析：γ干扰素释放实验得到的数据需要进行合理的分析和解释。
通常，根据刺激物质和实验目的的不同，可以采用差异分析、统计学方法等对数据进行处理。
数据的分析和解释可以为研究者提供了解细胞免疫功能的信息。
通过γ干扰素释放实验，我们可以了解机体对刺激物质的免疫反应程度和免疫调节功能。
这对于疾病的诊断、药物研发和免疫治疗等方面具有重要意义。
总结回顾：γ干扰素释放实验是一种评估机体免疫功能的方法，通过检测特定细胞对刺激物质引起的γ干扰素分泌反应来评估免疫反应的程度和调节能力。
γ干扰素释放实验的原理
γ干扰素释放实验的原理γ干扰素（interferon-gamma，IFN-γ）是一种重要的细胞因子，是T细胞、自然杀伤细胞（NK细胞）和淋巴细胞等免疫细胞产生的，对免疫应答和抗病毒、抗肿瘤等方面具有重要的生物学功能。
γ干扰素的释放实验可以用来检测患者免疫系统的功能状态，也可以用来评价特定病原体感染、免疫细胞功能、自身免疫疾病等的发生发展和治疗反应。
1. 细胞治疗法的原理：γ干扰素释放实验主要是通过采集患者的外周血单个核细胞（Peripheral Blood Mononuclear Cells，PBMCs），然后经过体外培养处理，刺激其释放γ干扰素。
在培养过程中，添加特定的激活剂（如病毒、细菌成分或特定抗原）刺激PBMCs。
刺激后，PBMCs 中的T细胞被激活并释放γ干扰素。
通过检测细胞培养液中γ干扰素的浓度，可以间接反映患者免疫系统对刺激剂的反应能力。
2.γ干扰素的检测原理：γ干扰素的检测方法主要有酶联免疫吸附法（ELISA）、流式细胞术和放射免疫测定法（RIA）等。
其中，ELISA是最常用的检测方法。
ELISA方法利用特异性抗体对γ干扰素进行捕获和检测，可以测定培养液中γ干扰素的浓度。
流式细胞术可以利用荧光修饰的特异性抗体直接检测PBMCs中γ干扰素的表达；RIA方法则利用放射性同位素标记的特异性抗体鉴定γ干扰素。
3.激活剂的选择：γ干扰素释放实验中的激活剂选择对实验结果至关重要。
常用的激活剂包括病毒成分（如病毒感染的细胞裂解液）、特定抗原（如结核分枝杆菌抗原）、细菌成分（如脂多糖）等。
选择合适的激活剂可以最大程度地激活免疫细胞，并促使其释放γ干扰素。
4. 结果判读：γ干扰素的释放实验结果一般用γ干扰素的水平来表示，通常以累积浓度（pg/mL）作为评估指标。
通过对照组（如正常人群）和患者组进行对比，可以评估患者的免疫功能状态。
比如，如果患者的γ干扰素水平显著低于正常人群，可以提示免疫功能受损；而如果γ干扰素水平显著高于正常人群，则可能存在其中一种免疫反应异常。
γ干扰素释放试验标准操作流程
γ干扰素释放试验标准操作流程γ干扰素释放试验标准操作流程概述•γ干扰素释放试验（gamma interferon release assay）是一种用于检测某些感染病原体引起的细胞免疫反应的方法。
•本文将详细说明γ干扰素释放试验的标准操作流程，包括前期准备、实验步骤、数据分析等内容。
前期准备1.确保实验室拥有所需设备和试剂。
2.准备受试者血样（采用血液抽取方法）。
3.验证实验室的操作人员已经接受相关培训，熟悉操作步骤和安全注意事项。
实验步骤1.血样准备–将采集的血样转移到合适的试验管中，确保血样完整且无凝块。
–使用离心机离心血样，将血细胞和血浆分离开来。
2.细胞培养–取得合适的细胞培养板，加入培养基。
–将离心后的血细胞加入培养基中，控制细胞密度在合适范围内。
–孵育细胞，保持适当的温度、湿度和二氧化碳浓度。
3.刺激试剂添加–在培养的细胞上加入激发剂，如特定抗原。
–同时设置阴性对照（如未加刺激剂的细胞）和阳性对照（如已知患者血样）。
4.孵育试验–将细胞培养板放入恒温箱中，保持合适的孵育时间和条件。
–注意观察培养过程中的任何异常变化，记录相关信息。
5.液相检测–采用合适的方法（如ELISA等）检测培养液中的γ干扰素水平。
–按照厂家指南操作试剂盒，记录结果并进行质量控制的数据分析。
1.收集所有实验数据，包括阳性对照、阴性对照和受试者样本的γ干扰素水平测定结果。
2.进行质量控制分析–首先，检查实验数据是否符合预期的范围。
–其次，对比阳性对照和阴性对照的水平，确保实验结果可靠。
3.数据解释–根据实验结果判定受试者是否对特定抗原产生γ干扰素反应。
–结合临床资料和相关标准，进行结果的解读和诊断。
结论•本文提供了γ干扰素释放试验标准操作流程的详细说明，以帮助实验室完成该项实验。
•严格按照操作流程进行实验可提高实验的可重复性和结果的准确性。
•数据分析部分应根据实验目的和临床背景进行合理解读，以辅助疾病的诊断和研究。
IFN-γ体外释放检测法
IFN-γ释放试验结核病潜伏感染检测是结核病诊断中的一大难题，结核菌感染者大部分（约90%）处于潜伏感染状态，临床检测及X光胸透不能发现异常状况。
此外，由于儿童普遍实行卡介苗计划免疫，结核菌素（PPD）皮内变态反应因不能区分卡介苗免疫与结核菌感染而无法应用。
γ-干扰素释放试验（interferon gamma release assay, IGRA）将结核菌特异性抗原加入受试者的血液标本或者含有分理处的外周血单核细胞的培养基中进行孵化，如果受试者受到过结核分枝杆菌感染，那么被结核菌激活的记忆T细胞就会对这些特异性抗原产生反应，发生增殖分化并释放出γ-干扰素以及其他一些细胞因子，通过检测γ-干扰素的释放水平来判断是否存在结核菌感染。
整个试验体系中，对于结核菌特异性抗原的选定是至关重要的。
γ-干扰素释放试验诞生的早期曾使用PPD作为特异性抗原，由于PPD成分不单一，特异性和敏感性均不理想。
后来研究者开始使用ESA T-6和CFP-10作为抗原，得到了较好的效果。
ESA T-6（早期分泌抗原靶6000蛋白）和CFP-10(培养滤出液蛋白-10)的蛋白编码来源于结核分枝杆菌基因中的一个菌种特异性基因片段，称为region of difference 1(RD1)。
这个基因片段不存在大部分的非结核分枝杆菌以及所有的牛型分枝杆菌（包括卡介苗）中，因此ESA T-6和CFP-10作为抗原的特异性相对于PPD要高的多。
牛γ-干扰素与人γ-干扰素、鼠γ-干扰素氨基酸同源性分别为63%和47%。
陈颖钰等在发表的文献《人IFN-γ体外释放检测法的建立及其在结核病诊断中的应用》中克隆表达了人IFN-γ基因，利用纯化的重组IFN-γ免疫小鼠，用所获得的单抗及兔多抗建立了检测人IFN-γ的夹心ELISA。
分别用牛结核菌素、禽结核菌素、牛重组IFN-γ作为检测抗原，用建立的夹心ELISA方法测定，结果均为阴性反应，说明建立的方法特异性良好。
结核分析杆菌y-干扰素体外释放定量试验对诊断结核病的应用价值 裴新发
结核分析杆菌y-干扰素体外释放定量试验对诊断结核病的应用价值裴新发摘要：目的观察分析结核分枝杆菌特异性抗原y-干扰素释放试验（IGRA）对诊断结核病的应用价值。
方法选择我院2017年2月至2018年2月收治的疑似活动性结核患者84例患者的细菌学、影像学、病理学结果作为观察组，进行回顾性整理并随访，同时选择健康人84例作为对照组，用来识别和判断疑似结核病患者的是否真正的患病。
并随访治疗效果，与IGRA检查方法对照，评价IGRA的临床应用价值，结果结核病例IGRA检测敏感性为85.27%，特异性为81.03%，阳性预测值81.04%，阴性预测值86.12%。
结论 IGRA作为活动性结核病的辅助检查手段，具有较高的特异性，同时对肺结核外其他结核的临床诊断价值也较高，可为菌阴患者、肺外结核等特殊情况结核病患者进行抗结核治疗提供依据。
关键词：结核病；y-干扰素释放试验；临床应用价值结核病作为一种传染病，严重危害着人类的健康，近年来，随着人口大规模的流动，结核病与艾滋病同时流行及多重耐药结核菌菌株的出现，该病患病率呈上升趋势。
据世界卫生组织（WHO）估计，全球约1/3人口携带结核分枝杆菌，每年死于结核病的人数约200万。
中国结核病人数居世界第二位[1]，目前结核病诊断主要依据临床症状、胸部X线片及细菌培养和涂片抗酸染色等，这些传统诊断方法费时费力且检出率低，延误了早期诊治的最佳时机，而如何快速、准确诊断结核病也逐渐成为临床关注的重要问题。
近年来，以T细胞免疫为基础的体外酌鄄干扰素释放试验（IGRA）被证实在结核分枝杆菌感染检测中有较好的特异性和敏感性。
笔者通过对该院收治的疑似结核病患者采用IGRA诊断，以探讨其临床应用价值，现做如下报告：1资料与方法1.1一般资料选择我院2017年2月至2018年2月收治的疑似活动性结核患者84例患者的细菌学、影像学、病理学结果作为观察组，进行回顾性整理并随访，同时选择健康人84例作为对照组，用来识别和判断疑似结核病患者的是否真正的患病。
干扰素释放试验
• 人体接触 MTB 后，根据机体的防御和免疫状态 、细菌数量、毒力及对抗结核药物的敏感性不同 ，有不同的结局，可以接触后无感染、潜伏感染 或感染后发展为活动性结核病，发病后可以未经 治疗而自愈、经治疗后治愈或迁延不愈。临床接 诊的患者或体检者大致分为以下几种情况。
• 1．机体防御状态良好，接触菌量少时，由呼吸道 进入的 MTB，可经鼻、咽喉、气管、支气管的黏 液捕捉并为纤毛运动形成的喷嚏、咳嗽、咳痰等 动作清除掉；经消化道进入的 MTB 可与唾液和 食物等混合，大部分被胃液和酶消灭，部分经肠 道排出体外，这种情况下机体的天然屏障可以完 全阻止 MTB 的入侵，机体不产生针对 MTB 的 免疫应答。
• 根据文献报道，下列情况可能会出现假阴性结果 ：服用三环类抗抑郁症药物、非甾体类抗炎药物 、T 细胞活化抑制剂或 NTM 感染、过敏状态、 糖尿病、严重细菌感染、烧伤及应用糖皮质激素 导致的粒细胞升高，IGRAs 可呈现假阴性。
• IGRAs 是临床诊断、鉴别诊断结核病的重要辅助 手段，但其不是确诊和排除结核病的“金标准” 。
二、IGRAs 检出阳性结果的临床意义
• 对既往有结核病史（治疗或未经治疗）或明确的 结核病证据者（钙化淋巴结、肺内典型的钙化或 陈旧结核病灶），无结核病中毒症状，但 IGRAs 阳性，表明机体曾经患过结核病，不能代表目前 为活动性结核病，亦不能根据阳性检测值的高低 判断结核病的转归。
• 2．临床有典型的结核病中毒症状，影像学等检查 结果支持结核病的诊断且临床排除了其他疾病者 ，IGRAs 阳性支持活动性结核病的诊断。
• IGRAs 是基于检测以 MTB 特异性抗原在体外刺 激 T 细胞产生γ- 干扰素的原理为基础的体外免疫 诊断技术，其检测结果判断的是受检宿主的 T 细 胞是否对 MTB 特异性抗原有记忆，因此其临床 意义为检测机体是否感染过 MTB。
警惕结核假阴性
如遇这些情况，需警惕结核假阴性γ干扰素释放试验（Interferon-γ release assay，IGRA）通过体外检测细胞对结核分枝杆菌特异性抗原刺激产生的γ干扰素，可协助诊断结核分枝杆菌感染。
目前主要有两种商品化检测试剂盒：T-SPOT.TB 和 QuantiFERON-TB Gold。
在不同的人群中，IGRA 诊断结核病的能力存在差异，既往 Meta 分析提示：两种试剂盒诊断活动性结核的敏感性为 60%-89%。
一些最终确诊为结核病的患者，却遭遇阴性 T-SPOT.TB 的结果。
这样的结果无疑会给诊断带来极大干扰。
来自首都医科大学北京胸科医院的 Pan 等对肺结核和肺外结核病患者的T-SPOT.TB 结果进行了回顾性研究，分析了 T-SPOT.TB 出现假阴性的相关危险因素。
研究者共纳入了 2012-2013 年 1 年内的 1928 名疑似肺结核和肺外结核病的患者，所有的 T-SPOT.TB 均在抗结核治疗开始前完成，并排除了既往有结核病史或抗结核治疗史的患者。
研究发现1.1928 名疑似结核病患者中，774 人经细菌学或组织学证明为结核分枝杆菌感染，并纳入最终分析，其中肺结核患者及同时合并肺外结核患者 530 人，肺外结核患者 244 人。
肺结核患者中 46 人（8.7%）T-SPOT.TB 阴性，肺外结核患者中 32 人（13.1%）T-SPOT.TB 阴性。
2. 多因素分析发现，对于肺结核患者，高龄、BMI≥25kg/m2、住院前病程大于 6 个月都是出现 T-SPOT.TB 假阴性的独立危险因素；对于肺外结核的患者，高龄同样是出现 T-SPOT.TB 假阴性结果的独立危险因素。
因此，高龄是肺结核和肺外结核患者出现 T-SPOT.TB 的假阴性独立危险因素，超重和入院前病程长则是肺结核患者出现 T-SPOT.TB 的假阴性独立危险因素。
在具备这些危险因素的怀疑结核病的患者中，对 T-SPOT.TB 阴性结果的解释需慎重。
结核分枝杆菌γ-干扰素体外释放试验诊断结核分枝杆菌感染的效果研究
124中国处方药 第16卷 第6期·临床研究·3 讨论近年来，国内对脑卒中康复治疗的研究证实，康复治疗可有效改善脑卒中患者的神经功能和日常生活活动能力，且同时可以节约医疗成本。
相关研究显示，对脑卒中患者进行康复训练时需充分利用早期神经可塑性，并在急性期进行全面康复治疗干预，进而消除卒中对患者各项功能影响，降低致残率[5]。
在本研究中，老年组和中老年组患者治疗第1个月NIHSS 评分、ADL 评分均较治疗前有明显降低。
中老年组患者治疗后NIHSS 评分、ADL 评分与老年组对比差异无统计学意义（P ＞0.05）。
这说明年龄因素虽然对脑卒中急性期功能恢复具有一定影响，但并不是主要影响因素，进而可帮助医疗人员在工作中消除对年龄因素的顾虑，制定明确的康复计划和目标。
夏楠等[6]研究显示，对大量脑卒中人群进行样本研究，发现年龄并非是脑卒中患者预后效果的主要影响因素。
再者，本研究结果发现65岁以下患者神经功能和日常活动能力恢复程度与65岁以上患者对比无显著差异，进一步证实脑表2：老年组和中老年组患者治疗前后ADL 评分对比组别例数ADL 评分（分）治疗前治疗后中老年组2544.25±12.3160.25±10.58老年组2544.01±15.0258.66±14.94t 值-0.0810.434P 值-＞0.05＞0.05梗死患者在目前的医疗质量中不易受年龄因素的影响。
但因脑卒中患者预后包括众多因素影响，如病灶部位、大小以及合并症等，而本研究仅对年龄因素进行分析，不能全面反映年龄因素与各因素之间的关系，因此需要进一步的后续研究。
参考文献[1]王瑶瑶， 杨帆， 张弦. 康复介入治疗对脑梗死后偏瘫患者运动功能及日常生活能力的影响. 实用医院临床杂志， 2017， 14（6）: 134-137.[2]夏楠， 任彩丽， 王红星， 等. 脑梗死急性期康复训练流程对患者运动功能和日常生活活动能力改善程度的影响. 中国康复医学杂志， 2017， 32（4）: 396-401.[3]王慧娟， 刘运平， 曹妍， 等. 丁苯酞氯化钠联合依达拉奉治疗急性期脑梗死患者对神经功能缺损评分和日常生活活动能力的影响. 河北医药， 2015， 37（21）: 3255-3258.[4]李鹏翔， 苏庆杰， 李传资， 等. 弥散张量成像技术在急性脑梗死患者肢体功能恢复预测中的应用. 中华全科医学， 2015， 13（10）: 1597-1599.[5]陶希， 刘佳， 邓景贵， 等. 低频重复经颅磁刺激对急性期脑梗死患者焦虑抑郁状态的影响. 中国康复医学杂志， 2013， 28（5）: 426-430.[6]夏楠， 王红星， 任彩丽， 等. 年龄因素对脑梗死患者急性期神经功能和日常生活活动能力恢复的影响. 中国康复医学杂志， 2015， 30（8）: 782-785.结核病是困扰人类几千年的疾病，其主要是由结核分枝杆菌感染引起，也是严重影响人类生理健康的重要传染性疾病之一[1]。
体外γ-干扰素释放试验在结核病密切接触者结核病筛查中的作用
１ ０ｍ ｌ ，在 ８ ０ ０ｇ 、２ ５ħ条件下离心 １ ０ｍ ｉ ｎ ，利用吸管 １ ０μ ｌ 培 ２ ） 体外检测干扰素 －γ分泌性淋巴 养对活细胞进行计数。（ 细胞：结核菌特意抗原 Ａ与 Ｂ分别和阴性对照孔对应，加 ０ ０μ ｌ 培养液，在每份标本 （ 每个阴性、阳性与 ２个检 入２ 测孔） 中加入 １ ０ ０μ ｌ 的培养液，在 ３ ７ħ 、５ ％ 二氧化碳条 件下孵育 １ ６ ２ ０ｈ ，Ｐ Ｂ Ｓ ２ ０ ０μ ｌ 洗板 ５次，将 １ ０ ０μ ｌ 复合物 原液加入到每个孔中，在 ３ ７ħ 条件下孵育 １ｈ ，Ｐ Ｂ Ｓ２ ０ ０μ ｌ 洗板 ４次，将 ５ ０μ ｌ 底物溶液加入到每个孔中，在室温条件 下孵育 ７ｍ ｉ ｎ 。利用去离子水或蒸馏水对洗涤孔内部进行充分 洗涤，将反应板调至背光，保持环境干燥、通风良好，利用 显微镜或放大镜对每个孔中有颜色的斑点进行计数。 １ ３ ㊀判定标准 阴性对照斑点数为 ０ ５个，任何检测孔计数 － 阴性孔计 数在 ６个或 ６个以上即可将其判定为阳性，阴性对照斑点数 在 ６个或 ６个以上，检测孔斑点数是阴性对照孔斑点数 ２倍 ２ ］ 。 或 ２倍以上，即可将其判定为阳性 ［ １ ４ ㊀统计学处理 采用 Ｓ Ｐ Ｓ Ｓ１ ８ ０统计软件进行分析，计数资料以率表示， ２ 组间比较采用 χ 检验，以 Ｐ＜ ０ ０ ５为差异有统计学意义。 ２ ㊀结果 Ｉ Ｇ Ｒ Ａ检测阴性组 １ ０ ２ 例，Ｉ Ｇ Ｒ Ａ检测阳性组 ４ ８例；Ｉ Ｇ Ｒ Ａ 阳性组结核病密切接触者 Ｔ Ｓ Ｔ ｍ为 ３ ９ ６ ％ （ １ ９ ／ ４ ８ ） ，高 ≥５ｍ 于Ｉ Ｇ Ｒ Ａ阴性组的 ８ ８ ％ （ ９ ／ １ ０ ２ ） ，Ｉ Ｇ Ｒ Ａ阳性组结核病发病率 为５ ４ ２ ％ （ ２ ６ ／ ４ ８ ） ，高于阴性组的 ２ ９ ％ （ ３ ／ １ ０ ２ ） ，差异均有 统计学意义 （ Ｐ＜ ０ ０ ５ ） ；男性发病率为 ８ ８ ％，略低于女性的 １ ５ ９ ％，儿童接触者中婴幼儿发病率为 ６ ３ ％，略低于 ４岁以
结核分枝杆菌γ-干扰素体外释放试验在结核感染诊断中的临界值研究
结核分枝杆菌γ-干扰素体外释放试验在结核感染诊断中的临界值研究陈振华;余艳艳;王珏;杨希;谭云洪【摘要】目的探讨结核分枝杆菌γ-干扰素释放试验(IGRAs)在结核分枝杆菌(MTB)感染诊断中的应用价值以及诊断不同年龄MTB感染的最佳临界值.方法采用回顾性研究.收集574例结核患者和351例结核潜伏感染(LTBI)者作为实验组,337例非结核肺部疾病患者和294例体检健康者作为对照组.采用QFT-GIT试剂盒检测空白对照管(Nil管)、结核抗原管(TBAg管)和促有丝分裂因子管(Mitogen管)IFN-γ浓度并得出Nil、TB Ag-Nil和Mitogen-Nil,比较分析2组间各检测值差异.按照年龄将纳入分析人群分为中青年组(15 ～60岁)和老年组(≥61岁),并分别统计分析TB Ag-Nil差异.ROC曲线分析TBAg-Nil诊断MTB感染的敏感性、特异性和最佳临界值.结果 Nil在实验组[0.09(0.06,0.14) IU/mL]与对照组[0.08(0.05,0.14)IU/mL]间差异有统计学意义(Z=-3.646,P＜0.01).TB Ag-Nil在实验组[1.16(0.38,3.12) IU/mL]与对照组[0.22(0.13,0.35) IU/mL]间差异有统计学意义(Z=-20.382,P＜0.01);中青年组,TB Ag-Nil在实验组[1.55(0.43,3.64) IU/mL]与对照组[0.22(0.13,0.36) IU/mL]间差异有统计学意义(Z=-17.718,P＜0.01);老年组,TB Ag-Nil在实验组[0.53(0.33,1.47) IU/mL]与对照组[0.20(0.08,0.31)IU/mL]间差异有统计学意义(Z=-10.170,P＜0.01).Mitogen-Nil在2组间比较差异无统计学意义(Z=-0.363,P=0.716).ROC曲线分析,TB Ag-~Nil鉴别中青年MTB感染、老年MTB感染曲线下面积(AUC)分别是0.810和0.792,最佳临界值分别是0.36 IU/mL和0.30 IU/mL,敏感性分别为83.9％和87.7％,特异性分别为75.6％和71.8％.结论 TB Ag-Nil可用于MTB感染辅助诊断,中青年组和老年组最佳临界值略有差异.【期刊名称】《临床检验杂志》【年(卷),期】2017(035)006【总页数】3页(P434-436)【关键词】γ-干扰素;肺结核;诊断;临界值【作者】陈振华;余艳艳;王珏;杨希;谭云洪【作者单位】湖南省胸科医院检验科,长沙410013;湖南省胸科医院检验科,长沙410013;湖南省胸科医院检验科,长沙410013;湖南省胸科医院检验科,长沙410013;湖南省胸科医院检验科,长沙410013【正文语种】中文【中图分类】R446.5结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis，MTB)γ-干扰素释放试验(interferon-release assays，IGRAs)检测MTB特异性抗原刺激并激活的CD4+和CD8+T细胞产生的IFN-γ，以定性判断是否存在MTB感染[1]。
γ-干扰素体外释放试验在结核性疾病中的诊断价值
γ-干扰素体外释放试验在结核性疾病中的诊断价值胡金伟;张丽;桑国耀;顾挺【摘要】目的探讨结核分枝杆菌相关γ-干扰素体外释放试验(Interferon Gamma Release Assays,IGRA)在结核性疾病中的诊断价值.方法采用TB-IGRA方法检测经本院临床证实的235例结核病患者,101例非结核性患者外周血γ-干扰素释放水平,同时与涂片抗酸染色、结核分枝杆菌核酸检测及结核抗体结果进行比较.结果经比较,TB-IGRA对结核性疾病诊断的灵敏度86.4%,均高于其他几种结核病检测方法 ,且具有较高的特异度,阳性预测值95.7%,阴性预测值为74.2%.结论体外γ-干扰素释放试验是一种辅助诊断结核病的快速、有效的方法 ,具有较好的临床应用价值.【期刊名称】《实验与检验医学》【年(卷),期】2016(034)006【总页数】3页(P704-706)【关键词】γ-干扰素;结核性疾病;诊断价值【作者】胡金伟;张丽;桑国耀;顾挺【作者单位】新疆医科大学第一附属医院医学检验中心,新疆乌鲁木齐 830054;新疆医科大学第一附属医院医学检验中心,新疆乌鲁木齐 830054;新疆医科大学第一附属医院医学检验中心,新疆乌鲁木齐 830054;新疆医科大学第一附属医院医学检验中心,新疆乌鲁木齐 830054【正文语种】中文【中图分类】R378.91+1;R52结核性疾病是由结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis，MTB)所致的以呼吸系统感染为主的慢性传染病，严重危害着人类健康，据世界卫生组织（WHO）统计，全世界约三分之一的人群感染了结核分枝杆菌，每年约有800万新发病例，约140万人死于结核病。
我国是结核病高负担国家，发病率位居全球第二位[1]。
对结核病的有效控制则有赖于对结核分枝杆菌的快速检测[2]，结核感染T细胞检测γ-干扰素体外释放试验（TB-IGRA）是近年来发展起来的一种快速检测结核分枝杆菌感染的实验室检测技术[3]。
浅谈T细胞γ干扰素释放实验对诊断潜伏性结核感染的临床应用
浅谈T细胞γ干扰素释放实验对诊断潜伏性结核感染的临床应用四川省德阳市人民医院心胸外科，四川绵竹618000结核病是由结核分枝杆菌感染引起的慢性传染病，好发于15岁到35岁的青少年。
其潜伏期为4～8周，其中80%发生在肺部，其它部位（颈淋巴、脑膜、腹膜、肠、皮肤、骨骼）也可继发感染。
人与人之间呼吸道传播是主要传播方式。
我国是全球22个结核病流行最严重的国家之一。
早发现、早诊断、早治疗是控制结核病情的根本所在，本文就T细胞γ干扰素释放实验对诊断潜伏性结核感染的临床应用进行阐述。
标签：T细胞γ干扰素释放实验；诊断；潜伏性结核感染1.传统检验方法1.1涂片检测将患者的痰液或是其它部位的体液制成涂片在镜下检测患者的阴、阳性。
1.2 X线检查可早期发现结核，而且可对病灶的部位、范围、性质、发展情况和效果作出诊断。
1.3结核菌素试验（PPD试验）（1）阳性表示结核感染，但并不一定患病。
皮试呈阳性者，常提示体内有活动性结核灶。
（2）阴性提示没有结核菌感染。
但仍要排除下列情况。
①结核菌感染后，需4～8周变态反应才能充分建立；所以在变态反应前期，结素试验可为阴性。
②应用糖皮质激素等免疫抑制剂者营养不良以及麻疹、百日咳患者，结素反应可暂时消失。
③严重结核病和各种危重患者对结素无反应。
④其它：如淋巴免疫系统缺陷（白血病、结节病）患者和老年人的结素反应也常为阴性。
由于我国几乎所有人群均有卡介苗（BCG ）接种史，PPD结果不准确，仅供于筛查。
传统的诊断方法检测率相对低且肺外结核诊断困难、常有“假阴/阳性”出现，延误了早期发现及早期治疗的最佳时机，随着对IFN-γ在调节结核感染引起的细胞介导的免疫反应中起到的关键性作用的不断了解，人们逐步认识到γ-干扰素释放试验（interferon gamma release assays，IGRAs）可用于结核感染的诊断1。
资料显示，IGRA特异性为98%～100%；在免疫功能正常成人中，IGRA （T-SPOT.TB和QFT-G-IT）对2年内进展为结核的阴性预测值（NPV）分别为97.8%和99.8%；当免疫诊断检测不局限于既往其他检测阳性受试人群时，在随访19～24个月IGRA阳性者中结核进展率处于8%～15%，并且高于TST相关结果2。
γ-干扰素释放试验的结果解读
γ-干扰素释放试验的结果解读检验科的工作繁琐而单调，除了每天的整理标本、上机实验和仪器维护，实验结果的正确解读也是检验师必备的技能。
γ-干扰素释放实验(IGRAs)是世界卫生组织推荐的用于诊断结核分枝杆菌感染的体外免疫学方法，但是有些临床或检验同行对该实验结果的解读有一定的偏颇，本文就该问题进行了梳理，希望对大家有所帮助。
IGRAs检测的基本原理为感染者体内致敏的T细胞，在体外再次接受结核特异性抗原刺激后，激活的效应T细胞能够产生抗原特异性γ干扰素（IFN-γ），通过对IFN-γ的检测可以反映机体是否存在MTB 感染。
再看报告单时，我们会看到四个指标，分别为：IGRA-N、IGRA-P、IGRA-T和TG-IGRA。
IGRA-N，即阴性对照管。
在对全血T淋巴细胞培养时，加入物质为缓冲液，它反应了患者的免疫基础水平。
一般情况下，该值远低于阳性对照管，但在一些特殊疾病状态下，如类风湿等自身免疫性疾病时，该值会接近于阳性对照管，影响实验结论。
IGRA-P，即阳性对照管。
在对全血T淋巴细胞培养时，该培养管加的激活剂为植物血凝素（PHA)，PHA可激活小淋巴细胞转化为淋巴母细胞，继而分裂增殖，释放淋巴因子，是干扰素的诱导剂。
对于免疫功能正常的人来说，该值会远高于阴性对照管，但在一些免疫力低下，如HIV感染者或是使用免疫抑制剂的患者中，该值往往比较低，几乎接近于阴性对照。
IGRA-T，即样本检测管，在对全血T淋巴细胞培养时，该培养管加的激活剂为MTB特异性抗原——早期分泌抗原（ESAT-6）和培养滤液蛋白10（CFP-10），如果检测者体内有结核杆菌致敏的T细胞，当加入以上两种抗原时，会迅速激活体内的效应T细胞产生特异性IFN-γ。
TG-IGRA，即实验结论，通常为阳性、阴性或不确定。
该实验结论由IGRA-N、IGRA-P和IGRA-T三个检测值套用专门的公式计算而来，因此该实验结论与以上三个值的变化密切相关。
结核分枝杆菌γ-干扰素体外释放试验(TB-IGRA)对结核性胸腔积液的诊断价值
结核分枝杆菌γ-干扰素体外释放试验（TB-IGRA）对结核性胸腔积液的诊断价值【摘要】目的探讨结核分枝杆菌（MTB）γ-干扰素体外释放试验（TB-IGRA）在疑似MTB感染体胸腔积液患者快速诊断中的应用价值。
方法疑似MTB感染伴胸腔积液患者138例，应用TB-IGRA定量检测外周血淋巴细胞分泌γ-干扰素的水平。
利用MTB DNA法检测胸腔积液中的MTB，同时用免疫金标法检测血清MTB抗体，并进行统计学分析。
结果138例疑似患者经过痰和胸腹水抗酸染色镜检，痰液和胸腹水MTB培养，结核菌素皮肤试验，MTB DNA和MTB抗体等试验确诊结核病患者48例，阳性检出率34.8%，TB-IGRA的阳性检出率为32.6%，MTB DNA的阳性检出率为13.8%，血清MTB抗体的阳性检出率为10.1%。
对已确诊的48例结核病患者进行数据分析，TB-IGRA，MTB DNA和血清MTB抗体的准确率分别为93.8%，39.6%，29.1%。
据统计分析可知，TB-IGRA的阳性检出率和准确率均显著高于其他2种方法（P<0.05）。
TB-IGRA对疑似MTB感染的胸腔积液患者诊断的阳性预测值为93.3%，阴性预测值为93.6%。
结论TB-IGRA对疑似MTB感染伴胸腔积液患者的诊断具有快速，高敏感性高特异性的优点，优于MTB DNA和血清MTB抗体试验，可以作一种新的技术用于人体MTB感染的诊断。
【关键词】γ-干扰素释放试验；结核分枝杆菌；DNA；抗体；胸腔积液Evaluation of the value of TB-IGRA test in mycobacterium tuberculosis infect of patients with pleural effusion[Abstract]objective To investigate the application significance of mycobacterium tuberculosis IFN-r release assay (TB-IGRA) in the rapid diagnosis for suspected MTB infected patients with pleural effusion. Methods The 138 patients with pleural effusion which were suspected as having suspected MTB infection were enrolled. TB-IGRA was used to determine the level of IFN-r of peripheral blood lymphocyte . The MTB DNA method was to detect MTB in pleural effusion, meanwhile serumanti-MTB antiboby was detected by immuno gold filtration assay , and the results were diagnosed as tuberculosis by sputum, pleural effusion and ascites smear test, sputum ,pleural effusion and ascites MTB culture, tuberculin skin test, MTB DNA method and anti-MTB antibody test , and the positive rate was 34.8%.The positive type of TB-IGRA in the 138 patients with pleural effusion was 32.6%,The positive rate of MTB DNA method was 13.8%,and the positive rafe of anti-MTB antibody test was 10.1%. The date of 48 patients with tuberculosis were analyzed . TB-IGRA had the consistency rate of 93.8%,while the consistency rates of MTB DNA method and anti-MTB antibody test were 39.6%and29.1% respectively. The positive rate and consistency rate of TB-IGRA were significantly higher than those of the others(p<0.05). The positive and negative predictive values of TB-TGRA in suspected MTB infected patients with pleural effusion were 93.3% and 93.6% respectively. Conclusions TB-IGRA is fast ,hipersensitivity and high specificity to diagnose thesuspected MTB infected patients with pleural effusion.TB-IGRA is better than MTB DNA method and anti-MTB antibody test. TB-IGRA can become a new diagnotic method to be applied in the diagnosis of MTB infection.[key words]interferon-gamma release assay(IGRA); Mycobacterium tuberculosis(MTB);DNA;Antibody;pleural effusion结核病是世界上单一致病菌引起的死亡最多的疾病，据世界卫生组织统计，2011年全球约有870万例新发结核病患者，而死于此病的人数达140万[1]。
γ-干扰素释放试验没有实际应用价值
γ-干扰素释放试验没有实际应用价值(2014-07-2800:10:00)分类：医疗教学按：IGRA诊断结核病在国内可谓乱象丛生，一万个人对其诊断效率有一万个体会，其中不少人觉得“有用”。
但是，国内迄今没有自己的规范资料能够证实其“有用”，所谓的“有用”之处在于能够带来一定的经济利益。
请注意这里的“规范”二字。
这篇综述于一年多前写成，先后被两家中文杂志退稿，退稿的理由非常荒唐。
我坚持认为这是一篇比较重要的文章，因为谈论的临床问题具有足够的重要性，而且每一个观点都有一项规范的临床研究结果支持。
今天在博客上贴出此文，今后不再将该文往杂志投稿。
结核素皮肤试验（TST）是用于检测潜伏结核感染（LTBI）的传统方法。
自从干扰素-γ释放试验（IGRA）进入临床应用之后大有取代TST之势。
IGRA是在体外检测T细胞经结核特异性抗原刺激之后产生和释放干扰素-γ能力的免疫学技术，藉此判断细胞介导的免疫反应。
国际上广泛使用的IGRA有两种，即澳大利亚产的QuantiFERON-TB Gold In-Tube（QFT-GIT）和英国产的T-SPOT.TB。
目前在我国各地医院应用最为普遍的是T-SPOT.TB。
全国各地较大型规模以上的医院基本上都开展了IGRA项目，然而很多人对于该项目的应用范围和临床价值缺乏正确的认识，甚而至于只要看到IGRA阳性结果即不管临床实际和可能便给予抗结核治疗。
鉴于国内迄今为止尚无一项关于IGRA应用的前瞻性研究报告，我们复习几年来国外的相关资料并总结撰写成为综述，旨在回答关于IGRA在临床应用的几个重要问题。
一、IGRA诊断LTBI的价值关于IGRA用于诊断LTBI的研究文献比较多，在这方面的结论也比较成熟。
Richeldi的综述认为T-SPOT.TB诊断LTBI的敏感度高于TST，而QFT-GIT诊断LTBI的敏感度与TST相似；无论人群是否接种后卡介苗，T-SPOT.TB和QFT-GIT在诊断LTBI的特异度方面均优于TST[1]。
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皮肤结核的辅助诊断； 生物制剂治疗患者的结核筛查
结核性葡萄膜岩的辅助诊断 生殖系统结核的辅助诊断； 不孕不育人群的结核筛查
解决的临床问题
A. 大幅提高结核感染的检出能力，可用于肺结核等结核感染的辅 助诊断，特别是对于痰涂阴性肺结核的辅助诊断； B. 使用高特异性抗原，有效避免卡介苗干扰；可用于非结核杆菌 肺部感染、肺炎等疑似病例与肺结核的鉴别诊断； C. 使用全血进行测试，克服痰涂、菌培和分子检测肺外结核取样 难的问题，可有效检出肺外结核； D. 可用于免疫抑制剂治疗、血液透析患者、器官移植等临床治疗 前的结核感染排查 E. 特殊人群的结核筛查：如糖尿病人等
3.1 菌培/涂片 断
肺结核的辅助诊
解决的临床问题
类似实验和细菌学检测结果比较
样本分类 肺结核病 总数 721 细菌学阳性 444 WT（+） 591 进口（+） 564
单一肺外结核病
结核合并其他疾病 合计 灵敏度
35
30 786
5
9 458 58.3%
28
18 637 81.0%
29
17 610 77.6%
统计：（不包括WT人员及1例 HIV）
三种方法合计：7/14
TB IGRA
12/14
试剂性能？ 同类产品对比？
产品性能
TB-IGRA试剂的临床考核
本试剂与通过美国FDA认证的试剂符合率如下：
61例回访的不符病例，用T-SPOT.TB 进行验证，其结果与 进口试剂 合计 IGRA一致的有28份（45.9%），与 QFT-GIT一致的有 33份 + 不确定 （54.1%），两者的差别无统计学意义（ χ 2=0.41, + 680 82 4 766 p=0.52 ）。
发热待查患者的结核排筛
传染/感染科 2周以上的不明原因发热病人的肺结核排筛；
CD（克罗恩病）与肠结核的鉴别诊断；
消化科 生物制剂治疗患者的结核筛查； 发热待查
开展科室
科室 心内科 肾内科 骨科 皮肤科 眼科 生殖中心 应用 结核性胸膜炎的辅助诊断
肾结核的鉴别诊断； 血透患者的结核筛查
骨结核的辅助诊断
•
• • •
耗时长 涂阴PTB检出低 肺外结核难
分子诊断
• • •
细菌培养
操作复杂 技术要求高 涂阴PTB检出低 肺外结核难
中华医院感染学杂志2009 年第19 卷第14 期 Chin J No so comio l Vol. 19 No. 14 2009
灵敏度：90.24% 特异性：93.34%
性别 年龄
男 男 男 男 女 男 女 女 女 女 男 男 男 20 63 33 21 21 63 48 33 78 20 27 38 37
入院诊断
肺炎 肺炎 肺炎 肺炎 肺炎 肺炎 肺炎 肺炎 肺炎 肺炎 肺炎 肺炎 肺炎
出院诊断 涂片 临床诊断
阴 阴 阴 阴 阴 支气管结核 肺结核 肺结核 肺结核 肺结核 继发性肺结核 肺结核 肺结核 陈旧性肺结核 肺结核 肺结核 肺结核 肺结核
WT 41 411 6 458 0 2 2 4 不确定 IGRA 与美国FDA 批准的试剂性能相同 合计 721 495 12 1228
阳性符合率=680/（680+41+0）× 100%=94.3% 阴性符合率=411/（82+411+2）× 100%=83.0% 总符合率=89.0%
使用情况
• 国内代理的某进口试剂及TB-IGRA共检测：海河医院（4例）， 浙江大学附属第一医院(1例），浙江迪安（18例），福建省 立医院26例），共49例。
入院时采血检测 WT-IGRA QFT
+ + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
1+
3.3 肺外结核辅助诊断 & 避免卡介苗干扰
肺外结核的诊断
结核 昆明三院 TB-IGRA 进口试剂 总标本数 老年医院 TB-IGRA 进口试剂 总标本数 厦门CDC TB-IGRA 进口试剂 总标本数 总计 TB-IGRA 进口试剂 总标本数 81.0% 77.6% 786 81.1% 77.3% 750 80.6% 83.3% 36 70.9% 74.5% 196 70.6% 74.2% 194 100.0% 100.0% 2 76.6% 67.3% 248 76.5% 66.2% 234 78.6% 85.7% 14 90.0% 86.8% 342 90.7% 87.3% 322 80.0% 80.0% 20 肺结核 肺外结核
RD1区抗原ESAT-6、CFP-10的特异性
结核菌群
M tuberculosis M africanum M bovis BCG substrain gothenburg moreau tice tokyo danish glaxo montreal pasteur
抗原
ESAT CFP
抗原 环境分支杆菌
与现有方法相比，
IGRA更适合作为M.TB感染的精确指标
涂片、PCR漏检率高
TB-IGG 检出率偏低 正常60~70%
对于实验的疑惑
1、检测原理是什么？
2、试剂性能？同类产品对比？
3、解决哪些临床问题?
原理是什么？
检测原理
结核特异抗原
ESAT-6、CFP-10
来自M.TB 基因组RD1区域
避免卡介苗、非结核分枝杆菌干扰（缺失RD1区域的基因）
新世纪结核诊断方法
美国CDC推荐
γ -干扰素体外释放试验
TB-IGRA
鲁 浪
结核流行情况
死亡最多
1/3
每年900万/170万
结核检测的比较方法
• •
接触史
• • •
X射线
•
特异性差 主观 肺外结核难
不能区分NTM PTB近半阴性 肺外结核难
涂片 镜检
结核 诊断
抗体检测
试剂灵敏度低； 不能区分既往感 染和发病病人； WHO 不推荐的结 核诊断依据
肺部疾病的鉴别诊断
数份结核病例误诊为肺炎入院，其IGRA检测情况
30例入院有肺炎症状的结核疑似病人，其中13例标本为第一次临床诊 断结果为肺炎，后经结核治疗后临床诊断为结核。
标本
Y089 Y093 Y133 Y136 Y137 Y158 Y161 Y162 Y242 Y243 Y246 Y250 Y251
李某某 结3 菌阳性
阳性 阴性
结核阳性，菌阴性 结核阳性，菌阳性
>400 T-N≥14246.896 且P-N≥20 193.601
不确定
结核阳性，菌阳性 结核疑似阳性，菌阴性， 既往感染 菌阴，结核阳性 菌阴性，但结核可能性 大，可算阳性 菌阳性 菌阳性 菌阴性，但结核可能性 大，可算阳性 菌阳性
+ + +
-
+ + +
-
检测步骤
结核特异抗原
ESAT-6、CFP-10
刺激感染过结核のT淋巴细胞产生γ -干扰素
PHA[植物血凝素]: 刺激T淋巴细胞产生γ -干扰素 N T P
一个人感染了结核
一个人未感染结核 γ -干扰素
产生γ -干扰素
不会产生
22±2h
N T P
2个工作日
2h
离心 血浆
2009年，中国医学科学院北京协和医院、北京市结核病胸部肿瘤研究所等 24家权威医院联合发布英夫利西单抗治疗前结核预防与管理专家建议：
• 隐性结核：具有使用英夫利西单抗适应证但存在隐性结核的患者 ，在使用英夫利西单抗前，建议完成预防性抗结核治疗；如自身 免疫病病情需要尽早开始英夫利西单抗治疗，亦必须先行预防性 抗结核治疗至少4周。 • 活动性结核：如发现患者有活动性结核病，应转结核科诊治。在 使用英夫利两单抗前，必须完成足最、足疗程的抗结核治疗。
N T P
6点定标 夹心法
γ -IFN
成都传染病医院
编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 姓名 张某 曾某 文某 何某 李某 班某 刘某 刘某 胡某 廖某 唐某 罗某 刘某 杨某 背景 HIV 结1 结1 结2 结2 结3 菌阴性 结3 菌阳性 结3 菌阴性 结4 结4 结4 结4 结2 结2 临床确认 怀疑TB CD4 16cell/ul 正常414-1123 可能的结核性胸膜炎 痰片阳性，PCR阳性 痰片阴性 痰片阳性 T-N管含量 <2 65.581 88.984 50.428 25.969 177.264 P-N管含量 <2 394.476 396.196 371.117 >400 >400 >400 N/4含量 <2 不确定 3.438 <2 <2 <2 <2 <2 <2 <2 阳性 阳性 阳性 阳性 阳性 阳性 阳性 阴性 阴性 阳性 阳性 阳性 阳性 阳性 判断结果
免疫抑制剂/生物制剂应用
免疫抑制剂/生物制剂
是一种能抑制机体的 免疫反应的药物，能 抑制与免疫反应有关 细胞（T细胞和B细胞 等巨噬细胞）的增殖 和功能，能降低抗体 免疫反应。
广泛应用
器官移植抗排斥反应
自身免疫病如类风湿性关
节炎、红斑狼疮、皮肤真 菌病、膜肾球肾炎、炎性
肠病பைடு நூலகம்
自身免疫性溶血贫血
• 西班牙的研究发现，在接受激素或免疫拮抗剂治疗 的系统性红斑狼疮患者中，结核的发病率是健康人 群的6倍（2006年）。 • 中国香港的研究发现，接受激素或免疫拮抗剂治疗 的系统性红斑狼疮患者其结核的发病率是普通人群 的5—15倍（2002年）