γ干扰素释放试验在结核感染临床诊断中的应用ppt课件

• 国内研究数据显示敏感度和特异度差别较大，敏感 性53~98％，特异性60％～90％，但多数文献报 道的敏感度和特异度>70％，优于PPD试验。
• 考虑到我国肺结核患者中，菌阴者所占比例较高， 在这类患者缺乏细菌学依据时，斑点试验能够给病 人的诊断提供帮助。
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结核活动性评价
• 结核分支杆菌(MTB)进入人体后，仅有一小部分人发展为活动 性结核病，大多数人为结核潜伏感染者(LTBI)
✓结核分枝杆菌进入人体后，能够诱导机体产生特异性中央记忆细胞 (CCR7+，CD27+)和效应型记忆细胞(CCR7-，CD27-)。在结核菌 被清除前，此类细胞不会消除。当这些细胞再次接触到结核菌蛋白 质时，就会释放细胞因子，γ干扰素是其中的一种。
✓根据结核菌进入人体后的免疫应答结果, 可以分为：无结核感染、 活动性结核、潜伏性结核和治愈四种状态。
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结核感染酶联免疫斑点试验(T-SPOT.TB)
• 2004年通过欧洲批准 • 2005年通过加拿大批准 • 2008年通过美国FDA审批
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T-SPOT.TB结果临床应用及评价
• T-SPOT.TB结果究竟有什么临床意义？ • 阳性能否肯定结核诊断？ • 哪些人需要进行T-SPOT.TB筛查？ • 和既往诊断方法比较，其优缺点是什么？
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试验方法
空白对照组 阳性(植物血凝素)对照组 抗原A组 抗原B组
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实验结果解读
• 实验误差的判断：空白组斑点＜10个，并且阳性对照组 ＞20个，视为实验有效。
• 如果空白对照＞10个，或阳性对照组＜20个，均视为实 验条件不正常。该条件下得出的实验结果属于“不确 定”。实验室应该查找原因，重新检测。
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概况
• 结核病临床表现多样, 可累积全身组织器官, 肺外结核更加隐匿, 临床明确诊断十分困难。
• 既往辅助诊断：结核菌素皮试(tuberculin skin test, TST)、体液 涂片镜检、分枝杆菌培养、组织病理、结核抗体检测、结核PCR 检测等
• 结核菌素皮试(TST)长期以来作为辅助诊断结核感染的重要手段。
✓免疫力正常的感染者, 获得性细胞及体液免疫，只能控制结核感染
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结核杆菌特异性抗原
• RD-1的基因编码是结核分枝杆菌特有的基因
• RD-1在卡介苗菌株和绝大多数非结核分支杆菌中不存 在
• 按照RD-1基因编码产生的蛋白（ESAT-6 和CFP-10） 具有高度特异性。找到由此蛋白诱导产生的γ-干扰素， 就能准确判断体内是否存在结核菌。
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敏感性与特异性评价
• Kmi 等研究了72例肺外结核患者， 结果提示：对 于活动性肺外结核, T-SPOT.T和PPD的敏感性分别 为94%和47%(P<0.001)。
• Pai等的Meta分析研究了290名受试者, 93% 为无结核接 触史的健康成年人, 其综合特异性为93%
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敏感性与特异性评价
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实验结果判断----无反应性
• 不符合“有反应性”条件，属于“无反 应”。即视为阴性。
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实验结果判断----假阴性
• 当阳性对照组结果为“不确定”(＜20个)，且 抗原A和B孔均”无反应“时，试验结果判断 为”不确定“。
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敏感性与特异性评价
• 由于潜伏性结核感染的诊断无金标准, T-SPOT.TB 敏感性评价仅在 培养或病理阳性的活动性结核患者中进行。
• T-SPOT.TB的斑点数虽然不能精确地与结核活动程度呈正相关, 但仍然存在着结核活动程度越高斑点数越多的趋势。
• T-SPOT.TB 阳性人群, 定期复查监测斑点数变化很有必要。如 果T-SPOT.TB 斑点数在短时间内显著增加, 则强烈提示体内结 核活动, 给予预防性治疗十分必要 。
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潜伏病人的筛查
• Pai等对726例受试者进行研究。其中，绝大多数是结核培养阳性、 HIV 阴性的成年人。结果T-SPOT.TB 综合敏感性90%。在免疫力低 下的人群中, 依然维持较高的敏感性。
• Liebeschuetz等报道了293例非洲儿童的随访结果, 平均年龄3 岁, 约46% HIV 阳性, 多数合并营养不良。对于确诊或高度怀疑结核的 病例, T-SPOT.TB阳性率83%, PPD 阳性率为63%(P<0.001)。提示： 年龄、HIV 感染状态和营养不良的严重程度对T-SPOT-TB结果无影 响, 但均能导致PPD 敏感性下降。
结核感染酶联免疫斑点试验(T-SPOT.TB) 在结核感染诊断中的应用
王 强 2017年7月
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概况
• 目前，结核病仍然是全球严重的公共卫生问题之一。据 WHO估计, 全球有约20 亿人感染结核分枝杆菌,每年有约 200万人死于结核。
• 我国是世界上22个结核病高负担国家之一, 结核感染导致 的死亡人数是其他传染性疾病总死亡人数的2倍以上。
Hale Waihona Puke Baidu
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实验结果判断----有反应性
➢任一抗原组出现斑点，称之为”有反应性“。有反应性判断与空白对 照斑点数量相关。符合以下条件之一的判断为”阳性“ 1.当空白组斑点数小于6时，任一实验孔斑点数减去空白对照后≥6, 结果判为阳性； 2.当空白对照孔内斑点数大于6时, 任一实验孔斑点数大于空白对照
的2倍, 结果判为阳性。
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结核感染酶联免疫斑点试验(T-SPOT.TB)
✓通过酶联技术使含有这种体征性细胞因子(γ-干扰素) 的细胞着色，形成可识别斑点，具有直观、快速诊断 结核感染的优点。
✓T-SPOT.TB是以酶联免疫技术检测结核感染的新方 法。是目前最敏感的抗原特异性T细胞检测方法之一。
✓是在单细胞水平检测γ-干扰素的分泌情况。
•敏感性优于结核菌素试验，且不受卡介苗 接种的影响 •较少受到其他分支杆菌的影响 •阴性意义大于阳性，排除诊断更佳。
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TST 缺陷
• 在易受结核感染的免疫力低下人群中, 敏感性低; • 结核菌素纯蛋白衍生物(PPD)是200多种蛋白的混合物。其
中，含有非结核分枝杆菌及卡介苗( BCG)的抗原成分, BCG 接种人群的“假阳性”率高。
• 皮试的操作和结果的判断，存在一定主观性, 降低了检查的 准确性。
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概况