植酸酶产生菌的筛选

植酸酶产生菌的筛选
一、实验目的要求：
1、明确透明圈法筛选植酸酶产生菌的原理；
2、掌握从土壤中筛选微生物的基本要点；
3、掌握自然选育菌株的初筛方法。

二、实验原理：
植酸酶是催化植酸及其盐类水解为肌醇与磷酸盐的一类酶的总称，属磷酸单酯水解酶。

菌株若产植酸酶，可以将培养基中不溶的植酸钙水解，从而在单菌落周围出现透明圈，一般来讲，透明圈与菌落直径比越大，则该菌株产植酸酶的活性越强。

三、实验试剂
葡萄糖15 g·L-1，植酸钙5.0 g·L-1，(NH4)2SO4 3 g·L-1，MgSO4·7H2O 0.5 g·L-1，KCl 0.5 g·L-1，FeSO4·7H2O 0.1 g·L-1，MnSO4·7H2O 0.1 g·L-1，琼脂20 g·L-1，pH7.0
四、实验步骤
1、取土样
在枯枝败叶较多的地方，土层厚度大约8cm；
2、溶解
取5 g土样于100 mL烧杯中，加入45 mL无菌生理盐水，用玻璃棒不停地搅拌，待大颗粒溶解后，全部倒入100 mL锥形瓶，于100r·min-1的摇床上离心30 min，放入无菌室静置。

3、涂布菌悬液
梯度稀释：用枪头取0.9 mL无菌水于2个离心管中，分别编号为10-1和10-2，打开装有土壤菌悬液的锥形瓶，取0.1 mL上清液注入编号为10-1离心管，盖上盖子摇匀，更换枪头从编号为10-1离心管取0.1 mL菌悬液，注入编号为10-2离心管，盖上盖子摇匀。

涂布过程：取3个平皿，分别注入0.1 mL土壤菌悬液，用三支已灭菌涂布棒涂匀静置，同上操作涂布10-1与10-2浓度的土壤菌悬液。

培养箱培养，在28℃下培养4天，从培养24h起，以后每12h观察一次，直至平皿中出现透明圈，立即进行菌种的纯化。

4、计数
统计透明圈的数目，并计算最大透明圈与菌落直径的比值。

五、实验结果
每个稀释度相应透明圈的数目；
最大透明圈与菌落直径的比值。

六、分析与讨论
有些情况下，透明圈与菌落直径比值大的菌株的酶活不一定高，为什么？。