第十一章 药品微生物

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无菌检查法
• 供试品的无菌检查
III. 无菌检查结果判断
• • 各培养物按规定温度连续培养14 天。培养期间逐 日观察并记录是否有菌生长 根据《中国药典》的无菌检查规定，在培养期结 束后，只有当阳性对照管浑浊并确有细菌生长、 阴性对照管澄清时，才可依据所观察到的现象判 断无菌检查的结果
无菌检查法
– 在建立药品无菌检查法时，要对方法进行验证，以确 认所建方法适合于该药品的无菌检查。 – 验证方法同样也有薄膜过滤法和直接接种法两种。
无菌检查法
• 无菌检查的局限性与规定灭菌药品的无菌保证
– 由于无菌检查局限性，规定灭菌药品在SAL概率意义 上的无菌保证不能依赖于最终产品的无菌检查，而应 取决于生产过程中采用验证合格的灭菌工艺、严格的 GMP管理和良好的质量保证体系。
热原和细菌内毒素检查法
• 细菌内毒素检查法
– 又称为鲎试验（Limulus test） – 利用鲎试剂与内毒素产生凝集反应的机制，来判断供 试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法
药品微生物限度标准
• 规定灭菌药品的微生物学标准
– 制剂通则、品种项下要求无菌的制剂及标示无菌的制 剂，应符合无菌检查法规定。用于手术、烧伤或严重 损伤的局部给药制剂，应无菌检查法规定。
药品生境的主要特征
• 与微生物生长繁殖相关的生境特征可归内为以 下5大类：
1. 糖类和蛋白质等营养成分 2. 3. 4. 5. 6. 离子物质 水分 酸碱度 渗透压 抑制剂或防腐剂
第二节 药品微生物污染的来 源、种类及其卫生学意义
药品微生物污染的来源和种类
• 药品微生物污染的来源有：
1. 2. 3. 4. 来源于原辅料本身的污染 来源于空气微生物 来源于水微生物 其他来源
非规定灭菌药品的微生物污染
1.口服制剂
– 主要有固体剂型和液体剂型两种。 – 固体剂型由于含水量较低，较少受到微生物污染。
– 液体剂型较易受到微生物污染。
– 糖浆剂易受到真菌污染。 – 以动植物为原料的制剂，最易受到来自动物或土壤中 微生物污染。
非规定灭菌药品的微生物污染
2.外用制剂
– 乳膏剂和凝胶剂由于含水量较高，糊剂由于含淀粉量 较多，在贮存和反复使用过程中易受细菌或霉菌的污 染。 – 常见的污染菌有葡萄球菌、变形杆菌、大肠埃希菌、 厌氧芽胞梭菌，以及酵母菌和霉菌等。
2.滴眼剂和眼药膏
– 根据国家药典，滴眼剂和眼药膏必须保持无菌状态 – 滴眼剂和眼药膏由于pH与渗透压接近于泪液，非常适 合细菌生长 – 常见的污染菌有铜绿假单胞菌、葡萄球菌、类白喉杆 菌、枯草杆菌等。
规定灭菌药品的微生物污染
3.其他灭菌和无菌制剂
– 包括体内埋植制剂、创面用制剂和海绵剂等 – 这些制剂在生产和使用过程中也易被各种微生物污染
主要来源是生产药品的原辅料染菌量过高， 其次是生产流程不合理、用水处理不当
不同种类药品的微生物污染
• 根据用药途径和使用要求，药品可分为两大类：
– 规定灭菌药品，这类药品要求达到无菌。
– 非规定灭菌药品，这类药品允许存在一定数量的细菌， 但对染菌的数量和种类有相应的卫生标准。
规定灭菌药品的微生物污染
微生物限度检查
药品微生物总数检查 根据《中国药典》规定 – 细菌落总数是指每克、每毫升或每10 cm2在需氧条件 下，30℃~35℃培养3d天，在营养琼脂平板上生长的菌 落数。 – 霉菌和酵母菌菌落计数，采用玫瑰红钠琼脂或酵母浸 出粉胨葡萄糖琼脂为培养基，23℃~28℃培养5d
微生物限度检查
控制菌的检查
第三节 药品微生物检测 与卫生标准
药品微生物检测的特殊性
1. 药品生境的多样性和复杂性
• 不同剂型药品的酸碱度、渗透压和含水量均不同， 有些剂型还含有一定的抑菌剂或防腐剂。这些因 素构成了药品生境的多样性和复杂性，由此导致 微生物在不同药品中具有不同的生长繁殖特征。
2. 微生物数量少，分布不均
• 一般情况下，污染药品的微生物不仅数量较少， 而且在原辅料、半成品、成品和包装材料上的分 布是不均匀的 。
药品微生Baidu Nhomakorabea检测的特殊性
3. 多数为亚致死状态的损伤菌
• 这些损伤菌如果直接用常规方法检测时，可出现 “阴性”或计数偏低的结果。
4. 微生物消长的多变性
• 药品微生物消长多变性的主要表现为，污染药品 的微生物可随贮存时间的延长而逐渐衰亡，也可 因环境条件适宜而大量繁殖
药品微生物检查内容
• 药品微生物检查的内容主要包括：
微生物限度检查
• 微生物限度检查的定义：
– 是指检查非规定灭菌制剂及其原料、敷料受到微生物 污染程度的方法。
– 药品微生物限度检查的内容包括微生物总数（细菌总 数、霉菌和酵母菌数）检查和控制菌检查 。
微生物限度检查
药品微生物总数检查
– 定义：检测药物在单位质量（g）、体积（ml）或表面 积（cm2）内所含的活菌数量，用来判断药品受微生物 污染的程度。 – 是药品质量的一个重要评价指标。 – 检查项目包括细菌总数、霉菌和酵母菌数的计数检查。
药品微生物的卫生学意义
• 药品变质的判断依据
① ② ③ ④ 从药品中分离到病原微生物 口服及外用药检出的微生物总数超过限度标准 无菌制剂中检出微生物 药品中虽未检出微生物，但存在微生物所产生的毒性 代谢产物，如热原质、真菌毒素等 ⑤ 药品出现上述肉眼可见的感观性状改变和（或）理化 性状改变。
药品微生物的卫生学意义
• 药品变质的后果
① 出现有害的微生物代谢产物 微生物污染药品后，在 生长繁殖过程中可释放大量有害物质 ② 失去药用价值 微生物污染药品后，可降解药品中的 活物物质，导致药品失效 ③ 危害用药者的身心健康 染菌药品被误用后，可能导 致药源性感染（drug-borne infection）、中毒或超敏 等不良反应
非规定灭菌药品的微生物污染
3.消毒剂与洗涤剂 – 常检出革兰阴性杆菌，如铜绿假单胞菌、克雷伯菌、 大肠埃希菌
4.中药材
– 最容易受微生物，尤其是真菌污染
– 中成药在贮藏过程中还常常受到螨类的污染
药品微生物的卫生学意义
1.微生物引起药品变质
– 药品变质的现象
① ② ③ ④ ⑤ 异味 变色 黏稠现象 颗粒现象 其他现象，沉淀、混浊或云雾状改变，也可产生 菌团或膜状物。
• 细菌内毒素（endotoxin）
– 是革兰阴性菌细胞壁的组分，是在细菌死亡破裂后释 放出的毒性脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）。
热原和细菌内毒素检查法
• 热原检查法
– 也称为家兔热原试验 – 将一定剂量的供试品静脉注入家兔体内，在规定时间 内观察家兔体温升高的情况，以判定供试品中所含热 原的限度是否符合规定
– 培养基的适应性检查与检查方法的验证：
• 在建立药品微生物限度检查法时，同样应进行培养基的适用性 检查和检查方法的验证，以确认所采用的培养基和方法适合于 该药品的细菌、霉菌和酵母菌数，以及控制菌的测定。
热原和细菌内毒素检查法
• 热原（pyrogen）：
– 泛指那些能引起机体发热的物质。热原普遍存在于自 然水、自来水、尘埃中，细菌内毒素也是热原的来源 之一。
无菌检查法
• 常用的无菌检查方法：
– 硫乙醇酸盐液体培养基用于需氧菌和厌氧菌检查，改 良马丁培养基用于霉菌检查，聚山梨酯80培养基用于 油剂药品的无菌检查，使之成为均匀的乳浊液。
无菌检查法
•
I.
供试品的无菌检查
无菌检查的抽样 • 随机抽样方法有3种，百分数抽样法、固定抽样 法和综合抽样法。 • 在无菌检查的抽样时，应特别注意“批”的概念 • 在抽样时还应关注“检验数量”和“检验量”这 两个概念
1.注射剂和输液剂
– 根据国家药典，此类药品必须达到无菌要求。 – 当生产环境不洁、灭菌不彻底、瓶塞不严或漏气等原 因存在时，这类药品可能污染微生物。 – 污染的微生物以革兰阴性菌多见，如大肠埃希菌、产 气杆菌、变形杆菌和铜绿假单胞菌等；也可见到革兰 阳性菌、真菌和放线菌等的污染。
规定灭菌药品的微生物污染
• 无菌检查的环境要求
– 无菌检查试验的所有操作均必须在严格控制的无菌保 障条件下进行，以确保无菌检查结果的正确 – 《中国药典》规定无菌检查应在环境洁净度 10 000 级 下的局部洁净度 100 级的单向流空气区域内或隔离系 统中进行，其全过程应严格遵守无菌操作，防止微生 物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的 检出。
– 无菌检查（sterility tests） – 微生物限度检查（microbial limit tests） – 细菌内毒素和热原质检查 （bacterial endotoxin test, pyrogen test）
无菌检查法
• 无菌检查的定义：
– 系指用于检查药典要求无菌的药品、医疗器具、原料、 辅料、及其他品种是否无菌的方法。若供试品符合无 菌检查法的规定，则表明供试品在该检验条件下未发 现微生物污染。 – 凡是直接进入人体血循环系统、肌肉、皮下组织或接 触创伤、溃疡和烧伤等部位而发挥作用的制品，或者 要求无菌的材料、灭菌器具等都要进行无菌检查，以 最大限度地保证这些制剂或用品不带有活菌。
无菌检查法
• 常用的无菌检查方法：
– 包括需氧菌、厌氧菌和真菌三类微生物的检查 – 要求用最严格的无菌操作法，将待检药品或材料的检 样分别接种于适合微生物生长的不同培养基中，置于 适宜温度下培养一定时间，逐日观察微生物生长情况， 并结合阳性和阴性对照试验的结果，判断是否受到微 生物污染，从而判断供试品是否合格。
药品微生物限度标准
• 非规定灭菌药品的微生物限度标准
第四节 药品微生物污染预防
药品微生物污染预防
一、防止药品微生物污染的措施 二、药品生产质量管理
防止药品微生物污染措施
1. 2. 3. 4. 加强药物的生产管理 合理使用防腐剂 实施微生物学检验 合理贮存药品
药品生产质量管理
• 药品生产质量管理要求
1.药品生产环境的管理
（1）洁净室的分级
药品生产质量管理
• 药品生产质量管理要求
1. 药品生产环境的管理
（2）药品生产环境空气洁净度的要求 我国要求 • 非最终灭菌药品，对于灌装前不需除菌滤过的药液配制要求 100级或10000级背景下局部100级，对于灌装前需除菌滤过的 药液配制要求10000级 • 最终灭菌药品，对于大容量注射剂(≥50ml)的灌封要求100级或 10000级监督下的局部100级，对于注射剂的稀配、滤过以及小 容量注射剂的灌封等要求10000级
– 定义：药品中不得检出的细菌就称为控制菌 – 《中国药典》规定的控制菌检查项目包括： • 大肠埃希菌、大肠菌群、沙门菌、金黄色葡萄球菌、 铜绿假单胞菌、梭菌属和白色念珠菌。 • 其中，梭菌属包括能产生强烈外毒素的产气荚膜梭 菌、破伤风梭菌、肉毒梭菌和艰难梭菌。
微生物限度检查
• 微生物限度检查的要求
第十一章 药品微生物
郑铃 福建医科大学 公共卫生学院
第一节 药品生境特征
第一节 药品生境特征
• 从微生物学角度考虑，药品生境特征可分为：
1. 药品具备微生物所需的营养物质和生长条件，一 旦被污染，微生物可在其中生长繁殖。
2. 药品由于含有不同种类的抑菌剂或防腐剂，对微 生物具有一定的杀灭或抑制作用。
无菌检查法
• 供试品的无菌检查
II. 阳性和阴性对照试验
• • 供试品无菌检查试验必须同时设置阳性和阴性对 照试验，以保证试验结果的真实可靠 阳性对照试验是检查阳性对照菌在加入供试品的 培养基中能否生长，以验证供试品有无抑菌活性 物质和试验条件是否符合要求的试验。 阴性对照试验是在无菌检查时，应取相应溶剂和 稀释液同法操作，作为阴性对照。
– 环境要求：
• 细菌和控制菌的培养温度为30℃~35℃，霉菌和酵母菌的培养 温度为23℃~28℃。
– 检验量：
• 是指一次试验所用的供试品量。 • 微生物限度检查的供试品检验量通常为10g或10ml，化学膜剂 为100cm2，贵重药品和微量包装药品的检验量可以酌减。
微生物限度检查
• 微生物限度检查的要求
无菌检查法
• 无菌检查的培养基要求
– 培养基制备：可按《中国药典》规定的处方制备，也 可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基 – 培养基的适用性检查：在无菌检查正式开始前或同时， 要求对无菌检查用的硫乙醇酸盐液体培养基和改良马 丁培养基进行无菌性检查和灵敏度检查
无菌检查法
• 无菌检查方法的验证试验