苦荞茶中黄酮提取工艺优化及不同品牌苦荞茶黄酮含量比较

苦荞茶中黄酮提取工艺优化及不同品牌苦荞茶黄酮含量比

较

企业争相生产的产品。目前，市场上所售苦荞茶按照加工方式和原料不同可以分为造粒苦荞茶、全麦苦荞茶和全株苦荞茶三类[11]。本试验共收集了凉山州境内8个苦荞茶生产企业的19个产品，并对其中黄酮类物质含量进行比较分析，以期为苦荞茶生产企业提供一定参考。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

苦荞茶黄酮提取工艺优化试验所用苦荞茶均为市购；苦荞茶黄酮含量测定比较试验所用材料为四川省凉山州的19种苦荞茶，包括西部村寨黑苦荞香茶、三匠黑苦荞全株茶、三匠全胚黑苦荞茶、三匠苦荞茶、航飞苦荞全麦茶、航飞节节苦荞茶、航飞黑苦荞茶、航飞苦荞养颜茶、航飞苦荞维P茶、环太黑苦荞全株茶、环太全胚芽黑苦荞茶、邛都黑苦荞茶、邛都苦荞茶、源辉黑苦荞胚芽茶、源辉苦荞茶香型、高山彝人苦荞香茶、高山彝人黑苦荞香茶、汇荞黑苦荞香茶、汇荞黑苦荞全胚茶。芦丁标品，美国Sigma公司；无水乙醇、亚硝酸钠、氢氧化钠和硝酸铝等均为分析纯。

1.2 仪器与设备

UV2300紫外/可见分光光度计（上海第三分析仪器厂）、索氏脂肪提取器（北京华运安特科技有限责任公司）、电子天平（沈阳龙腾`电子有限公司）、电热恒温水浴锅（北京市长风仪器仪表公司）、ZKJ-1型循环水真空泵（上海嘉鹏科技有限公司）、电热鼓风干燥箱（北京市永光医疗仪器厂）、小型中药粉碎机WK-150、高速离心机TDL-40B-B。

1.3 方法

1.3.1 检测波长的选择

取芦丁标准品溶液适量，在0.5 mL 5%亚硝酸钠溶液存在的碱性条件下，经硝酸铝显色后，以试剂为空白参比液在400～700 nm波长范围测定螯合物的吸光度，螯合物在510 nm波长处有最大吸收，故测定时选用此波长。

1.3.2 标准曲线的绘制

准确称取芦丁标准试剂0.152 3 g，用70%乙醇溶解定容于500 mL容量瓶中，得到质量浓度为0.304 6 mg/mL的芦丁标准液。准确移取芦丁标准溶液1、2、4、6、8 mL，分别用蒸馏水补充至12.5 mL，加入5%NaNO2溶液0.7 mL，摇匀，放置5 min，加入10%Al （NO3）3溶液0.7mL，摇匀，6 min后加入40%NaOH溶液5.0 mL，用蒸馏水定容至25 mL，摇匀，静置10 min后，用可见分光光度计于510 nm处测定吸光度[12-14]，以吸光值为纵坐标，芦丁浓度为横坐标，绘制标准曲线。得吸光度（Y）对质量浓度（X）的线性回归方程为：Y=0.0081X-0.000 7，R2=0.998 8，在12～97 mg/L范围内与吸光度线性关系良好。

1.3.3 苦荞茶中黄酮提取工艺优化试验

取苦荞茶样品，粉碎。准确称取苦荞茶粉末10.00 g，利用热水浸提法提取，加入不同体积分数的乙醇溶液，选择不同的料液比，不同的提取时间，不同的提取温度，放入恒温水浴锅中进行提取、抽滤，所得滤液经旋转蒸发仪浓缩至10～20 mL，用70%乙醇溶液定容至100 mL，利用1.3.2的方法测得芦丁含量，重复3次后取平均值，计算得率。

分别以乙醇溶液体积分数、料液比、提取时间和提取温度为单因素进行试验，在单因素试验基础上，进行正交试验。

1.3.4 苦荞茶黄酮含量的测定试验

在正交试验所得到的最佳提取工艺基础上，对19种苦荞茶进行黄酮含量的测定。按下列公式计算：

W=[C×V×D×100/m×1000×（100-H）]×100%。

其中：C为由标准曲线计算得出的待测液的总黄酮浓度（mg/mL）；V为待测液体积（mL）；D为稀释倍数；m为称取苦荞茶的质量（g）；H为苦荞茶水分的质量分数。

2 结果与讨论

2.1 不同提取条件对苦荞茶总黄酮得率影响的单因素试验

2.1.1 乙醇溶液体积分数的影响

选择乙醇溶液体积分数为50%、60%、70%、80%、90%进行单因素试验，对苦荞茶总黄酮得率的影响见图1。乙醇溶液体积分数在50%～70%时，黄酮得率随乙醇溶液体积分数的增大而增加。由于乙醇浓度增大，其极性变小，有利于极性较小的黄酮类化合物的溶出，故得率呈上升趋势[15]。当乙醇溶液体积分数为70%时，黄酮得率最高为1.54%。随着乙醇溶液体积分数大于70%时，黄酮得率继而出现降低的趋势，可能因为提取过程中黄酮类物质易溶于与其极性相似的乙醇[16]。

2.1.2 料液比的影响

选择料液比为1∶10、1∶15、1∶20、1∶25、1∶30（g/mL）进行单因素试验。由图2可知，总黄酮得率随溶剂用量的加大而提高，当料液比小于1∶25时，差异显著；当料液比大于1∶25时，差异不显著；在料液比1∶25 g/mL时，黄酮得率最高为1.78%。这可能是由于料液比会影响溶剂的极性从而导致样品中不同极性黄酮类化合物的溶解性不同，也可能因为料液比直接影响了样品的溶解性[17]。但是，当扩散达到平衡后，再增加溶剂用量也无法使提取物含量增加。

2.1.3 提取时间的影响

选取1、2、3、4、5 h进行单因素试验，结果如图3所示。总黄酮得率随提取时间的增加呈上升趋势，当提取时间小于4 h时，得率随提取时间延长而显著提高；当提取时间大于4 h时，总黄酮得率随提取时间延长变化不显著；提取时间为4 h时，总黄酮得率最大为1.79%。由于时间的增大有利于黄酮类物质的溶出，超过最佳提取时间后，部分黄酮类随着加热时间的延长而分解，导致得率下降；当时间进一步延长，黄酮类物质分解完全后，得率趋于平衡[16]。

2.1.4 提取温度的影响

选取温度为50、60、70、80、90 ℃进行单因素试验，结果如图4所示。当温度在50～70 ℃时，黄酮得率随温度的升高而提高显著；当温度为70 ℃时，黄酮得率最大为1.79%；当温度高于70 ℃时，黄酮得率反而下降，这可能是因为黄酮本身具有还原性，高温使黄酮被氧化导致[18]。

2.2 苦荞茶黄酮提取工艺的正交试验优化结果

在单因素试验基础上，选择乙醇溶液体积分数、料液比、提取时间、提取温度进行L9（34）正交试验，重复3次。以黄酮得率为考察指标，研究各因素对苦荞茶中黄酮得率的影响。正交试验因素水平表见表1，试验设计及结果见表2。由表2可知，影响苦荞茶中黄酮得率的因素主次顺序为：各因素对苦荞茶中黄酮类物质得率的影响由大到小分别为：提取温度>提取时间>乙醇溶液体积分数>料液比。热水提取苦荞茶中黄酮的最佳组合为A1B2C2D2，即乙醇浓度60%，料液比1∶25，提取时间4 h，温度70 ℃。对最佳提取工艺条件A2B2C2D2进行验证实验，结果黄酮得率为1.98%，表明这种工艺条件比较合理。

2.3 不同种类苦荞茶黄酮含量比较

2.3.1 造粒苦荞茶总黄酮含量比较