最全的液相色谱知识整理要点

最全的液相色谱知识（包括原理，维护，基础操作，处理方法）

HPLC日常维护-

进样阀问题可能原因解决方法

手动进样阀，转动不灵转子密封损坏更换或调整转子密封转子太紧调整转子的松紧度

手动进样阀，载样困难进样阀安装不当重新安装定量环阻塞清洗或更换定量环进样器污染清洗或更换进样器管路阻塞清洗或更换管路

自动进样阀，不能转动无压力（或电源）提供恰当的压力（电源）转子太紧调整转子的松紧度

进样阀安装不当重新安装

自动进样阀，其它问题

阻塞清洗或更换阻塞部件机械故障见随机维修手册控制器故障维修或更换控制器

出现问题可能原因解决方法

保留时间变

化柱温变化柱恒温，必要时需配置恒温箱

等度与梯度间未能充分平衡至少用10倍柱体积的流动相平衡柱缓冲液容量不够用>25mmol/L的缓冲液

柱污染每天冲洗柱

柱内条件变化稳定进样条件,调节流动相

柱快达到寿命采用保护柱

保留时间缩

短流速增加检查泵,重新设定流速

样品超载降低样品量

键合相流失流动相PH值保持在3~7.5检查柱的方向流动相组成变化防止流动相蒸发或沉淀

温度增加柱恒温

保留时间延

长流速下降管路泄漏,换泵密封圈,排除泵内气泡

硅胶柱上活性点变化用流动相改性剂,如加三乙胺,或采用碱至钝化柱键合相流失流动相PH值保持在3~7.5检查柱的方向

流动相组成变化防止流动相蒸发或沉淀

温度降低柱恒温

出现肩峰或

分叉样品体积过大用流动相配样,总的样品体积小于第一峰的15% 样品溶剂过强采用较弱的样品溶剂

柱塌陷或形成短路通道更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件

柱内烧结不锈钢失效更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品

进样器损坏更换进样器转子

鬼峰进样阀残余峰每次用后用强溶剂清洗阀,改进阀和样品的清洗

样品中未知物处理样品

柱未平衡

重新平衡柱,用流动相作样品溶剂(尤其是离子对

色谱)

三氟乙酸(TFA)氧化(肽谱) 每天新配,用抗氧化剂

水污染(反相) 通过变化平衡时间检查水质量，用HPLC级的水

基线噪声气泡(尖锐峰) 流动相脱气,加柱后背压

污染(随机噪声) 清洗柱,净化样品,用HPLC级试剂

检测器灯连续噪声更换氘灯

电干扰(偶然噪声) 采用稳压电源,检查干扰的来源(如水浴等) 检测器中有气泡流动相脱气,加柱后背压

峰拖尾柱超载降低样品量,增加柱直径采用较高容量的固定相

峰干扰清洁样品,调整流动相

硅羟基作用

加三乙胺,用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降

低流动相PH值,钝化样品

柱内烧结不锈钢失效更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品

柱塌陷或形成短路通道更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件

死体积或柱外体积过大

连接点降至最低,对所有连接点作合适调整,尽可能

采用细内径的连接管

柱效下降用较低腐蚀条件,更换柱,采用保护柱

峰展宽进样体积过大用流动相配样,总的样品体积小于第一峰的15% 在进样阀中造成峰扩展进样前后排出气泡以降低扩散

数据系统采样速率太慢设定速率应是每峰大于10点

检测器时间常数过大设定时间常数为感兴趣第一峰半宽的10%

流动相粘度过高增加柱温,采用低粘度流动相

检测池体积过大用小体积池,卸下热交换器

保留时间过长等度洗脱时增加溶剂含量也可用梯度洗脱

柱外体积过大将连接管径和连接管长度降至最小

样品过载进小浓度小体积样品

流动相

a、流动相对样品具有一定的溶解能力

b、流动相具有一定惰性，与样品不产生化学反应(特殊情况除外)。

c、流动相的黏度要尽量小

d、流动相的物化性质要与使用的检测器相适应

e、流动相沸点不要太低，否则容易产生气泡，导致实验无法进行。

f、在流动相配制好后，一定要进行脱气。

1.流动相必须用HPLC级的试剂.

2.流动相过滤后要用超声波脱气.脱气后应该恢复到湿温后使用.

3.长时间不使用仪器,应该将柱子取下用堵头封好保存.

4.每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂清洗进样器.

流动相对样品有适当的溶解度，但不与样品发生化学反应，也不与固定液互溶；

流动相的纯度要高（至少分析纯）、粘度要小，以免带进杂质和组分在流动相中扩散系数下降；流动相应与所用检测器相匹配，不应对组分检测产生干扰作用。

对于一根特定的色谱柱，要追求最佳柱效，最好使用最佳流速。

对于内径为4.6mm的色谱柱，流速一般选择1ml／min，

对于内径为4.0mm的色谱柱，流速0.8ml／min为佳。

当选用最佳流速时，分析时间可能延长。

可采用改变流动相的洗涤强度的方法以缩短分析时间(如使用反相柱时，可适当增加甲醇或乙腈的含量)。

流动相一般贮存于玻璃、聚四氟乙烯或不锈钢容器内，不能贮存在塑料容器中。因许多有机溶剂如甲醇、乙酸等可浸出塑料表面的增塑剂，导致溶剂受污染。种被污染的溶剂如用于HPLC 系统，可能造成柱效降低。贮存容器一定要盖严，防止溶剂挥发引起组成变化，也防止氧和二氧化碳溶入流动相。

磷酸盐、乙酸盐缓冲液很易长霉，应尽量新鲜配制使用，不要贮存。如确需贮存，可在冰箱内冷藏，并在3天内使用，用前应重新滤过。容器应定期清洗，特别是盛水、缓冲液和混合溶液的瓶子，以除去底部的杂质沉淀和可能生长的微生物。因甲醇有防腐作用，所以盛甲醇的瓶子无此现象。

一、为了延长泵的使用寿命和维持其输液的稳定性请按照以下注意事项操作：

1、防止任何固体微粒进入泵体，因为尘埃或其它任何杂质都会磨损柱塞、密封环、缸体和单向阀，因此应预先除去流动相中的任何固体微粒。流动相最好在玻璃容器内蒸馏，而常用的方法是过滤，可采用Millipore滤膜（0.2um 或0.45um ）等滤器。泵的入口都应该连接砂滤棒（或片），输液泵的滤器应经常换。

2、流动相不应含有任何腐蚀性物质，含有缓冲液的流动相不应保留在泵内，尤其是停泵过夜或更长时间的情况下。如果将含有缓冲液的流动相留在泵内，由于蒸发或泄漏，甚至只是由于溶液的静止，就可能析出盐的微小晶体，些晶体将和上述固体微粒一样损坏密封环和柱塞等。因此，必须泵入纯水充分清洗后，再换成适合于色谱柱保存和有利于泵维护的溶剂（对于反相键合固定相，可以是甲醇或甲醇和水）。

3、泵工作时要留心防止溶剂瓶内的流动相用完，否则空泵运转也磨损柱塞、密封环或缸体，最终产生漏液。

4、输液泵的工作压力不要超过规定的最高压力，否则会使高压密封环变形，产生漏液。

5、流动相应该先脱气，以免在泵内产生气泡，影响流量的稳定性，如果有大喊大量气泡，泵就无法工作。

二、如果输液泵产生故障，须查明原因，采取相应的措施排除故障：

1、没有流动相流出，又无压力指示。原因可能是泵内有大量的气体，这时可打开泄压阀，使泵在较大的流量（5ml/min）下运转，将气泡排尽，也可用一50ml的注射器在泵出口处帮助抽出气体。另一个原因可能是密封环磨损，需更换。

2、压力的流量不稳。原因可能是气泡，需要排除，或者是单向阀内有异物，可以卸下单向阀，浸入丙酮内，进行超声清洗。有时有可能是砂滤棒内有气泡或被盐的微小晶体粒或滋生的微生物部分堵塞，这时，卸下砂滤棒浸入流动相内，超声除气泡，或将砂滤棒（片）浸入稀酸（如4mol/L 硝酸）内迅速除去微生物或将盐溶解，再立即清洗。

3、压力过高的原因，是管路被堵塞，需要清除或清洗。压力降低的原因则可能是管路有泄漏。检查堵塞或泄漏时可以逐段进行。

2、新柱柱效低

柱外死体积大.样品在流动相中溶解不好，影响传质过程。-换连接管，重新连接色谱柱，降低

最全的液相色谱知识整理

最全的液相色谱知识（包括原理，维护，基础操作，处理方法） HPLC日常维护- 进样阀问题可能原因解决方法手动进样阀，转动不灵转子密封损坏更换或调整转子密封转子太紧调整转子的松紧度手动进样阀，载样困难进样阀安装不当重新安装定量环阻塞清洗或更换定量环进样器污染清洗或更换进样器管路阻塞清洗或更换管路自动进样阀，不能转动无压力（或电源）提供恰当的压力（电源）转子太紧调整转子的松紧度进样阀安装不当重新安装自动进样阀，其它问题阻塞清洗或更换阻塞部件机械故障见随机维修手册控制器故障维修或更换控制器出现问题可能原因解决方法保留时间变化柱温变化柱恒温，必要时需配置恒温箱等度与梯度间未能充分平衡至少用10倍柱体积的流动相平衡柱缓冲液容量不够用>25mmol/L的缓冲液柱污染每天冲洗柱柱内条件变化稳定进样条件,调节流动相柱快达到寿命采用保护柱保留时间缩短流速增加检查泵,重新设定流速样品超载降低样品量键合相流失流动相PH值保持在3~7.5检查柱的方向流动相组成变化防止流动相蒸发或沉淀温度增加柱恒温保留时间延长流速下降管路泄漏,换泵密封圈,排除泵内气泡硅胶柱上活性点变化用流动相改性剂,如加三乙胺,或采用碱至钝化柱键合相流失流动相PH值保持在3~7.5检查柱的方向流动相组成变化防止流动相蒸发或沉淀温度降低柱恒温出现肩峰或分叉样品体积过大用流动相配样,总的样品体积小于第一峰的15% 样品溶剂过强采用较弱的样品溶剂柱塌陷或形成短路通道更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件柱内烧结不锈钢失效更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品进样器损坏更换进样器转子鬼峰进样阀残余峰每次用后用强溶剂清洗阀,改进阀和样品的清洗样品中未知物处理样品柱未平衡重新平衡柱,用流动相作样品溶剂(尤其是离子对色谱)

经典液相色谱法习题

第10章经典液相色谱法习题（一）选择题单选题 1.组分在固定相中的质量为 m A （g ），在流动相中的质量为 m B （g ），而该组分在固定相中的浓度为C A （g /mL ）,在流动相中的浓度为 C B （g /mL ）,则此组分的分配系数是（）。 A m A / m B m B / m A C m A / （m A +m ） D C A / C B 2?在柱色谱法中，可以用分配系数为零的物质来测定色谱柱中的（）。 A 流动相的体积（相当于死体积） B 填料的体积 C 填料孔隙的体积 D 总体积 3?在以硅胶为固定相的吸附柱色谱中，正确的说法是（）。 A 组分的极性越强?被固定相吸附的作用越强 B 物质的相对分子质量越大，越有利于吸附 C 流动相的极性越强，组分越容易被固定相所吸附 D 吸附剂的活度级数越小，对组分的吸附力越大 4.纸色谱法与薄层色谱法常用正丁醇 -乙酸-水（4:1:5 ,体积比）作为展开剂，正确的操作方法是（）。 A 三种溶剂混合后直接用作展开剂作展开剂 C 三种溶剂混合，静置分层后，取下层作展开剂剂 5 .离子交换色谱法中，对选择性无影响的因素是 A 树脂的交联度 C 样品离子的电荷 6.下列说法错误的是（）。 A 用纸色谱分离时，样品中极性小的组分 R f 值大 B 用反相分配薄层时，样品中极性小的组分 R f 值小 C 用凝胶色谱法分离，样品中相对分子质量小的组分先被洗脱下来 D 用离子交换色谱时，样品中高价离子后被洗脱下来 7?在一硅胶薄板上用不同的溶剂系统分离咖啡碱和氯原酸，结果如下，从中选出最好的溶剂系统是（）。 B 三种溶剂混合、静置分层后，取上层 D 依次用三种溶剂作展开（）. B 树脂的再生过程 D 样品离子的水合半径

经典液相色谱法习题.docx

第 10 章经典液相色谱法习题一)选择题单选题 1．组分在固定相中的质量为 m A (g) ，在流动相中的质量为 m B (g) ，而该组分在固定相中的浓度为C A (g /mL),在流动相中的浓度为 Q(g /mL),则此组分的分配系数是( ) 。 A m A ／m B B m B ／ m A C m A ／(m A +m B ) D C A ／ C B 2．在柱色谱法中，可以用分配系数为零的物质来测定色谱柱中的 ( )。 A 流动相的体积 (相当于死体积 ) B 填料的体积 C 填料孔隙的体积 D 总体积 3．在以硅胶为固定相的吸附柱色谱中，正确的说法是 ( )。 A 组分的极性越强．被固定相吸附的作用越强 B 物质的相对分子质量越大，越有利于吸附 C 流动相的极性越强，组分越容易被固定相所吸附 D 吸附剂的活度级数越小，对组分的吸附力越大 4．纸色谱法与薄层色谱法常用正丁醇 -乙酸-水(4:1:5 ，体积比)作为展开剂，正确的操作方法是 ( ) 。 A 三种溶剂混合后直接用作展开剂作展开剂 C 三种溶剂混合，静置分层后，取下层作展开剂剂 5．离子交换色谱法中，对选择性无影响的因素是 A 树脂的交联度 C 样品离子的电荷 6．下列说法错误的是 ( )。 A 用纸色谱分离时，样品中极性小的组分 R f 值大 B 用反相分配薄层时，样品中极性小的组分 R f 值小 C 用凝胶色谱法分离，样品中相对分子质量小的组分先被洗脱下来 D 用离子交换色谱时，样品中高价离子后被洗脱下来 7．在一硅胶薄板上用不同的溶剂系统分离咖啡碱和氯原酸，结果如下，从中选出最好的溶剂系统是 ( )。 A 氯仿 - 丙酮 (8:2) ：咖啡碱的 R f 为 0.1 ，氯原酸的 R f 为 0.0 B 氯仿-丙酮-甲醇-乙酸(721.5:0.5):咖啡碱的R f 为0.48 ,氯原酸的R 为0.05 B 三种溶剂混合、静置分层后，取上层 D 依次用三种溶剂作展开 ( )． B 树脂的再生过程 D 样品离子的水合半径

高效液相试题及答案

高效液相色谱基础知识测试一、填空题 1、我们公司所用的高效液相色谱仪的品牌是：安捷伦1260 。高效气相色谱仪的型号是安捷伦7890 。 2、高效液相色谱系统由恒温器、四元泵、进样器、色谱柱、检测器和分析系统组成。 3、本公司所用的高效液相，为防止压力过大导致柱内填料空间发生变化，影响分离效果。一般采用C18（十八烷基硅烷键合硅胶）填料的色谱柱，最高工作压力为400 bar。 4、高效液相根据流动相与固定相极性分为：正相高效液相色谱和反相高效液相色谱。 5、开机步骤：接通电源，依次开启不间断电源、真空脱气机、四元泵、检测器，待泵和检测器自检结束后，打开电脑显示器、主机，最后打开色谱工作站。 6、高效液相的维护：最后一次进样完成后，应用流动相冲洗20分钟，以保证洗脱完全，若流动相中含有无机盐类，应用高纯水冲洗30分钟，。 7、进样器的保养：每次分析结束后，要反复冲洗进样口，防止样品的交叉污染。 8、气相色谱仪常用的检测器有热导检测器，氢火焰检测器，电子捕获检测器和火焰光度检测器。二、选择题 1.在液相色谱法中，提高柱效最有效的途径是（D ） A.提高柱温 B.降低板高 C.降低流动相流速 D.减小填料粒度 2. 在高固定液含量色谱柱的情况下，为了使柱效能提高，可选用( A )

A.适当提高柱温 B.增加固定液含量 C.增大载体颗粒直径 D.增加柱长 3. 在液相色谱中, 为了提高分离效率, 缩短分析时间, 应采用的装置是( B ) A. 高压泵 B. 梯度淋洗 C. 贮液器 D. 加温 4. 在液相色谱中, 最通用型检测器是( A ) A.示差折光检测器 B.极谱检测器 C.荧光检测器 D.电化学检测器 5. 在液相色谱中, 为了获得较高柱效能, 常用的色谱柱是( A ) A.直形填充柱 B.毛细管柱 C.Ｕ形柱 D.螺旋形柱 6. 实验室常用气相色谱仪的基本组成是（B ）。(1)光源；(2)气路系统；(3)单色器系统；(4)进样系统；(5)分离系统；(6)吸收系统；(7)电导池；(8)检测系统；(9)记录系统。 A 1-3-6-8-9 B 2-4-5-8-9 C 2-4-5-7-9 D 2-4-6-7-9 7.在气相色谱定性分析中，实验室之间可以通用的定性参数是（ D ）。 A 调整保留时间 B 校正保留时间C保留时间D相对保留值三、判断题：（正确-----√；错误----×） 1. 确基线噪音和漂移是检测器稳定性的主要技术指标（√） 2. 灵敏度是检测器的主要性能指标（√） 3. 检出限与噪音无关（×） 4. 要提高柱的分离效能，可以考虑增加柱长，增加色谱柱选择性，调节流动相的组成等措施（√） 5. 溶解于流动相中的气体在色谱分离的过程中不会影响流动相的流速和检测器的稳定性（×） 6. 分析一个复杂混合物，恒溶剂洗脱是不能令人满意的。可在分离的过程中连续改变流动相的组成，即所谓梯度洗脱( √)

高效液相色谱(HPLC)基础知识

高效液相色谱（HPLC）基础知识我国药典收载高效液相色谱法项目和数量比较表：方法项目数量 1985年版1990年版1995年版2000年版 HPLC法鉴别9 34 150 检查12 40 160 含量测定7 60 117 387 鉴于HPLC应用在药品分析中越来越多，因此每一个药品分析人员应该掌握并应用HPLC。 I．概论一、液相色谱理论发展简况色谱法的分离原理是：溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时，由于与固定相(stationary phase)发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。又称为色层法、层析法。色谱法最早是由俄国植物学家茨维特（Tswett）在1906年研究用

碳酸钙分离植物色素时发现的，色谱法(Chromatography)因之得名。后来在此基础上发展出纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、液相色谱法。液相色谱法开始阶段是用大直径的玻璃管柱在室温和常压下用液位差输送流动相，称为经典液相色谱法，此方法柱效低、时间长（常有几个小时）。高效液相色谱法(High performance Liquid Chromatography，HPLC)是在经典液相色谱法的基础上，于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱法(High Pressure Liquid Chromatography，HPLC)。又因分析速度快而称为高速液相色谱法(High Speed Liquid Chromatography，HSLP)。也称现代液相色谱。二、HPLC的特点和优点 HPLC有以下特点：高压——压力可达150~300 Kg/cm2。色谱柱每米降压为75 Kg/cm2以上。高速——流速为0.1~10.0 ml/min。高效——可达5000塔板每米。在一根柱中同时分离成份可达100种。高灵敏度——紫外检测器灵敏度可达0.01ng。同时消耗样品少。 HPLC与经典液相色谱相比有以下优点：速度快——通常分析一个样品在15~30 min，有些样品甚至在 5

(干货)液相色谱基础知识大全

一、基本原理高效液相色谱（HPLC）法是以高压下的液体为流动相，并采用颗粒极细的高效固定相的柱色谱分离技术。高效液相色谱对样品的适用性广，不受分析对象挥发性和热稳定性的限制，因而弥补了气相色谱法的不足。在目前已知的有机化合物中，可用气相色谱分析的约占20%，而80%则需用高效液相色谱来分析。高效液相色谱和气相色谱在基本理论方面没有显著不同，它们之间的重大差别在于作为流动相的液体与气体之间的性质的差别。二、高效液相色谱分析原理（1）、高效液相色谱分析的流程：由泵将储液瓶中的溶剂吸入色谱系统，然后输出，经流量与压力测量之后，导入进样器。被测物由进样器注入，并随流动相通过色谱柱，在柱上进行分离后进入检测器，检测信号由数据处理设备采集与处理，并记录色谱图。废液流入废液瓶。遇到复杂的混合物分离（极性范围比较宽）还可用梯度控制器作梯度洗脱。这和气相色谱的程序升温类似，不同的是气相色谱改变温度，而HPLC改变的是流动相极性，使样品各组分在最佳条件下得以分离。（2）、高效液相色谱的分离过程：同其他色谱过程一样，HPLC也是溶质在固定相和流动相之间进行的一种连续多次交换过程。它借溶质在两相间分配系数、亲和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差别使不同溶质得以分离。开始样品加在柱头上，假设样品中含有3个组分，A、B和C，随流动相一起进入色谱柱，开始在固定相和流动相之间进行分配。分配系数小的组分A不易被固定相阻留，较早地流出色谱柱。分配系数大的组分C在固定相上滞留时间长，较晚流出色谱柱。组分B的分配系数介于A，C之间，第二个流出色谱柱。若一个含有多个组分的混合物进入系统，则混合物中各组分按其在两相间分配系数的不同先后流出色谱柱，达到分离之目的。不同组分在色谱过程中的分离情况，首先取决于各组分在两相间的分配系数、吸附能力、亲和力等是否有差异，这是热力学平衡问题，也是分离的首要条件。其次，当不同组分在色谱柱中运动时，谱带随柱长展宽，分离情况与两相之间的扩散系数、固定相粒度的大小、柱的填充情况以及流动相的流速等有关。所以分离最终效果则是热力学与动力学两方面的综合效益。三、工作原理储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相) 内, 由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数, 在两相中作相对运动时, 经过反复多次的吸附- 解吸的分配过程,各组分在移动速度上产生较大的差别, 被分离成单个组分依次从柱内流出, 通过检测器时, 样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来。四、HPLC的特点和优点 HPLC有以下特点：高压——压力可达150~300 Kg/cm2。色谱柱每米降压为75 Kg/cm2以上。高速——流速为0.1~10.0 ml/min。高效——可达5000塔板每米。在一根柱中同时分离成份可达100种。高灵敏度——紫外检测器灵敏度可达0.01ng。同时消耗样品少。 HPLC与经典液相色谱相比有以下优点：

经典液相色谱法习题图文稿

经典液相色谱法习题集团文件版本号：（M928-T898-M248-WU2669-I2896-DQ586-M1988）

第10章经典液相色谱法习题（一）选择题单选题 1．组分在固定相中的质量为m A (g)，在流动相中的质量为m B (g)，而该组分在固定相中的浓度为c A (g ／mL)，在流动相中的浓度为C B (g ／mL)，则此组分的分配系数是( )。 A m A ／m B B m B ／m A C m A ／(m A +m B ) D C A ／C B 2．在柱色谱法中，可以用分配系数为零的物质来测定色谱柱中的( )。 A 流动相的体积(相当于死体积) B 填料的体积 C 填料孔隙的体积 D 总体积 3．在以硅胶为固定相的吸附柱色谱中，正确的说法是( )。 A 组分的极性越强．被固定相吸附的作用越强 B 物质的相对分子质量越大，越有利于吸附 C 流动相的极性越强，组分越容易被固定相所吸附 D 吸附剂的活度级数越小，对组分的吸附力越大 4．纸色谱法与薄层色谱法常用正丁醇-乙酸-水(4:1:5，体积比)作为展开剂，正确的操作方法是( )。 A 三种溶剂混合后直接用作展开剂 B 三种溶剂混合、静置分层后，取上层作展开剂 C 三种溶剂混合，静置分层后，取下层作展开剂 D 依次用三种溶剂作展开剂 5．离子交换色谱法中，对选择性无影响的因素是( )． A 树脂的交联度 B 树脂的再生过程 C 样品离子的电荷 D 样品离子的水合半径 6．下列说法错误的是( )。 A 用纸色谱分离时，样品中极性小的组分R f 值大 B 用反相分配薄层时，样品中极性小的组分R f 值小

安捷伦1260型高效液相色谱仪操作规程

一、开机 1、开机前准备：流动相使用前必须过0.45um的滤膜（有机相的流动相必须为色谱纯；水相必须用新鲜注射用水，不能使用超过3天的注射用水，以防止长菌或长藻类）；把流动相放入溶剂瓶中。A瓶：为水相B瓶：为有机相。 2、打开电脑，选Win 2000，进入Win 2000界面。 3、双击CAG Boodp server图标，放大CAG Boodp server小图标，出现窗口，5min 内打开液相各部件电源开关，等待1100广播信息后，表示通讯成功连接，关闭CAG Boodp serve窗口。 4、双击online图标，仪器自检，进入工作站。该页面主要由以下几部分组成： ——最上方为命令栏，依次为File，Run Control，Instrumen…等； ——命令栏下方为快捷操作图标，如多个样品连续进行分析、单个样品进样分析、调用文件保存文件……等； ——中部为工作站各部件的工作流程示意图；依次为进样器-输液泵-柱温箱-检测器-数据处理-报告； ——中下部为动态监测信号； ——右下部为色谱工作参数：进样体积、流速、分析停止时间、流动相比例、柱温、检测波长等。 4、从“View”菜单中选择“Method and control”画面。二、编辑参数及方法 1、开始编辑完整方法：从“Method”菜单中选择“New method”，出现DEF-LC.M，从“Method”菜单中选择“Edit entire method”，选择方法信息、仪器参数及收集参数、数据分析参数和运行时间表等各项，单击OK，进入下一画面。 2、方法信息：在“Method Comments”中加入方法的信息，如方法的用途等。单击OK，进入下一画面。 3、泵参数设定：进入“Setup pump”画面，在“Flow” 处输入流量，如1ml/min；在“Solvent B”处输入有机相的比例如70.0，（A=100-B），也可在Insert 一行“Timetable”，编辑梯度；输入保留时间；在“Pressure Limits Max”处输入柱子的最大耐高压，以保护柱子。单击OK，进入下一画面。 4、DAD检测器参数设定：进入“DAD signals”画面，输入样品波长及其带宽、参比波长及其带宽（参比波长带宽默认值为100nm）；选择Stoptime：as Pupm；在“Spectrum”中输入采集光谱方式“store”：选All；如只进行正常检测，则可选None；范围Range：可选范围为190~950nm；步长Step可选2.0nm；阀值：选择需要的灯； Peak width（Response time）即响应值应尽可能接近要测的窄峰峰宽，可选“2s”或4s； Slit-：狭窄缝，光谱分辨率高；宽时，噪音低。可选4nm

高效液相色谱基本常识

安捷伦1100及液相色谱仪的基本知识

安捷伦1100液相色谱仪各项性能指标悬赏分：5|解决时间：2010-10-16 22:13|提问者：4329211 最佳答案朋友，直接致电agilent的800-820-3278免费电话就可以得到Agilent的满意答复了系列Agilent 1100泵系统 ●电子流控阀(EFC)控制的毛细液相泵系统，精度高、流速范围广柱流速范围：1-20ul/min;10-100ul/min（可选件） 0.001-2.5m1/min(EFC关闭状态) ●高压制备泵系统，单元或双元高压制备泵流速范围:0.001-100m1/min ●分析型泵系统流速范围：单元泵：0.001-10m1/min 二元泵：0.001-5m1/min 四元泵：0.001-10m1/min 品种齐全的Agilent 1100系列进样系统 ●标准手动进样器（分析型或制备型） ●标准自动进样器样品瓶容量：可达100个(2mlx100) 进样量：0.1-100ul(0.1-1800ul)可选件 ●微盘式自动进样器样品瓶容量：2x96(孔板)，2x386(孔板)或100x2ml 进样量：0.1-100ul(标准件) 0.1-1500ul可选件 ●微量标准自动进样器/微盘式自动进样器进样量：0.01-8ul（标准）;0.01-40ul（可选） ●恒温标准自动进样器/微盘式自动进样器温度范围：4-40℃可设定步进1℃ ● 220型微孔板式自动进样器－组合化学样品管理系统样品瓶容量：各种规格试管多达12个微孔板（96孔板,384孔板）进样量：0.1-5ul;0.1-20ul Agilent 1100系列检测器 ●可变波长扫描紫外检测器（VWD) 波长范围：190?600nm ●多波长检测器(MWD)

高效液相色谱知识收藏

高效液相色谱知识收藏 Agilent1100高压液相色谱仪差不多操作步骤Agilent1100液相差不多操作步骤 Agilent1100高压液相色谱仪维护保养知识保养事项：高压液相色谱HPLC常见故障及排除方法液相色谱柱使用及保养高压液相色谱HPLC培训教程(一)

高压液相色谱HPLC培训教程(七) 高效液相色谱仪中反相HPLC柱子的清洁和再生 HPLC对流淌相的差不多要求高效液相色谱 Waters 600E-2487 HPLC系统SOPWaters高效液相色谱系统操作规程高效液相色谱仪(Agilent 1100)操作注意事项色谱扫盲班

Agilent1100高压液相色谱仪差不多操作步骤Agilent1100液相差不多操作步骤 (一)、开机： 1、打开计算机,进入Windows NT （或Windows 2000）画面,并运行Bootp Server程序。 2、打开 1100 LC 各模块电源。 3、待各模块自检完成后，双击Instrument 1 Online图标，化学工作站自动与1100LC通讯，进入的工作站画面。 4、从“View”菜单中选择“Method and Run control”画面, 单击”View”菜单中的“Show Top Toolbar”，“Show status toolbar”，“System diagram”,”Sampling diagram”，使其命令前有“√”标志，来调用所需的界面。 5、把流淌相放入溶剂瓶中。 6、打开Purge阀。 7、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Setup pump选项，进入泵编辑画面。 8 、设Flow：5ml/min，单击OK。 9、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Pump control选项，选中On，单击OK，则系统开始Purge，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止,切换信道接着Purge，直到所有要用信道无气泡为止。

液相色谱法和色谱技术练习题

经典液相色谱法和色谱技术一、单项选择题 1．在一定温度和压力下，某组分在两相间的分配达到平衡时，其在固定相与流动相中的浓度之比称为 A、分离度 B、分配系数 C、容量因子 D、相对保留值 E、保留值 2．分离性质及其相似的物质的最佳方法是 A、萃取法 B、蒸馏法 C、滴定法 D、色谱法 E、沉淀法 3．液固吸附柱色谱法中吸附剂含水量越高则 A、吸附力越强 B、活性级数越小 C、活性越高 D、吸附能力不受含水量的影响 E、吸附力越弱 4．在吸附柱色谱中，吸附常数K值大的组分 A、被吸附得牢固 B、迁移速度快 C、溶解度大 D、在柱内保留时间短 E、极性小 5．在分配柱色谱中，分配系数K值小的组分在柱中 A、被吸附得牢固 B、在流动相中浓度低 C、迁移速度慢

D、迁移速度快 E、在柱内保留时间长 6．下列说法错误的是 A、色谱法是一种依据物质的物理化学性质的不同而进行的一种分离分析方法 B、在分配柱色谱中，固定相是一种液体 C、纸色谱与分配柱色谱的分离原理是相同的 D、吸附色谱法的原理是吸附与解吸附原理 E、色谱过程是一个物理过程 7．关于色谱，下列说法正确的是 A、色谱过程是一个差速迁移的过程 B、分离极性强的组分用极性强的吸附剂 C、各组分之间分配系数相差越小，越易分离 D、纸色谱中滤纸是固定相 E、分离极性强的组分用极性弱的流动相 8．在吸附柱色谱中，分离极性大的物质应选用 A、活性级别大的吸附剂和极性小的洗脱剂 B、活性高的吸附剂和极性大的洗脱剂 C、活性低的吸附剂和极性大的洗脱剂 D、活性级别小的吸附剂和极性小的洗脱剂

E、中等活性的吸附剂和极性小的洗脱机 9．气-液色谱和液-液色谱皆属于 A、吸附色谱 B、凝胶色谱 C、分配色谱 D、离子色谱 E、分子排阻色谱 10．分配系数Ｋ是指在一定温度和压力下，某一组份在两相间的分配达到平衡时的浓度比值，色谱机制不同，Ｋ的含义不同，在吸附色谱中，K 称为 A、吸附平衡常数Ｂ、交换系数Ｃ、渗透系数Ｄ、分配系数 E、溶解平衡常数 11．吸附色谱法是依据物质的哪种性质而进行的分离分析方法 A、极性 B、溶解性 C、离子交换能力 D、分子大小 E、熔沸点 12．下列物质不能作吸附剂的是 A、硅胶 B、氧化铝 C、羧甲基纤维素钠 D、聚酰胺 E、活性炭 13．分配柱色谱的分离原理 A、吸附与解吸附原理 B、萃取原理 C、离子交换原理 D、分子排阻原理 E、毛细管电泳原理

高效液相色谱以理论常识-测含量

被分离组分在柱中的洗脱原理 Ⅱ基本概念和理论一、基本概念和术语 1.色谱图和峰参数 ⊕色谱图（chromatogram）--样品流经色谱柱和检测器，所得到的信号－时间曲线，又称色谱流出曲线（elution profile）. ⊕基线（base line）--流动相冲洗，柱与流动相达到平衡后，检测器测出一段时间的流出曲线。一般应平行于时间轴。 ⊕噪音（noise）――基线信号的波动。通常因电源接触不良或瞬时过载、检测器不稳定、流动相含有气泡或色谱柱被污染所致。 ⊕漂移（drift）基线随时间的缓缓变化。主要由于操作条件如电压、温度、流动相及流量的不稳定所引起，柱内的污染物或固定相不断被洗脱下来也会产生漂移。 ⊕色谱峰（peak）--组分流经检测器时相应的连续信号产生的曲线。流出曲线上的突起部分。正常色谱峰近似于对称性正态分布曲线（高斯Gauss曲线）。不对称色谱峰有两种：前延峰（leading peak）和脱尾峰（tailing peak ）.前者少见。 ⊕拖尾因子（tailing factor,T）--T=B/A,用以衡量色谱峰的对称性。也称为对称因子（symmetry factor）或不对称因子（asymmetry factor）《中国药典》规定T应为0.95～1.05。T<0.95为前延峰，T>1.05为拖尾峰。 ⊕峰底――基线上峰的起点至终点的距离。 ⊕峰高（Peak height,h）――峰的最高点至峰底的距离。 ⊕峰宽（peak width,W）--峰两侧拐点处所作两条切线与基线的两个交点间的距离。W=4σ。⊕半峰宽（peak width at half-height,Wh/2）--峰高一半处的峰宽。W h/2＝2.355σ。 ⊕标准偏差（standard deviation, σ）--正态分布曲线x=±1时（拐点）的峰宽之半。正常峰宽的拐点在峰高的0.607倍处。标准偏差的大小说明组分在流出色谱柱过程中的分散程度。σ小，分散程度小、极点浓度高、峰形瘦、柱效高；反之，σ大，峰形胖、柱效低。 ⊕峰面积（peak area,A）――峰与峰底所包围的面积。A=×σ×h＝2.507σh=1.064Wh/2h 2.定性参数（保留值） ⊕死时间（dead time,t0）--不保留组分的保留时间。即流动相（溶剂）通过色谱柱的时间。在反相HPLC中可用苯磺酸钠来测定死时间。 ⊕死体积（dead volume,V0）――由进样器进样口到检测器流动池未被固定相所占据的空间。它包括4部分：进样器至色谱柱管路体积、柱内固定相颗粒间隙（被流动相占据，Vm）、柱出口管路体积、检测器流动池体积。其中只有Vm参与色谱平衡过程，其他3部粉只起峰扩展作用。为防止峰扩展，这3部分体积应尽量减小。V0＝F×t0（F为流速） ⊕保留时间（retention time,tR）--从进样开始到某个组分在柱后出现浓度极大值的时间。⊕保留体积（retention volume,VR）--从进样开始到某个组分在柱后出现浓度极大值时流出溶剂的体积。又称洗脱体积。VR＝F*tR . ⊕调整保留时间（adjusted retention time,tR’）--扣除死时间后的保留时间。也称折合保留时间（reduced retention time）。在实验条件（温度、固定相等）一定时，tR’只决定于组分的性质，因此，tR’(或tR)可用于定性。TR’=tR-t0 ⊕调整保留体积（adjusted retention volume,VR’）--扣除死体积后的保留体积。VR=VR-V0 或VR=F*tR’ 3.柱效参数 ⊕理论塔板数（theoretical plate number,N）用于定量表示色谱柱的分离效率（简称柱效）。 N取决于固定相的种类、性质（粒度、粒径分布等）、填充状况、柱长、流动相的种类和流速及测定柱效所用物质的性质。如果峰形对称并符合正态分布，N可近似表示为： N=（tR/σ）2=16(tR)2/W =5.54(tR/W1/2)2 W：峰宽；σ：曲线拐点处峰宽的一半，即峰高0.607处峰宽的一半。 N为常量时，W随tR成正比例变化。在一张多组分色谱图上，如果各组份含量相当，则后洗脱的峰比前面的峰要逐渐加宽，峰高则逐渐降低。用半峰宽计算理论塔板数比用峰宽计算更为方便和常用，因为半峰宽更容易准确测定，尤其是对稍有拖尾的峰。

高效液相色谱法基本知识

10 高效液相色谱法基本知识（见第7章） u HPLC 法分类与定义正相高效液相色谱法（NP-HPLC ）——固定相极性大于流动相极性。常用色谱柱有硅胶柱、氰基柱、氨基柱；流动相为烷烃加适量极性溶剂，如正己烷-异丙醇、正己烷-乙醇等。主要用于分离溶于有机溶剂的极性至中等极性的分子型化合物，如维生素 A 、维生素D 、维生素 K 1 的含量测定。反相高效液相色谱法（RP-HPLC ）——流动相极性大于固定相极性。常用色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶（ODS ）柱；流动相主要成分为甲醇-水或乙腈-水（添加适量酸或缓冲盐），用于大多数非极性、弱极性药物的分离分析。 v 系统适用性试验内容与要求理论板数（n ）＝16（t R /W ） 2 或 n ＝5.54（t R /W h /2） 2 ，计算 n 时应指明测定物质。当测定结果有异议时，应以峰宽（W ）计算结果为准。分离度（R ） W W t t R R 2 1 ) ( 2 1 2 + - = 或 ) ( 70 . 1 ) ( 2 2 / , 2 2 / , 1 1 2 h h R R W W t t R + - = ，一般要求待测组分与相邻共存物之间的 R 应大于 1.5。当测定结果有异议时，应以峰宽（W ）计算结果为准。重复性：用于评价连续进样中，色谱系统响应值的重复性能。取同一溶液连续进样 5 次，其峰面积的相对标准偏差（RSD ）应不大于 2.0％。拖尾因子（T ） 1 05 . 0 2d W h = ，峰高法定量时 T 应在 0.95～1.05 之间。 w 测定方法内标法：按规定，取被测物对照品和内标物质一定量，混合，配制成校正因子测定用的对照溶液，注入高效液相色谱仪，记录色谱峰面积。根据对照溶液色谱图中对照品和内标物质的峰面积或峰高，以及对照品和内标物的浓度，按下式计算校正因子（f ）：对对内内 C A C A f / / = 另取被测物适量，加一定量内标溶液，混合，制成供试品溶液，注入高效液相色谱仪，记录色谱峰面积。根据供试品溶液色谱图中待测成分和内标物质的峰面积或峰高，按下式计算供试品溶液中待测成分的浓度（样 C ）： ' ' / 内内样样 C A A f C ′ = 外标法：按规定，精密称取对照品和供试品，分别配制成溶液，注入高效液相色谱仪，记录各自色谱图，测量对照品溶液和供试品溶液中待测成分的峰面积（或峰高），按下式计算供试品溶液中待测成分的浓度（样 C ）：对样对样 A A C C =

分析化学答案第18章经典液相色谱法

第18章经典液相色谱法思考题 3. 已知某混合物试样A 、B 、C 三组分的分配系数分别为440、480、520，三组分在薄层色谱上R f 值的大小顺序如何？解： ∵m s f V V K R +=11 ，Vs 、Vm 一定，K 越大，R f 越小。 ∴ R fA > R fB > R Fc 习题 1. 假如一个溶质的分配比为0.2，求它在色谱流动相中的百分率是多少。解：∵ 2.0==m s W W k %3.83%1002 .011%100=?+=?+=s m m W W W A 2. 一根色谱柱长10cm,流动相流速为0.01cm/s ，组分A 的洗脱时间为40min ，A 在流动相中消耗多少时间？解：min 7.1660 01.0100=?==u L t 即A 在流动相中消耗的时间为16.7min. 3. 已知A 与B 物质在同一薄层板上的相对比移值为1.5。展开后，B 物质色斑距原点9cm ，此时溶剂前沿到原点的距离为18cm, 求A 物质的展距和R f 。解：5.19 )() (====A B A B f A f t l l l R R R l a = 9×1.5 = 13.5 cm 75.018 5.130===l l R A fA 4. 今有两种性质相似的组分A 和B ，共存于同一溶液中。用纸色谱分离时，它们的比移值 R f 分别为0.45和0.63。欲使分离后两斑点中心间的距离为2cm ，滤纸条应取用多长？解：设A 组分的展距为l A , 则B 组分的展距为l A +2 , 45.00==l l R A fA 63.020 =+=l l R A fB cm l 1.1145 .063.020=-=

经典液相色谱法练习题(附答案)

填空题 1．硅胶具有微酸性，适用于分离____酸性或中性______物质的分离。 2．以聚酰胺为吸附剂时，通常用__极性溶剂_______作流动相。 3．在一定范围内离子交换树脂的交联度越大，则交换容量_小__，组分的保留时间__短__。 4．吸附剂的含水量越高，则吸附性能越__弱__。选择题 1．以硅胶为吸附剂的柱色谱分离极性较弱的物质时，宜选用（B ） A．极性较强的流动相 B．活性较高的吸附剂和极性较弱的流动相 C．活性较低的吸附剂和极性较弱的流动相 D．活性较高的吸附剂和极性较高的流动相 2．离子交换树脂的交联度越大则（B） A．形成网状结构紧密、网眼大、选择性好 B．形成网状结构紧密、网眼小、选择性好 C．交换容量越小 D．组分保留时间越短 3．样品中各组分的流出柱的顺序与流动相性质无关的是（D） A．离子交换色谱 B．聚酰胺色谱 C．吸附色谱 D．凝胶色谱 4．在反相色谱法中，若以甲醇-水为流动相，增加甲醇的比例时，组分的容量因子k与保留时间t R，将如何变化（B） A．k与t R增大 B．k与t R减小 C．k增大，t R减小 D．t R增大，k减小 5．色谱用氧化铝（A） A．活性的强弱用活度级I~V表示，活度V级吸附力最弱 B．活性的强弱用活度级I~V表示，活度V级吸附力最强 C．中性氧化铝适于分离非极性物质 D．活性与含水量无关 6．液相色谱中，固定相极性大于流动相极性属于（B） A．键合相色谱 B．正相色谱

C．反相色谱 D．离子交换色谱 7．凝胶色谱中，分子量较大的组分比分子量较小的组分（A） A．先流出色谱柱 B．后流出色谱柱 C．几乎同时流出 D．在色谱柱一样 8．色谱所用的氧化铝（C） A．有碱性和酸性二种，其中碱性使用最多 B．有碱性和酸性二种，其中酸性使用最多 C．有碱性、中性和酸性三种，而中性氧化铝使用最多 D．有碱性、中性和酸性三种，而碱性氧化铝使用最多 E．有碱性、中性和酸性三种，而酸性氧化铝使用最多简答题 1．用硅胶柱色谱分离极性较强的物质时，吸附剂与流动相的选择原则是什么？为什么？答：选择弱吸附剂，与极性强的流动相原因：略 2．根据分离机制不同将液相柱色谱法分类。略 3．简述经典柱色谱的操作步骤。略 1．薄层色谱法中，流动相中适当加入少量酸或碱的目的是防止斑点拖尾。 2．薄层色谱定性的依据是相同组分在相同条件下展开得到的R f值相同。选择题 1．关于Rf值，下列说法正确的是（D） A．Rf =L0/Lx B．Rf越大的物质的分配系数越大 C．物质的Rf值与色谱条件无关 D．物质的Rf值在一定色谱条件下为一定值 E．Rf可以小于1，可也大于1

高效液相色谱法知识汇总大全集.总结

高效液相色谱法知识汇总大全集.总结一、样品测定 1、流动相比例调整：由于我国药品标准中没有规定柱的长度及填料的粒度，因此每次新开检新品种时几乎都须调整流动相（按经验，主峰一般应调至保留时间为6~15分钟为宜）。所以建议第一次检验时请少配流动相，以免浪费。弱电解质的流动相其重现性更不容易达到，请注意充分平衡柱。 2、样品配制：①溶剂；②容器：塑料容器常含有高沸点的增塑剂，可能释放到样品液中造成污染，而且还会吸留某些药物，引起分析误差。某些药物特别是碱性药物会被玻璃容器表面吸附，影响样品中药物的定量回收，因此必要时应将玻璃容器进行硅烷化处理。 3、记录时间：第一次测定时，应先将空白溶剂、对照品溶液及供试品溶液各进一针，并尽量收集较长时间的图谱（如30分钟以上），以便确定样品中被分析组分峰的位置、分离度、理论板数及是否还有杂质峰在较长时间内才洗脱出来，确定是否会影响主峰的测定。 4、进样量：药品标准中常标明注入10ml，而目前多数HPLC 系统采用定量环（10ml、20ml和50ml），因此应注意进样量是否一致。（可改变样液浓度）

5、计算：由于有些对照品标示含量的方式与样品标示量不同，有些是复合盐、有些含水量不同、有些是盐基不同或有些是采用有效部位标示，检验时请注意。 6、仪器的使用：①流动相滤过后，注意观察有无肉眼能看到的微粒、纤维。有请重新滤过。②柱在线时，增加流速应以0、1ml/min的增量逐步进行，一般不超过1ml/min，反之亦然。否则会使柱床下塌，叉峰。柱不线时，要加快流速也需以每次0、 5ml/min的速率递增上去（或下来），勿急升（降），以免泵损坏。③安装柱时，请注意流向，接口处不要留有空隙。④样品液请注意滤过（注射液可不需滤过）后进样，注意样品溶剂的挥发性。⑤测定完毕请用水冲柱1小时，甲醇30分钟。如果第二天仍使用，可用水以低流速（0、1~0、3ml/min）冲洗过夜（注意水要够量），不须冲洗甲醇。另外需要特别注意的是：对于含碳量高、封尾充分的柱，应先用含5~10%甲醇的水冲洗，再用甲醇冲洗。⑥冲水的同时请用水充分冲洗柱头（如有自动清洗装置系统，则应更换水）。二、方法研究 1、波长选择：首先在可见紫外分光光度计上测量样品液的吸收光谱，以选择合适的测量波长，如最灵敏的测量波长并避开其它物质的干扰。从紫外光谱中还可大体知道在HPLC中的响应值，如吸收度小于0、5时，HPLC测定的面积将会很小。

最全的液相色谱知识 整理要点

最全的液相色谱知识 整理