组织培养实验三-继代培养

实验三植物继代培养

一、目的要求

通过在超净工作台上进行无菌操作训练

掌握组织培养的继代操作技术。

二、基本原理

植物组织培养中，培养物（细胞、愈伤组织、器官、试管苗等）培养一段时间后，为了防止培养的细胞团老化，或培养基养分利用完而造成营养不良及代谢物过多积累而引起毒害等的影响，要及时将其接种到新鲜培养基中，进行继代培养。固体培养可使用在组织培养过程中的各个阶段，如愈伤组织的增殖、器官的分化及完整植株的再生等阶段，液体培养主要用于植物材料再生培养的诱导前期，如愈伤组织的增殖、分化等。本实验以菊花为例，学习继代培养的操作技术。

三、材料与用具

1．仪器用具超净工作台、70％的乙醇、95％的乙醇、盛有培养基的培养瓶、接种器械（主要指剪刀、镊子等）、酒精灯、培养材料、无菌纸。

2．材料菊花花的试管苗或愈伤组织。

四、方法步骤（仅供参考）

1．准备继代培养的培养基，。于诱导试管苗的增殖。

2．将接种用具、酒精灯、烧杯、无菌培养皿、培养基等置于超净工作台的接种台面；打开超净台的电源开关，打开鼓风开关（调节送风量），并打开紫外灯消毒20min，之后关掉紫外灯，继续送风20min，打开荧光灯开关，准备接种。

3．无菌操作前，将双手用70%乙醇棉球擦拭消毒，剪刀、镊子等金属工具在用酒精灯外焰灼烧灭菌，后置于支架上冷却备用。

4．无菌纸置于超净工作台，打开包纸，用镊子将无菌滤纸取出，置于操作人员的正前处。

5．在酒精灯火焰处打开外植体材料瓶，将植物材料用灭过菌的镊子取出置于无滤菌纸上。

6．一手持镊子，一手持剪刀，将植物材料按照要求切割。切割时，需将变褐的部位、根切下弃去。根据其增殖方式，将小苗切成单株、或小苗丛，或小段（每段均有芽）接种于继代培养基中，与初代培养不同的是，继代培养时，每瓶中的接种材料可适当多接，可材料要均匀分布。

7．在标签上写上植物编号（即原培养瓶上的编号，若没有编号可不写），日期、班级、学号，放于培养箱中进行培养。

8．接种结束后，关闭和清理超净工作台，并清洗用过的玻璃器皿等。

五、实验结果与分析（附图）。

出现问题的再在后面分析一下原因就行了。