免疫学检测法

免疫学检测法

疗效评它们可用于有关免疫疾病的诊断、免疫学检测技术的用途非常广泛，价及发病机制的研究。如对传染病、免疫增殖性疾病、免疫缺损病、超敏反应、自身免疫病、移植排斥反应肿瘤的免疫学检测，对诊断、治疗均有很大帮助。此定量检查不仅推动了对各种外在医学生物学研究中对抗原性物质或细胞的定性、本章仅介绍常而且扩大免疫学与医学生物许多领域的联系。免疫学现象的研究，用免疫学检测方法的原理，简要过程和实用意义。抗原或抗体的检测第一节

一、检测的原理

对样品中的抗原或抗体借助抗原和抗体在体外特异结合后出现的各种现象，

进行定性、定量、定位的检测。抗原抗体的结合就像酶与底物的结合，激．抗原与抗体的亲和力(affinity)1抗原决定素与其受体的结合一样不是化学的反应，而是非共价键的可逆的结合。空间构型互补程簇和抗体分子可变区互补构型，造成两分子间有较强的亲和力。度不同，抗原和抗体分子之间结合力强弱也不同。互补程度高，则亲和力强。此酸碱度和离子浓度对抗原和抗体分子上各基因的解离性和电荷特外，反应温度、高抗体与抗原决定簇之间的结合力大小可用亲合力来表示。性也有重要的影响，即使抗原浓度很低时也有较多的抗体结合抗原亲合力的抗体与抗原的结合力强，形成免疫复合物。．抗原或抗体外检测原理根据抗原抗体结合形成免疫复合物的性状与活性2

定性和定位检测比定位或定量的检测。特点，对标本中的抗原或抗体进行定性、若有免疫复合物形成即用已知的抗体和待检样品混合，较简单，经过一段时间，则说就说明待检样品中有相应的抗原存在。若无预期的现象发生，的现象发生，明样品中无相应的抗原存在。同理也可用已知的抗原检测样品中是否有相应抗体。以反应中加入抗原和抗体的浓度与形成免疫对抗原或抗体进行定量检测时，复物的浓度呈函数关系。）根据免疫复合物产生的多少来推算样品中抗原（或抗体）的含量：在（1

一定的反应条件下，加入的已知抗体（或抗原）的浓度一定，反应产生的免疫复也就是抗体浓度一定量成正比。合物多少与待检样品中含有相应抗原（或抗体）可用实验性标准曲线推算出样品免疫复合物越多则样品中的抗原量也越多。时，13

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中抗原（或抗体）的含量。如免疫单向扩散试验、免疫比浊试验和酶联免疫检测

类方法。等都属于）抗原或抗体效价滴定的原理：当抗原抗体复合物形成多少不能反应抗2（在实际工就不能以检测反应强度来对抗原或抗体进行定量。原抗体反应强弱时，

反应作中，把浓度低的反应成分（抗原或抗体）的浓度固定，把浓度高的另只

家兔产生抗体比较3例如用人血清作抗原免疫3只家兔，成分作一系列稀释。例如将抗体可用双向琼脂扩散法来滴定，即滴定的多少，3只兔血清抗体效价，浓度固定，将抗原作不同的稀释度，分别将抗原或抗体滴入琼脂的相应小孔中，（如甲兔的抗观察免疫兔血清与不同稀释度的抗原出现明显沉淀浅的抗原稀释度则

可比较出后者比前者产生抗体的效价要1/2000，而丙免的是1/8000体效价为高）。也就是表示效价的稀释度越高，样品中所含待检成分越多。因人血清（抗原）

和抗体（免疫兔血清）相比，浓度高，故应稀释抗原。二、抗原或抗体检测的实用意义

．抗体检测的意义检测抗体可用于评价人和动物免疫功能的指标。抗体用1

临床上检测病人的抗病原于临床治疗或实验研究时也需做纯度分析和定量测定。血型抗体及各种自身抗体，抗原的抗体、生物的抗体、抗过敏原的抗体、抗HLA 对有关疾病的诊断有重要意义。

．抗原检测的意义可做为抗原进行检测的物质可以下四类：2）各种微生物及其大分子产物：用于传染病诊断、微生物的分类及鉴定1（以及对菌苗、疫苗的研究。）生物体内各种大分子物质：包括各种血清蛋白（如各类免疫球蛋白、（2

补体的各种成分）、可溶性血型物质、多肽类激素、细胞因子及癌胚抗原等均可在对这些成分的生物学作用的研究以及各种疾病的诊断有重做为抗原进行检测。要意义。、抗原）（如）人和动物细胞的表面分子：包括细胞表面各种分化抗原CD3（病毒相关抗原和肿瘤相关性情抗原等。、MHC同种异型抗原（血型抗原或抗原）对各种与免疫有关的疾检测这些抗原对各种细胞的分类、分化过程及功能研究、病的诊断及发病机制的研究，均有重要意义。13

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）各种半抗原物质：某些药物、激素和炎症介质等属于小分子的半抗原，4（用其免疫动组成人工结合的完全抗原。可以分别将它们偶联到大分子的载体上，例如对某些病人应用于各种半抗原物质的检测，物，制备出各种半抗原的抗体，都对运动员进行服用违禁药品的检测，在服用药物后进行血中药物浓度的监测。是应用半抗原检测的方法。三、抗原或抗体检测的方法

最广泛由于各种检测方法中所用的抗原性状不同，出现结果的现象也不同。

应用方法有下述几种：（一）沉淀反应可形成较大的不溶性免疫复合可溶性抗原与抗体结合，在两者比例合适时，

prec物。在反应体系中出现不透明的沉淀物，这种抗原抗体反应称为沉淀反应（neaction）。ipitation

0.5cm先将含抗体的未稀释的免疫血清加到直径小于1．环状沉淀试验

让抗原与抗体在两液将稀释的含有可溶性抗原的材料重叠于上，的小试管底部。precipring 体的界面相遇，形成白色免疫复合物沉淀环，故名为环状沉淀试验（此法简便易行，需用材料较多是其缺点。itationtest）,）是单向免疫扩散试验（single immunodiffusion2．单向免疫扩散试验

制成在凝胶中进行的沉淀反应。将抗体混入加热溶解的琼脂中，倾注于玻片上，让抗原在适当位置打孔，将抗原材料加入琼脂板的小孔内，含有抗体的琼脂板，当复合物体从小孔向四周的琼脂中扩散，与琼脂中的抗体相遇形成免疫复合物。沉淀圈的直径出现以小孔为中心的圆形沉淀圈，积增加到一定程度时停止扩散，可测定抗原的灵敏度易于观察结果，与加入的抗原浓度成正相关。本方法简便，IgAIgM、IgG10（最低浓度）约为～20μg/ml，常用于定量测定人或动物血清、）20-121C3和等，其缺点是需～天才能看结果（图