洁净实验室的要求与日常管理

操作间应准备乙醇灯（或煤气灯），火柴， 2％ 碘酊棉球及 75％乙醇棉球、试管架、大小橡皮、 砂轮、记号笔、无菌剪刀、镊子、注射器等。微 生物限度检查无菌室操作间内还应有电子称（感 觉为 0.1g，最大称量为 300g 为宜），电动匀浆仪
等。
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3.定期维护由实验室指定专人进行，维护的 范围为所有洁净室，维护的频率为每二周一次。
4.不符合时的维护由实验人员进行，维护的 范围为所有不符合的洁净室，维护的时机为出现 不符合时
洁净室的验证 1.验证的项目：洁净度、微生
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物数、换气次数、静压差、照度、温度、相对湿 度
第三类消毒剂的配制方法：需要使用无菌器 具并在无菌操作间内配制。首先取一次性集菌过 滤器一个，将排液口放置在灭菌过的锥形瓶上， 将消毒剂浓溶液通过薄膜过滤的方式除菌。然 后，按比例取灭菌后的纯化水，稀释浓溶液，制
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成可供使用的消毒剂。将此消毒剂倒入放置有无 菌脱脂棉球的消毒剂缸中，得到可直接使用的消 毒剂棉球。（该类消毒剂制备后，应收集消毒剂 中的微生物）
菌机理可能是在细菌细胞 DNA 中引起胸腺嘧啶双 聚体形成，从而干扰细菌细胞 DNA 复制，导致细 菌变异死亡。紫外线杀菌灯 1m 以内距离杀菌效 果最佳，每次开灯照射时间为 30min。应定期检 查紫外线灯辐射强度，不得低于 70μW·cm-21m 距离。其缺点是穿透力 弱，一张纸板可以阻碍光的透过，不能穿透固体 物，故只能用作表面消毒及一些不耐热或化学消 毒剂物品的消毒。
2.正确选择使用浓度，确保消毒效果。
3.正确选择消毒方式，可以浸泡、擦拭或喷 雾。
4 严格掌握消毒时间。
5.定期更换，避免产生耐药性。
6.不联用和混合使用。 7 消毒前，应进行清洁。 （二）消毒剂的种类
1.高效消毒剂（HLD）：能杀灭一切微生物（包 括芽孢），常见的有过氧乙酸、甲醛、环氧乙烷 和含氯消毒剂
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作过程中的手部消毒和实验台面消毒，常用的有 聚维酮碘溶液和 75％乙醇。
2.配制
第一类消毒剂的配制方法：不需使用无菌器 具，可直接在普通实验区按消毒剂使用说明书的 配制方法，用纯化水稀释消毒剂的浓溶液后使 用。
第二类消毒剂的配制方法：不需使用无菌器 具，应在更衣室内按消毒剂使用说明书的配制方 法，用纯化水稀释消毒剂的浓溶液后使用。
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后用 2％碘酒棉球擦拭，再用 75％乙醇棉球擦拭、 待干，也可以用消毒液浸泡消毒。
4 操作者勿用嘴直接吸吹吸管，防止致病菌 感染操作人员及口中的杂菌污染供试品。
5 在无菌操作中切勿大幅度或快速动作、拖 行，以免搅动空气中尘埃微粒。
6 注射器如需回抽时，应对着火焰吸入无菌
四、环境监控
（一）目的：
确定台面、设备表面的消毒效果和消毒频
次，确定洁净室的综合性能以及进行维护的时 机，确定培养箱的污染情况，判断是否有必要进 行彻底消毒。
4.温度、湿度
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无菌室内温度和相对湿度直接影响紫外杀 菌灯的杀菌效果，故温度最好控制在 25±2℃，相对湿度 40－60％。操作间或 净化台的洁净空气应保持对环境形成正压，不低 于 49Pa。
5.操作间
无菌室内应安装空气除菌过滤层流装置及 调温装置。洁净度要求：净化台洁净度为 100 级， 无菌室应为 10000 级。
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物及阳性对照菌在操作中污染环境或感染操作 人员。从事无菌及微生物操作的人员必须经过无 菌技术及基础微生物学专业知识的学习及培训 才具备上岗操作的资格，微生物专业检验人员也 不应该频繁地变换岗位。
1.无菌室应每次使用前后用 0.1%苯扎溴铵 溶液或 2％甲醛液擦拭台面及可能污染的死角， 湿拖地面，打开无菌空气过滤器及超净台的开关
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5.2 当温度、相对湿度和照度等指标出现不 符合时，洁净室可不必停用，但应及时修复空调 系统（或更换照明装置），使其符合规定。
二、实验室管理：
为保证实验有序进行，实验室必须制定一系 列实验室管理制度。
（一）实验室要求：
1 实验室环境应清洁、卫生、安静，实验室 内严禁吸烟和饮食。
30 分钟，紫外线杀菌灯照射 1 小时。
2.操作人员用肥皂洗手后进入缓冲间换拖 鞋，用 75％乙醇棉球擦手，穿戴衣帽、口罩。将 所需物品剥去牛皮纸及外包装，从传递窗移入操 作间，再用 0.1%苯扎溴铵溶液泡手后进入操作 间，在乙醇（或煤气灯）火焰区（火焰高度 3－ 5cm）操作。
3 供试品表面消毒，如为安瓿先用砂轮划痕
6.缓冲间
缓冲间内应有洗手盆，消毒液，无菌衣，帽， 口罩，拖鞋等，缓冲间内不应放置培养箱和其他 杂物。
（二）洁净室的使用
1.在实验开始之前 1 小时启动风机系统（空
调系统），并开启空气消毒装置，消毒至少半小 时后关闭
2.观察并确保洁净室的压差 3.物品经物流通道进入洁净室 4.人员正确着装后经人流通道进入洁净室 5.使用完毕，应用消毒液清洁台面。实验人 员在更衣室换下无菌衣后出洁净室。开启空气消
器扎伤。污染性可重复使用的材料（如平皿）应 灭菌后清洗，宜使用不易破碎的材料。服（含洁 净服）应定期清洗，怀疑污染的服应灭菌后清洗， 洁净服应灭菌后使用。
（二）无菌操作要求：
无菌操作是指在无菌的环境条件下，使用无 菌器材，防止微生物污染的操作技术。即保持待 检样品在操作时不被污染，又要防止被检的微生
1
3.验证的周期建议每半年一次，也可根据洁 净室的使用频率适当增加验证次数。
4.验证的方法洁净度和微生物数：采用 GB/T16292~16294-1996，其他项目：参照 JGJ71 －90。
5.验证不符合项的处理
5.1 当洁净度、微生物数、换气次数、静压 差等指标出现不符合时，应停用洁净室，对净化 系统进行调整后，在重新验证，直至符合规定才 能重新启用洁净室。
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蚀，易清洗，墙壁与地面、墙壁与天花板连接处 应呈凹弧形，操作间不得安装下水道。
无菌室内的照明灯应嵌装在天花板内，采光 面积要大，光照应分布均匀，光照度不低于 300 勒克斯。缓冲间和操作间应装有紫外线杀菌灯（2 －25w/m3）''用于空气消毒。紫外线波长 200－ 300nm 者具有杀菌作用，其中以 265－266nm 杀菌 作用最强，这与 DNA 的吸收光谱范围一致，其杀
5 衣、帽、口罩受到菌液污染时，应立即脱 下使污染部位包裹在内部，高压灭菌后再清洗。
6 如有传染性培养物污染手部，应先用 75％ 乙醇棉球擦拭，再浸入 0.1%新洁尔灭消毒液内泡 手，然后再用肥皂及清水彻底洗干净。
7 接种环（针），每次使用前后，必须通过火 焰灭菌，冷却后方可接种培养物，接种带有蜡质、 油质的培养物或菌苔残留多时，不应立即在火焰 上灼烧，应先在内焰里将油质培养物烘干后再移 至火焰上灭菌，以免活菌外溅污染环境及感染操 作者。
8带菌的吸管应浸泡在5％甲酚消毒液内24h 后取出清洗，带菌的试管或培养物应在 121℃高
压灭菌 30 分钟后再取出清洗。
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9 在接种霉菌、放线菌时应在铺有浸过消毒 液的纱布上操作，防止孢子散落传播。
10 废弃物的处理：
必须消除生物危害后，才能处理，一般使用 高压蒸汽灭菌，也可以采用直接焚烧。污染性锐 器（如一次性针头）应灭菌后处理，注意避免锐
2.洁净室的设计要求
2.1 净化级别：洁净走廊、检查室、阳性菌 室应为一万级；其他房间应为十万级
2.2 气流组织：阳性菌室对走廊呈负压，走 廊对缓冲有 5Pa 的正压；阳性菌室全排风
2.3 电气控制：控制开关外置；设置通讯系
统
3.结构与要求：
无菌洁净室不宜设在底层，防潮、防霉、采 光好，远离交通干道，厕所及污染区，面积不超 过 10m2，高度不超过 2.4m，由两个缓冲间、操 作间组成。操作间缓冲间之间应有样品传递窗， 出入操作间和缓冲间的门不应直对。无菌室内应 六面光滑平整，无缝隙，不起灰，不落尘，耐腐
2 实验人员必须穿戴衣帽，服经常洗涤、消 毒、保持清洁。
3 操作前后或离开实验室必须用肥皂或消毒 液洗手。
4 发生菌液污染台面或地面，应立即用 3％
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甲醛或 5％碳酸等消毒液由外向内倾覆其上，1 小时后再擦拭，如为破伤风梭菌，则应隔夜后再 擦洗。
开展无菌检查及微生物限度检查，首先要按 照《药品检验所实验室质量管理规范》及《药品 生产质量管理规范》的要求，建立一个布局合理、 使用方便、操作安全的无菌室，并且配有完善的 实验设施和管理制度。无菌检查、微生物限度检 查以及接种室（接种对照菌、菌种传代）均应严 格分开，具有危险性的毒株、毒素如破伤风梭菌、 黄曲霉毒素的实验室需单独使用，以便控制防止 传播。
空气。 7 所用的器材如培养基、稀释剂配制后经湿
热灭菌 121℃30 分钟，吸管培养皿等均应洗涤， 干燥，包扎后经干热灭菌 160℃2 小时才能使用。
三、消毒剂的质量控制
（一）消毒剂安全使用原则 1.正确选择消毒剂的种类，尽可能选择低
毒、低残留的消毒剂。
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洁净实验室 1.洁净室的布局
1.1 根据样品检验要求，一般应至少包括更 衣缓冲系统、微生物限度检查室、无菌检查室、 阳性菌室和物流通道。
1.2 更衣系统应至少包括一更（含更鞋）、二 更（含洗手）、缓冲以及人流走廊等。
1.3 物流通道应考虑净污分流的布局，有条
件的可设置污物走廊
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2.验证的技术要求 验证项目 十万级 一万级
一百级 温度（℃） 18-26 20-24 20-24 相对湿度（%）
45-65 45-60 45-60 换气次数（次/h） 不小于 15 不小于 25
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压差（pa） 相对室外：10 有级差的洁净室之间：5 照度（Lx） 主要室≥300 辅佐室≥150 悬浮粒子数（粒/m3）
≥0.5um 3500000 350000 3500 ≥5um 20000
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2000 0 浮游菌数（个/m3） 500 100 5
沉降菌（个/皿）
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10
3
2.中效消毒剂（ILD）：能杀灭抵抗力较强的
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结核杆菌和其他细菌、真菌和大多数病毒，常见 的有乙醇、苯扎溴铵、碘酊和甲酚皂溶液等
3.低效消毒剂（LLD）：能杀灭除结核杆菌以 外的抵抗力较弱的细菌以及抵抗力较弱的真菌 （如念珠菌）和病毒（如流感病毒、艾滋病毒等）， 常见的有氯已定、三氯散和高锰酸钾等
消毒剂配制 1.根据消毒剂使用区域和对象 的不同，将消毒剂分成 3 类，分别是：
第一类消毒剂，专用于普通实验区，仅用于 物品外表面的消毒，常用的有聚维酮碘和石炭酸 等；
第二类消毒剂，专用于洁净室的更衣室，仅 用于佩戴手套的双手消毒，常用的有苯扎溴铵和 75％乙醇；
第三类消毒剂，专用于无菌操作间，直接用 于消毒直接接触药品的容器表面，也用于实验操
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毒装置，消毒至少半小时后，关闭洁净室的控制 开关。
（三）洁净室的清洁维护
1.洁净室的清洁维护分为日常维护、定期维 护和不符合时的维护。
2.日常维护由每次实验的实验人员进行，维 护的范围为进行实验的洁净室和辅佐洁净区，维
护的频率为每次实验后。