酶学分析技术
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高效 灵敏 温和
16
ABCP
在许多酶促反应中，底物或产物的 变化量很难直接测定，常需要在反应体 系中加入一种或一种以上的酶作为试剂。 使第一个酶促反应的产物转变为易于检 测的第二个酶或第三个酶的底物，通过 这种偶联反应间接测定第一个酶的待测 物浓度或待测酶的活性，这种作为试剂 用的酶称为工具酶。
17
(种类及底物性质有关) 4.酶促反应∝亲和力∝1/Km
5.选择酶的最适底物
6.设计适宜的底物浓度10-20 Km
Km和Vmax的测定(双倒数法) 1 = Km+ [S] = Km . 1 + 1 v Vmax [S] Vmax [S] Vmax
11
双倒数作图法
1 V
1 Vmax
斜率= Km Vmax
每隔一定时间（10～60秒）连续测定酶 促反应中某一产物或底物变化量称为连续监 测法。 优点 容易找到线性期、结果可靠、省时、 省试剂、省样品 缺点 反应速度易受温度、pH、底物浓度 等因素的影响。
15
工具酶
酶学分析是将酶作为试剂的一种分 析技术，它包括：
1.借助酶来测定某化合物 2.借助酶来测定另一种酶 特点：专一
酶促反应底物动力学
零级反应
Vm
Vm/2
混合级反应
一级反应
Baidu NhomakorabeaKm
[S]
8
Vmax [S] 米-孟氏方程式： V =
Km + [S]
• 当酶促反应υ=1/2 Vmax时，Km值是酶促 反应速度为最大反应速度一半时的底物浓 度，单位是mmol/L。 Km值是酶的特征 常数之一。
9
1. v = V[S] /Km + [S] 2.Km = [S] (V/v - 1) 3. Km 在一定的底物、pH、温度下是一个常数
在急性心肌梗死诊断中的应用 AST、LDH、CK（心肌酶）
在急性胰腺炎诊断中的应用 淀粉酶和脂肪酶
25
在骨骼疾病诊断中的应用 ALP 在肌肉疾病诊断中的应用 AST、CK、LDH、ALD 在前列腺疾病诊断中的应用 ACP 在肿瘤诊断中的应用
26
THANK YOU .
酶偶联测定法
EX
Ea
Ei
A
B
C
P
LDH、MDH、G6PD、GLDH作工具酶均是 以NAD（P）H为辅酶的脱氢酶。
P+NAD(P)H+H+ PH2+NAD(P)+
18
将水溶性的酶，通过物理或化学的 方法，使其吸附、包埋或共价结合在 固相载体上，成为不溶于水但仍保留 催化活性的酶的衍生物称为固相酶。 优点：可反复使用
1
1
-Km
[S]
12
酶活性测定的方法
1.终点法（又称二点法、固定时间法） 酶促反应一定时间后（从t1到
t2 )终止酶促反应，然后测定产物生 成的量或底物消耗的量。
13
优点 酶促反应已终止，比色计无需恒温 装置，不必考虑显色剂对酶的影响。
缺点 无法了解酶作用这段时间里反应是 否外于线性期。
14
2.连续监测法（又称速率法）
机械强度大 稳定性好 抗干扰性强
19
几种酶的稳定性（天）
名称
室温 4 ℃ -20℃
乳酸脱氢酶
7 7 30
天冬氨酸氨基转移酶 2 14 30
丙氨酸氨基转移酶 2 14 30
肌酸激酶
0.3 0.6 2
碱性磷酸酶
0.5 6 600
淀粉酶
2 60 60
20
同工酶的产生机理
❖ 不同基因位点编码 ❖ 等位基因编码 ❖ 多条肽链化学修饰产生
21
同工酶的分离及鉴定
电泳法 层析法 免疫化学法 动力学法 热失活法
22
血浆酶的来源
血浆特异的酶 凝血酶类、纤溶酶类
外分泌的酶 淀粉酶类、脂肪酶类、碱性磷酸酶类
细胞内酶 ALT、AST、LDH
24
酶活性测定在临床诊断中的应用
在肝脏疾病诊断中的应用 ALT、AST、LCAT、OCT、ICD、 GLDH、SDH、5’-NT、γ-GT、ALP、 MAO 特异性强、活性高的酶
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ABCP
在许多酶促反应中，底物或产物的 变化量很难直接测定，常需要在反应体 系中加入一种或一种以上的酶作为试剂。 使第一个酶促反应的产物转变为易于检 测的第二个酶或第三个酶的底物，通过 这种偶联反应间接测定第一个酶的待测 物浓度或待测酶的活性，这种作为试剂 用的酶称为工具酶。
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(种类及底物性质有关) 4.酶促反应∝亲和力∝1/Km
5.选择酶的最适底物
6.设计适宜的底物浓度10-20 Km
Km和Vmax的测定(双倒数法) 1 = Km+ [S] = Km . 1 + 1 v Vmax [S] Vmax [S] Vmax
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双倒数作图法
1 V
1 Vmax
斜率= Km Vmax
每隔一定时间（10～60秒）连续测定酶 促反应中某一产物或底物变化量称为连续监 测法。 优点 容易找到线性期、结果可靠、省时、 省试剂、省样品 缺点 反应速度易受温度、pH、底物浓度 等因素的影响。
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工具酶
酶学分析是将酶作为试剂的一种分 析技术，它包括：
1.借助酶来测定某化合物 2.借助酶来测定另一种酶 特点：专一
酶促反应底物动力学
零级反应
Vm
Vm/2
混合级反应
一级反应
Baidu NhomakorabeaKm
[S]
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Vmax [S] 米-孟氏方程式： V =
Km + [S]
• 当酶促反应υ=1/2 Vmax时，Km值是酶促 反应速度为最大反应速度一半时的底物浓 度，单位是mmol/L。 Km值是酶的特征 常数之一。
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1. v = V[S] /Km + [S] 2.Km = [S] (V/v - 1) 3. Km 在一定的底物、pH、温度下是一个常数
在急性心肌梗死诊断中的应用 AST、LDH、CK（心肌酶）
在急性胰腺炎诊断中的应用 淀粉酶和脂肪酶
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在骨骼疾病诊断中的应用 ALP 在肌肉疾病诊断中的应用 AST、CK、LDH、ALD 在前列腺疾病诊断中的应用 ACP 在肿瘤诊断中的应用
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THANK YOU .
酶偶联测定法
EX
Ea
Ei
A
B
C
P
LDH、MDH、G6PD、GLDH作工具酶均是 以NAD（P）H为辅酶的脱氢酶。
P+NAD(P)H+H+ PH2+NAD(P)+
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将水溶性的酶，通过物理或化学的 方法，使其吸附、包埋或共价结合在 固相载体上，成为不溶于水但仍保留 催化活性的酶的衍生物称为固相酶。 优点：可反复使用
1
1
-Km
[S]
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酶活性测定的方法
1.终点法（又称二点法、固定时间法） 酶促反应一定时间后（从t1到
t2 )终止酶促反应，然后测定产物生 成的量或底物消耗的量。
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优点 酶促反应已终止，比色计无需恒温 装置，不必考虑显色剂对酶的影响。
缺点 无法了解酶作用这段时间里反应是 否外于线性期。
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2.连续监测法（又称速率法）
机械强度大 稳定性好 抗干扰性强
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几种酶的稳定性（天）
名称
室温 4 ℃ -20℃
乳酸脱氢酶
7 7 30
天冬氨酸氨基转移酶 2 14 30
丙氨酸氨基转移酶 2 14 30
肌酸激酶
0.3 0.6 2
碱性磷酸酶
0.5 6 600
淀粉酶
2 60 60
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同工酶的产生机理
❖ 不同基因位点编码 ❖ 等位基因编码 ❖ 多条肽链化学修饰产生
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同工酶的分离及鉴定
电泳法 层析法 免疫化学法 动力学法 热失活法
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血浆酶的来源
血浆特异的酶 凝血酶类、纤溶酶类
外分泌的酶 淀粉酶类、脂肪酶类、碱性磷酸酶类
细胞内酶 ALT、AST、LDH
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酶活性测定在临床诊断中的应用
在肝脏疾病诊断中的应用 ALT、AST、LCAT、OCT、ICD、 GLDH、SDH、5’-NT、γ-GT、ALP、 MAO 特异性强、活性高的酶