网织红细胞检测进展及其临床技术应用技术
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网织红细胞检测进展及其临床应 用
概述
网织红细胞(reticulocyte，Ret)是介于晚幼 红细胞和成熟红细胞之间的过渡阶段细胞 ，略大于成熟红细胞。网织红细胞是有核 红细胞刚刚失去核的阶段，仍属未完全成 熟的红细胞，浆内尚残留有嗜碱性RNA， 经碱性染料（如天青B、煌焦油蓝或新亚甲 蓝）活体染色后，在包体内可见蓝色点状 或网状结构，故名网织红细胞。
1.手工法
陈高远则在这两种窥盘的 基础上设计了改良式 Miller窥盘，采用双正方 形结构，小方格和大方 格之比也达到1：10，只 是将红细胞计数区域位 移至中心部位，以方便 红细胞数量的计数。
1.手工法
刘志贤设计了一种新的Ret计数窥盘 即180×4扇形Ret计数窥盘：圆形 直径为19 mm，圆心角∠ AOB=∠ COD=∠EOF=∠ GOH=180。弧A B=CD=EF=GH=180。计算公式为 ：Ret %=整个计数区域内的Ret数 ／(4个小扇面区域内的RBC总数× 5)×100％ 。这种新型Ret计数窥盘 4个扇形区域均匀分布在整个视野 的4个方向，4个扇形面积之和是整 个圆形面积的1／5，因此在理论上 基本解决了红细胞分布不均匀引起 的问题，降低了系统误差和随机误
2.血细胞分析 仪法
统计表明，仪器法测定Ret精密度有明显提高 ：对低Ret标本，CV值在10%～21 %之间 ；对正常范围的标本，C V值在3 %～16 % 之间；高值标本，C V值在2 %～10 %之间 。
2.血细胞分析仪 法
虽然仪器法Ret计数有诸多优点，而且精密度明显 优于手工法，但也存在一些不足 ：第一，所有仪 器分析的基本原理都是检测Ret内RNA 的存在量 来决定其百分率和绝对值，当某些患者血液中有 核细胞或淋巴细胞异常增加时，可导致Ret计数 结果的假性增加；第二，冷凝集素存在、红细胞 的聚集、某些病理因素或药物都能使红细胞产生 自身荧光；第三，自动化分析仪结果的准确性除 了依赖于仪器本身的良好性能外，还应有良好的 质控物随时检测仪器的状态。另外，仪器成本高 、价格贵，基层医疗单位投入较为困难。
1.手工法
• 传统的显微镜计数方法操作较繁琐、影响结 果的因素较多。近年来，国内开始使用国际 血液学标准化委员会(ICSH)推荐的Miller窥 盘进行计数，规范了计算区域，减少了实验 误差，使结果准确性有所提高(卫生部临检 中心建议，CV控制在15 %之内)。Miller窥 盘法是将一种光学圆片状Miller窥盘安放在 显微镜目镜中，窥盘中有面积比例为1：9的 2个正方形计数方格，只需计数1／9小方格 内的红细胞即可准确估量出整个大方格内的 红细胞数量。
卫生部临床检验中心控制Ret计数CV≤15%需镜检 的RBC数目
1.手工法
国内很多学者在此基础上设 计了几种改良的Ret计数 窥盘。张时民等设计了一 种双环式结构的Ret计数 窥盘，该盘的特点是小圆 环和大圆环面积之比为1 ：10，小圆环为计数红细 胞数量，大圆环为计数 Ret数量。其圆形结构更 加适合于人们观察和计数 显微镜下细胞数量的习惯 ，而且此比例更加易于计 算红细胞和Ret的比值。
手工法网织红细胞 活体染色染料评价
2.血细胞分析 仪法
1993年以来，可进行Ret计数的血细胞分析 仪相继问世，因其具有重复性好、准确度 高、省时等优点，正被越来越多的医院所 采用。仪器法Ret计数使用各种荧光染料和 非荧光染料对Ret进行染色，采用鞘流技术 和射频技术等不同原理进行检测。血细胞 计数仪不仅可以计数Ret，同时还能检测出 网织红细胞绝对值Ret#、网织红细胞平均 体积(MRV)、网织红细胞成熟指数(RMI)等 许多参数，这些参数是Ret分析、临床应用 和研究的热门领域。
概述
• 红细胞在骨髓中生成，至发育为成熟红细胞，经历了不 同阶段：干细胞、原始红细胞、早幼红细胞、中幼红细 胞、晚幼红细胞、网织红细胞，最后发育为成熟红细胞 。随着细胞的成熟，RNA含量逐渐减低，至细胞完全 成熟后消失或接近消失，即红细胞中网线状结构越多， 表示细胞越幼稚。ICSH将Ret分为4型：Ⅰ型（丝球型 ）、Ⅱ型（花冠型或网型）、Ⅲ型（破网型）、Ⅳ型（ 颗粒型）。正常生理状态下，Ⅰ型只存在于骨髓，Ⅱ型 在外周血也很难见到，Ⅲ型仅有少量释放到外周血，因 此外周血网织红细胞计数时以Ⅳ型为主。
1.百度文库工法
手工法分玻片法和试管法。由于玻片法容易使混合血液中的 水分蒸发，染色时间偏短，因此结果偏低；试管法容易掌 握，重复性较好，必要时还可以从混合血液中再取标本重 新涂片复查。试管法被列为手工法Ret计数的参考方法。 按卫生部《全国临床检验操作规程》第2版，采用试管法 用煌焦油蓝染液对血液标本进行红细胞活体染色、制片， 选择细胞分布较均匀、厚薄适中的体尾交界处，每份标本 油镜下参照陈宝梁的建议 ，即Ret>6 %，计数红细胞 1000个；3%～ 5 %计数红细胞2000个；1 %～2% 应计 数红细胞4000个；小于1 %计数红细胞10000个。
3.流式细胞仪法和专用 网织红细胞分析仪
流式细胞仪(flowcytometry，FCM)是一种多用途的精密分 析仪器，应用派若宁、吖啶橙、噻唑橙等这些特殊的荧光 染料与Ret中的RNA结合，当FCM 发出的激光照射于细 胞上时，根据细胞能否发射出特定颜色的荧光，通过单参 数定量测定RNA，从而精确测定Ret占成熟红细胞的比率 。还可根据激光照射后发射出的荧光强度，或光吸收量大 小、光散射量多少等参数的比例关系对Ret成熟程度进行 分群，将其划分为低荧光强度网织红细胞(LFR)、中荧光 强度网织红细胞(MFR)、高荧光强度网织红细胞(HFR)。
概述
概述
• Ret是红细胞成熟过程中的一个重要阶段， 是判断骨髓红系造血情况和疗效观察的重 要指标。其检测方法既有传统的显微镜目 测法，又有现代化的仪器计数法(如流式细 胞仪、网织红细胞计数仪及血细胞分析仪) 。
网织红细胞检测进展
1.手工法 2.血细胞分析仪法 3.流式细胞仪法和专用网织红细胞分析仪
概述
网织红细胞(reticulocyte，Ret)是介于晚幼 红细胞和成熟红细胞之间的过渡阶段细胞 ，略大于成熟红细胞。网织红细胞是有核 红细胞刚刚失去核的阶段，仍属未完全成 熟的红细胞，浆内尚残留有嗜碱性RNA， 经碱性染料（如天青B、煌焦油蓝或新亚甲 蓝）活体染色后，在包体内可见蓝色点状 或网状结构，故名网织红细胞。
1.手工法
陈高远则在这两种窥盘的 基础上设计了改良式 Miller窥盘，采用双正方 形结构，小方格和大方 格之比也达到1：10，只 是将红细胞计数区域位 移至中心部位，以方便 红细胞数量的计数。
1.手工法
刘志贤设计了一种新的Ret计数窥盘 即180×4扇形Ret计数窥盘：圆形 直径为19 mm，圆心角∠ AOB=∠ COD=∠EOF=∠ GOH=180。弧A B=CD=EF=GH=180。计算公式为 ：Ret %=整个计数区域内的Ret数 ／(4个小扇面区域内的RBC总数× 5)×100％ 。这种新型Ret计数窥盘 4个扇形区域均匀分布在整个视野 的4个方向，4个扇形面积之和是整 个圆形面积的1／5，因此在理论上 基本解决了红细胞分布不均匀引起 的问题，降低了系统误差和随机误
2.血细胞分析 仪法
统计表明，仪器法测定Ret精密度有明显提高 ：对低Ret标本，CV值在10%～21 %之间 ；对正常范围的标本，C V值在3 %～16 % 之间；高值标本，C V值在2 %～10 %之间 。
2.血细胞分析仪 法
虽然仪器法Ret计数有诸多优点，而且精密度明显 优于手工法，但也存在一些不足 ：第一，所有仪 器分析的基本原理都是检测Ret内RNA 的存在量 来决定其百分率和绝对值，当某些患者血液中有 核细胞或淋巴细胞异常增加时，可导致Ret计数 结果的假性增加；第二，冷凝集素存在、红细胞 的聚集、某些病理因素或药物都能使红细胞产生 自身荧光；第三，自动化分析仪结果的准确性除 了依赖于仪器本身的良好性能外，还应有良好的 质控物随时检测仪器的状态。另外，仪器成本高 、价格贵，基层医疗单位投入较为困难。
1.手工法
• 传统的显微镜计数方法操作较繁琐、影响结 果的因素较多。近年来，国内开始使用国际 血液学标准化委员会(ICSH)推荐的Miller窥 盘进行计数，规范了计算区域，减少了实验 误差，使结果准确性有所提高(卫生部临检 中心建议，CV控制在15 %之内)。Miller窥 盘法是将一种光学圆片状Miller窥盘安放在 显微镜目镜中，窥盘中有面积比例为1：9的 2个正方形计数方格，只需计数1／9小方格 内的红细胞即可准确估量出整个大方格内的 红细胞数量。
卫生部临床检验中心控制Ret计数CV≤15%需镜检 的RBC数目
1.手工法
国内很多学者在此基础上设 计了几种改良的Ret计数 窥盘。张时民等设计了一 种双环式结构的Ret计数 窥盘，该盘的特点是小圆 环和大圆环面积之比为1 ：10，小圆环为计数红细 胞数量，大圆环为计数 Ret数量。其圆形结构更 加适合于人们观察和计数 显微镜下细胞数量的习惯 ，而且此比例更加易于计 算红细胞和Ret的比值。
手工法网织红细胞 活体染色染料评价
2.血细胞分析 仪法
1993年以来，可进行Ret计数的血细胞分析 仪相继问世，因其具有重复性好、准确度 高、省时等优点，正被越来越多的医院所 采用。仪器法Ret计数使用各种荧光染料和 非荧光染料对Ret进行染色，采用鞘流技术 和射频技术等不同原理进行检测。血细胞 计数仪不仅可以计数Ret，同时还能检测出 网织红细胞绝对值Ret#、网织红细胞平均 体积(MRV)、网织红细胞成熟指数(RMI)等 许多参数，这些参数是Ret分析、临床应用 和研究的热门领域。
概述
• 红细胞在骨髓中生成，至发育为成熟红细胞，经历了不 同阶段：干细胞、原始红细胞、早幼红细胞、中幼红细 胞、晚幼红细胞、网织红细胞，最后发育为成熟红细胞 。随着细胞的成熟，RNA含量逐渐减低，至细胞完全 成熟后消失或接近消失，即红细胞中网线状结构越多， 表示细胞越幼稚。ICSH将Ret分为4型：Ⅰ型（丝球型 ）、Ⅱ型（花冠型或网型）、Ⅲ型（破网型）、Ⅳ型（ 颗粒型）。正常生理状态下，Ⅰ型只存在于骨髓，Ⅱ型 在外周血也很难见到，Ⅲ型仅有少量释放到外周血，因 此外周血网织红细胞计数时以Ⅳ型为主。
1.百度文库工法
手工法分玻片法和试管法。由于玻片法容易使混合血液中的 水分蒸发，染色时间偏短，因此结果偏低；试管法容易掌 握，重复性较好，必要时还可以从混合血液中再取标本重 新涂片复查。试管法被列为手工法Ret计数的参考方法。 按卫生部《全国临床检验操作规程》第2版，采用试管法 用煌焦油蓝染液对血液标本进行红细胞活体染色、制片， 选择细胞分布较均匀、厚薄适中的体尾交界处，每份标本 油镜下参照陈宝梁的建议 ，即Ret>6 %，计数红细胞 1000个；3%～ 5 %计数红细胞2000个；1 %～2% 应计 数红细胞4000个；小于1 %计数红细胞10000个。
3.流式细胞仪法和专用 网织红细胞分析仪
流式细胞仪(flowcytometry，FCM)是一种多用途的精密分 析仪器，应用派若宁、吖啶橙、噻唑橙等这些特殊的荧光 染料与Ret中的RNA结合，当FCM 发出的激光照射于细 胞上时，根据细胞能否发射出特定颜色的荧光，通过单参 数定量测定RNA，从而精确测定Ret占成熟红细胞的比率 。还可根据激光照射后发射出的荧光强度，或光吸收量大 小、光散射量多少等参数的比例关系对Ret成熟程度进行 分群，将其划分为低荧光强度网织红细胞(LFR)、中荧光 强度网织红细胞(MFR)、高荧光强度网织红细胞(HFR)。
概述
概述
• Ret是红细胞成熟过程中的一个重要阶段， 是判断骨髓红系造血情况和疗效观察的重 要指标。其检测方法既有传统的显微镜目 测法，又有现代化的仪器计数法(如流式细 胞仪、网织红细胞计数仪及血细胞分析仪) 。
网织红细胞检测进展
1.手工法 2.血细胞分析仪法 3.流式细胞仪法和专用网织红细胞分析仪