液_液萃取稳定同位素内标法测定酒中氨基甲酸乙酯_林国斌

· 实验研究与检验技术 ·
液 －液萃取稳定同位素内标法测定酒中氨基甲酸乙酯
２ ， 林国斌１， 林麒 ， 倪蕾 福建省疾病预防控制中心 ， 福州 ３ 福建医科大学公共卫生学院 ， 福州 ３ １． ５ ０ ０ ０ １； ２． ５ ０ ０ ０ ５
第一作者简介 ： 林国斌 ， 主任技师 。 专业 ： 理化检验 。
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， 海峡预防医学杂志 ２ ０ １ ３年１ ０ 月第 １ ９ 卷第 ５ 期 Ｓ ｔ ｒ ａ ｉ ｔ Ｊ Ｐ ｒ ｅ ｖ Ｍ ｅ ｄ Ｏ ｃ ｔ ２ ０ １ ３， Ｖ ｏ ｌ ． １ ９， Ｎ ｏ ． ５ 用 液 －液 萃 取 稳 定 同 位 素 稀 释 内 标 Ｄ ５ －氨 基 甲 酸 乙 酯 为 内 标 ， ４， ５］ ， 气相色谱 －质谱选 择 离 子 法 测 定 ［ 取 得 满 意 的 结 果， 该 法， 方法准确度高 、 重现性好 ， 溶剂用量小 ， 适合于酒中 Ｅ Ｃ 测定 。
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， 海峡预防医学杂志 ２ ０ １ ３年１ ０ 月第 １ ９ 卷第 ５ 期 Ｓ ｔ ｒ ａ ｉ ｔ Ｊ Ｐ ｒ ｅ ｖ Ｍ ｅ ｄ Ｏ ｃ ｔ ２ ０ １ ３， Ｖ ｏ ｌ ． １ ９， Ｎ ｏ ． ５ 特征是鉴别本种的重要特征之一 ， 并运用于检索表中 。 而笔者 ， 最大足后板内上方的一对 ） 大小 观察的标本次大一块足后板 （ 及形态不稳 定 ， 呈“ 形、 圆 形、 椭 圆 形、 杆 状 等。 ③ 文 献 ［ １］ ＜” 中检索表显示 ： 茅舍血厉螨背板具副刚毛 ２ 有别于副刚 ～３ 根 ， 毛 １ 根的种类 。 而笔者观察的标本副刚毛 ０ ～３ 根不等 。
摘要 ：目的 建立液 －液萃取稳定同位素稀释测定酒中氨基甲酸乙酯含量的方法 。 方法 以氘代同 位 素 Ｄ ５ －氨 基 甲 酸 乙酯为内标 ， 用液 －液萃取法稳定同位素稀释 ， 气相色谱 －质谱 选 择 离 子 法 测 定 。 结 果 氨 基 甲 酸 乙 酯 的 检 出 限 为 １． １ ／ ， 回收率为 ９ 氨基甲酸乙酯含 ｋ ０． ７％ ～１ ０ ６． ３％ ， Ｒ Ｓ Ｄ 为 ２． ６％ 。 测定市售 １ ０种 葡 萄 酒、 １ ５种白酒和２ ０种 黄 酒， ｇ ｇ μ ／ 、 ／ 、 ／ 。 量分别为 ： 葡萄酒 ５． 白酒 黄酒 结 论 液 液 萃 取法精密度和准 ５ ７～２ ０． ７μ ５． ８～２ ９ ７μ ７ ９． ８～４ ９ ８μ － ｇｋ ｇ ｇｋ ｇ ｇｋ ｇ 确度高 ， 简便快速 ， 适用于酒中氨基甲酸乙酯的测定 。 关键词 ： 酒卫生 ； 液 －液萃取法 ； 气相色谱 －质谱 ； 稳定同位素内标 ； 质量控制 ； 氨基甲酸乙酯 （ ） 中图分类号 ： Ｒ １ ５ ５． ５ 文献标志码 ： Ｂ 文章编号 ： １ ０ ０ ７ ２ ７ ０ ５ ２ ０ １ ３ ０ ５ ０ ０ ５ ８ ０ ３ － － － ， 是黄酒 及 其 他 发 酵 食 品 在 生 产 中 产 Ｅ Ｃ） 氨基甲酸乙酯 （ 生的副产物 ， 有基因毒性 和 致 癌 性 。２ ０ ０ ７ 年 ＷＨＯ 国 际 癌 症 研究所 （ 正式 将 Ｅ 与丙烯酰胺同 Ｉ Ａ Ｒ Ｃ） Ｃ归为２ Ａ 类 致 癌 物， 等危险 。Ｅ Ｃ 污染被认 为 是 食 品 中 继 黄 曲 霉 毒 素 后 的 又 一 重
［］ ｉ ｌ ｌ ＷＭ ２ 描 述 的 茅 舍 我 们 观 察 的 标 本 其 形 态 特 征 同 Ｔ 血厉螨相一致， 除以上３处特征外， 同国内文献中茅舍血厉
端尖细弯曲 ， 鄂沟 ７ 列齿 ， 每列 ２～７ 小齿 。 头盖方形 ， 前缘略 须肢跗节叉毛 ２ 叉 。 内凹 ， ， ， 叉丝长８ 具有微细 １（ ５ ６～６ １） ３（ ８ １～８ ６） 胸叉蒂部长 ６ 中部长９ 分支 。 胸 前 区 具 有 网 纹 。 胸 板 宽 大 于 长 ， １（ ９ １～ ） ） ， （ ， 最窄处宽 １ 板 面 具 有 网 纹， 前缘清晰或 １ ０ １ ３ １ １ ３ ０～１ ３ ５） 前 侧 角 伸 入 基 节 Ⅰ、 板 不清晰 ， Ｓ ｔ Ⅱ 之 间， １之 间 略 呈 双 波 形， 。胸 毛 ３对， 后缘平直 （ 或中部 略 内 凹 ） 长５ Ｓ ｔ ６ １位 于 板 前 缘， （ ） ， （ ） ， 较其它两对略短 ， 末端达 到 或 略 ４ ９～５ ９ Ｓ ｔ １ ５ ９～６ ４ ２长 ６ ， 板 上 隙 状 器 ２对。生 殖 腹 板 超过板后缘 ， Ｓ ｔ １（ ５ ６～６ ４） ３长 ６ ， 狭长 ， 基节 Ⅳ 后略 膨 大 ， 最宽处１ 大于肛板宽 ３ ５（ １ ２ ７～１ ４ ５） 度， 末端 圆 钝 ， 略超过 Ｖ 生 殖 刚 毛 １ 对， 长４ ｌ ９（ ４ ２～ ４ 水 平， ） ， ， 板面具网 纹 ， 肛板与生殖腹板间距１ 等于或 ４ ９ ２（ １ ０～３ ２） （ ） 。 ， 小于肛孔长度 ３ 肛 板 呈 三 角 形 两 侧 角 钝 形， 长 １２ ９～３ ２ （ ） ， （ ， 宽１ 长 宽 近 相 等 或 宽 略 大 于 长， １ ０ ５ ９ ３～１ １ ０ １ ３ ９ ３～１ １ ３） 板面具网纹 。 肛孔位于肛板中部 ， Ａ ｄ 位于肛孔中横线处或 略 （ ） ， （ ） ， 靠后 ， 长４ ７ ３ ９～４ ９ Ｐ Ａ 长４ ７ ４ ２～５ ２ Ａ ｄ Ａ。 腹表皮刚 ≈Ｐ ， 含Ｖ 除靠近生殖腹板的５对呈针 毛约 １ ３对（ ｌ Ｖ ｌ ｌ ２， ３和 Ｖ ４） 状外 ， 腹边缘及亚边 缘 的 均 呈 微 羽 状 。 足 后 板 最 大 的 一 对 呈 长棒状 ， 其 内 上 方 的 一 对 较 小， 大小及形态不稳 ４ ６． ６×８． ６， 呈“ 形、 圆形 、 椭圆形 、 棒形等 。 气门沟前端伸至 足 基 节 定， ＜” Ⅰ 中部 。 （ ， ， ５ ９ ５ ３ ９～５ ６ ９） ４ １（ ４ ２ ２～４ ７ １） 各足长 ： Ⅰ ＝５ Ⅱ ＝４ Ⅲ＝ （ ） ， 。足 Ⅰ、 足Ⅱ ４ ２ ２ ４ １ ２～４ ６ ０． ６ ７ ８（ ５ ３ ９～６ ７ ７） Ⅳ ＝５ Ⅳ 细 长， ， 。 粗短 足 Ⅲ 细短 ］ 、 ］ 文献［ 对茅舍血 ２． ２ 观察与文献不符之处 国内文献 ［ １ ３ 厉螨的特征描述与 笔 者 所 观 察 到 的 不 符 之 处 表 现 在 ： ① 文献 ［ ］ 中描述螯肢动趾 和 定 趾 各 具 ２ 个 小 齿 ， 而笔者观察的标本 １ 定 趾 均 为 ３ 齿。 ② 文 献 ［ 及文献 除个别 标 本 观 察 不 清 外 ， １］ ［ ］ ］ 中均突出了次大一块足后板近 “ 形， 且文献 ［ 强调了此 ３ １ ＜”
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／ 使用液 １μ 绘制浓度 Ｃ－Ａ 相关系 Ｌ 进样分析 ， Ａ０ 标准曲线 ， 数ｒ＝０． 线性方程为 ｙ＝７ ９ ９ ９ ０， ２． ４ ４ ８ ｘ－３． ２ ８ ５ ６。 结 果 表 明 ， ／ 氨基甲酸乙酯 在 ２ ０～１ ６ ０μ Ｌ 浓 度 范 围 内 线 性 关 系 良 好。 ｇ 标准色谱图和样品 色 谱 图 峰 形 良 好 ， 线 性 极 佳。总 离 子 流 图 ， 见图 １， 氨基甲酸乙酯的保留时间为１ ３． ５ ２ ３ｍ ｉ ｎ Ｄ ５ －氨 基 甲 ； 特征离子图见图 ２、 酸乙酯的保留时间为 １ ３． ４ ２ ７ｍ ｉ ｎ ３。 ２． ２ 准 确 度 实 验 取 标 准 曲 线 第 １、 ３、 ５个点标准溶液各 分别加到 样 品 中 ， 按上述方法对样品和加标样品处 １ ． ０ｍ Ｌ， 回收率为 ９ 理和测定 ， ０． ７％ ～１ ０ ６． ３％ 。 ２． ３ 精密度实验 取 标 准 曲 线 第 ３ 个 点 标 准 溶 液 １． ０ｍ Ｌ， 加到样品中 ， 共添加了 ６ 个平行样 ， 按上述方法进行处理 和 测 得相对标准偏差 （ 定， Ｒ Ｓ Ｄ） ＝２． ６％ 。
螨描述亦相一致， 且有些标本同文献［ 中茅舍血厉螨的来 ３］ 由此证明我们观察的标本为茅舍血厉螨而非其它螨 源相同， 种 。Ｔ 背板刚毛３ 可见 ｉ ｌ ｌ ＷＭ 对 茅 舍 血 厉 螨 描 述 显 示 ， ９对， 数目不定的副钢毛数； 对螯肢动趾和定趾的齿数及次大一块 但在图中显示的次大一块足后 足后板的形态未作明确描述， 板呈杆状而非“ 形， 这与我们观察到的部分标本一致。因 ＜” 我们认为国内文献描述有误， 可能是因为在描述茅舍血 此， 厉螨时观察的标本数有限。副刚毛数及足后板的形态有 较 大个体差异， 具 有 不 稳 定 性， 因 此， 不应作为种类鉴定的特 我们认为， 检索表是种类鉴定的重要工具， 在制作 征。此外， 检索表时也应尽量避免应用不稳定的形态特征， 否则易引起 鉴定错误。 参考文献
１ 材料与方法
１． １ 仪 器 与 试 剂 Ａ ｉ ｌ ｅ ｎ ｔ ６ ８ ９ ０ Ｎ ５ ９ ７ ３ ｉ气 相 色 谱 －质 谱 仪 － ｇ （ ） ； 旋涡 混 匀 器 ； 氮 吹 仪； 美国 Ｂ Ｇ Ｃ－Ｍ Ｓ ｅ ｃ ｋ ｍ ａ ｎ Ａ ｌ ｌ ｅ ｒ ａ Ｘ ３ ０ － ｇ 离心机 。 无水硫酸钠 ， 于４ 冷却后贮存于干燥 ５ ０ ℃ 灼 烧 ４ｈ， ； ； 器中备用 ； 甲醇 （ 色谱 纯） 二氯甲烷（ 农 残 级） 氯化钠（ 优级 ； ； 乙酸乙酯 （ 农残级 ） 氨基 甲 酸 乙 酯 标 准 品 ， 纯 纯） Ｃ ３Ｈ ７Ｏ ２Ｎ， ； 度 ＞９ ９％ ， Ｃ Ａ Ｓ： ５ １ ７ ９ ６ Ｄ ５ － － －氨基甲酸乙酯 。 内径） １． ２ 仪 器 条 件 毛 细 管 色 谱 柱 ： ３ ０ ｍ×０． ２ ５ ｍｍ（ × （ ） ， ； 膜 厚 柱 进 样 口 温 度 ｍ Ｄ Ｂ Ｉ ＮＮＯＷＡ Ｘ ２ ０ ０ ℃； ０ ． ２ ５μ － ， 柱温 ： 初温 ５ 保持 １ｍ 再以 ８ ℃／ ＡＵＸ： ２ ８ ０ ℃； ０ ℃， ｉ ｎ ｍ ｉ ｎ升 。载 气： 至１ 保留５ｍ 氮 ８ ０ ℃ 。 程序运行完成后 升 ２ ４ ０ ℃， ｉ ｎ ／ ； 纯度 ≥９ 流速 １ｍ 不分流进样 ； 电离 方 式 ： 气， ９ ． ９ ９ ９％ ， Ｌ ｍ ｉ ｎ 离子源温度： 氨基甲酸乙酯选择监测离 Ｅ Ｉ源 ， ７ ０ｅ Ｖ； ２ ３ ０ ℃； ／ ） ： 子（ 定量离子 ６ ｍ ｚ ４ ４、 ６ ２、 ８ ９； ２； Ｄ ５ －氨基 甲 酸 乙 酯 选 择 监 测 ／ ） ： 离子 （ 定量离子 ６ 内标法定量 。 ｍ ｚ ４ ４、 ６ ４、 ７ ６； ４； １． ３ 标准溶液 ） 精确至 ０． １． ３． １ Ｄ ５ ０ ０ ０ １ｇ －氨基甲酸乙酯溶液 准确称取 （ 适量的 Ｄ 用 甲 醇 配 制 成 浓 度 为 １． ５ ０ －氨基甲 酸 乙 酯 标 准 品 ， ／ ／ 使用前用甲醇稀释至 １． ｍ ｍ Ｌ 的标准储备液 ， ０μ ｍ Ｌ。 ｇ ｇ （ 氨基 甲 酸 乙 酯 标 准 溶 液 准 确 称 取 精 确 至 １． ３． ２ ０． ０ ０ ０ １ ） 适量的 氨 基 甲 酸 乙 酯 标 准 品 ， 用 甲 醇 配 制 成 浓 度 为 １． ０ ｇ ／ ／ 使用前用甲醇稀释至 ０． ｍ ｍ Ｌ 的标准储备液 ， ２μ ｍ Ｌ。 ｇ ｇ １． ３． ３ 氨 基 甲 酸 乙 酯 标 准 曲 线 制 作 准 确 移 取 ０． １、 ０． ２、 ／ ０ ． ４、 ０． ６ 和 ０． ８ｍ Ｌ 的氨基甲酸乙酯标准使用液（ ０． ２μ ｇ ， （ ／ ） ， 加１ 氨基甲酸乙酯溶液 用 甲 ｍ Ｌ） ０ ０μ Ｌ的 Ｄ ５ １． ０ ｍ Ｌ － ｇ μ ／ 醇定容至 １． 得到 ２ ０ｍ Ｌ， ０． ０、 ４ ０． ０、 ８ ０． ０、 １ ２ ０． ０和１ ６ ０． ０ｎ ｇ ／ 内含 １ ｍ Ｌ 的标准使用液 （ ０ ０． ０ｎ ｍ Ｌ的 Ｄ ５ －氨基甲酸乙酯内 ｇ 。 标浓度 ） １． ４ 样品处理 葡 萄 酒 分 析 步 骤 称 取 试 样 ２． １． ４． １ 黄 酒 、 ０ ０ｇ 于 １ ０． ０ 加 ０． 混 合 溶 解。 ｍ Ｌ 离 心 管 中， ８ｇ 氯 化 钠 ， １ ０ ０μ Ｌ 的 内 标， 用 ２×２ｍ 于涡旋混合器１ｍ Ｌ 二氯甲 烷 提 取 ， ｉ ｎ混 匀， ３ ０ ０ ０ ／ ， 用尖嘴吸管吸出二氯甲烷层 ， 合并转入 ５． ｍ ｉ ｎ 离心 ２ｍ ｉ ｎ ０ ｒ ， ， ， 离心管 水浴 氮气缓流下浓缩至 立 即 加 入 ｍ Ｌ ３ ５℃ ０． １ｍ Ｌ 乙酸乙酯溶解 ， 定容至 １． ０ ０ｍ Ｌ供 Ｇ Ｃ－Ｍ Ｓ 测定 。 １． ４． ２ 白酒分析步骤 称取试样 １． ０ ０ｇ 于 １ ０． ０ｍ Ｌ 离心 管 ， （ 中 加水调节样品的 酒 精 度 至 ２ ５％ 酒 精 度 低 于 ２ ５％ 的 样 品 ， 不再稀释 ） 之后步骤与 １． ４． １ 相同 。 ／ １． ５ 结果计算 将 ２ ０． ０、 ４ ０． ０、 ８ ０． ０、 １ ２ ０． ０和１ ６ ０． ０ｎ ｍ Ｌ ｇ ／ 的标准使用液 （ 含１ 进行仪 ０ ０． ０ｎ ｍ Ｌ的 Ｄ ５ －氨基甲酸乙酯 ） ｇ 器分析 ， 绘制标准曲 线 ； 进 行 样 品 测 定， 根据标准曲线计算测 定液中氨基甲酸乙酯所对应的浓度 。 试样中氨基甲酸乙酯 含 ／ 量计算公式 ： Ｘ＝Ａ ×Ｖ ｍ。 式 中 ： Ｘ－ 试 样 中 氨 基 甲 酸 乙 酯 ／ ） ； 含量 （ ｋ Ａ－测 定 液 中 色 谱 峰 与 内 标 色 谱 峰 的 峰 面 积 比 ｇ ｇ μ ／ ； 值对应的氨基甲 酸 乙 酯 浓 度 （ ｍ Ｌ） Ｖ －测 定 液 甲 醇 定 容 体 ｇ μ ， ） ； 积（ 本法为 １． ｍ Ｌ） ０ｍ Ｌ； ｍ－样品取样量 （ ｇ
］ １ ３ － 。Ｆ ／ＷＨＯ 食 品 添 加 剂 联 合 专 家 委 员 会 （ 要问题 ［ ＡＯ Ｊ Ｅ Ｃ －
第６ 应尽可能降低发酵饮料和食品中 Ｅ Ｆ Ａ） ４ 次会议建 议 ， Ｃ 含量 。 因此 ， 建立简便 、 准确的 Ｅ Ｃ 检测方法是酒质量控制的 重要内容 之 一 。 目 前 ， 液 －液 萃 取 仍 是 常 用 的 样 品 前 处 理 方 法 。 该法具有操作简 单 、 无 需 特 殊 设 备 的 优 点。我 国 颁 布 的 《 出口酒类中氨基甲酸乙酯残留量检 验 方 法 》 即 Ｓ Ｎ ０ ２ ８ ５ １ ９ ９ ３ － 用液／液萃取法 ， 但此检测法为外标法 。 本研究以氘代同 位 素
［ ］邓国藩 ， 王敦 清 ， 顾 以 铭， 等． 中 国 经 济 昆 虫 志， 第４ 蜱螨亚 １ ０ 册， 皮刺螨总科 ［ 北京 ： 科学出版社 ， 纲， Ｍ］ ． １ ９ ９ ３： ９ ８ １ １ ６． － ［ ］Ｔ ｅ ｎ ｕ ｓ ２ ｉ ｌ ｌ ＷＭ． Ｅ ｔ ｈ ｉ ｏ ｉ ａ ｎ ｍ ｉ ｔ ｅ ｓ ｏ ｆ ｔ ｈ ｅ Ａ ｎ ｄ ｒ ｏ ｌ ａ ｅ ｌ ａ ｓ Ｂ ｅ ｒ ｌ ｅ ｓ ｅ ｓ ． ｇ ｐ ｐ （ ： ） ［ ］ ， Ａ ｃ ａ ｒ ｉ Ｍ ｅ ｓ ｏ ｓ ｔ ｉ ｍ ａ ｔ ａ Ｊ ． Ｂ ｕ ｌ ｌ Ｂ ｒ ｉ ｔ Ｍ ｕ ｓ Ｚ ｏ ｏ ｌ １ ９ ６ ３， １ ０： ２ ３ ｌ ａ ｔ ． － ｇ ２ ４． ［ ］王敦清 ． ， ） （ ： 福建五种血厉螨 （ ３ Ｈ ａ ｅ ｍ ｏ ｌ ａ ｅ ｌ ａ ｓ Ｂ ｅ ｒ ｌ ｅ ｓ ｅ １ ９ １ ０ Ａ ｃ ａ ｒ ｉ ｎ ａ ｐ ） ］ （ ） ： 的记述 ［ 昆虫学报 ， Ｌ ａ ｅ ｌ ａ ｔ ｉ ｄ ａ ｅ Ｊ ． １ ９ ６ ３， １ ２ ２ １ ９ ９ ２ ０ ８． － ｐ 收稿日期 ： 黄春燕 ２ ０ １ ３ ０ ３ １ ８ － － 责任编辑 ：