同型半胱氨酸HCY检测试剂方法学比较培训课件

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直接法优点
➢ 市场选择
循环酶法： 直接法、间接法
可在大型生化分析仪上使用，操作简单，结果准 确可靠，且可和其他参数进行同时分析，目前最 为常用的临床检测方法；
参考文献：同型半胱氨酸检测技术的研究进展及评价；谭功军等，实用预防医学，
2010，11（24）：2334-2337同型半胱氨酸HCY检测试剂方法学比较
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直接法测定Hcy原理
同型半胱氨酸HCY检测试剂方法学比较
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直接法优点
美国FDA对间接法Hcy试剂发出的警告信
• 见链接： http://www.fda.gov/ICECI/EnforcementActions/WarningLetters/2 005/ucm075355.htm，详见论文1
同型半胱氨酸HCY检测试剂方法学比较
同型半胱氨酸在体内的主要代谢途径： 间接法（胱硫醚法）
数据来源：www.kegg.同jp型半胱氨酸HC直Y检接测试法剂（方法水学解比较酶法）
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直接法测定Hcy原理
① ATP + L-methionine + H2O = phosphate + diphosphate + S-methyl-L-methionine ② S-methyl-L-methionine + L-homocysteine = L-methionine+S-adenosyl-L-homocysteine ③ S-adenosyl-L-homocysteine + H2O = L-homocysteine + adenosine ④ adenosine + H2O = inosine + NH3 ⑤ 2-oxoglutarate + NH3 + NADH+ H+= L-glutamate + H2O + NAD+
•肾脏疾病非常普遍，如果有实验室想要使用间接法试剂来测试Hcy，那
么他们将不得不同时进行肌酐的检测来确认实验的结果是Hcy的，而不是
由于肾脏疾病而产生的胱同硫型半醚胱的氨酸。HCY检测试剂方法学比较
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直接法优点
➢原理设计
2、间接法检测准确性及线性范围存在问题 •间接法的试剂检测线性范围窄，对于高于50 μmol/L的样本 中报告出假阴性结果，往往无法给出正确的结果，试验很可 能只报告出30μmol/L或更低。
同型半胱氨酸HCY检测试剂方法学比较
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直接法优点
原理设计 1 干扰项目 2
直循间环接接酶法法法
3 市场选择 4 试剂性能
同型半胱氨酸HCY检测试剂方法学比较
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直接法优点
➢ 原理设计
• 胱硫醚循环酶法（简称间接法）的Hcy检测试剂在基本的 设计上存在着问题，其检验是靠测量Hcy转化为β-胱硫醚 时产生的胱硫醚，但是却不能够消除内生β-胱硫醚，而 恰恰有很多人，尤其是肾脏疾病患者的内生β-胱硫醚水 平非常高（可高达>300μmol/L，大部份< 20μmol/L)。 间接法的Hcy试剂受到了内生胱硫醚的明显干扰。它测的 是同型半胱氨酸(Hcy)与内源性胱硫醚的总和，因此被称 为是很好的检测胱硫醚的试剂而非检测Hcy的试剂。
常用方法
色谱法： HPLC、GC-MS
荧光偏振免疫检测 （FPLA） 酶联免疫
化学发光
优缺点
具有很高的准确度和稳定性，缺点是处理标本的 能力有限，临床实验室未配备设备及操作人员， 常作为同型半胱氨酸检测的参考方Biblioteka Baidu； 成本高，需专用仪器。
灵敏度高特异性强，但精密度差，耗费人力，操 作时间长，不适宜做单个标本和急诊标本。 成本高，需专用仪器
同型半胱氨酸HCY检测试 剂方法学比较
同型半胱氨酸（Hcy）简介
➢ 功能特点：Hcy是一个含硫氨基酸，是蛋氨酸代 谢的中间产物。
Hcy自发形成的巯基内酯化合物，可以和反式视黄酸共同 引起血小板的凝集，与此同时，同型半胱氨酸巯基内酯还 可引起血栓素（TXB2）的形成。
同型半胱氨酸巯基内酯，与低密度脂蛋白形成复合体，随 后被巨噬细胞吞噬，形成泡沫细胞。促进血凝块的形成， 从而引起临床上常见的梗塞性疾病。
• 水解酶循环酶法（简称直接法）不受上述干扰。此项数据 结果发表在AACC杂志上。这也是一些国际知名公司拒绝使 用胱硫醚循环法Hcy试剂的原因。
同型半胱氨酸HCY检测试剂方法学比较
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直接法优点
➢原理设计
1、间接法存在内源性胱硫醚的假阳性干扰
•罗氏和雅培公司的医学部检测专家甚至声称间接法试剂是很好的检测胱 硫醚的试剂而非检测Hcy的试剂。
同型半胱氨酸HCY检测试剂方法学比较
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直接法优点
➢干扰项目
2、间接法试剂会受到铁试剂的干扰
•若在仪器上同时做铁项目，那么间接法试剂就不能在该仪器 上使用。美国Carolina州液体化学（实验室）做了铁试剂对 间接法试剂与直接法试剂的干扰实验，结果发现间接法试剂 检测的Hcy水平很低，而直接法的Hcy结果却相当准确。 为此FDA对间接法试剂也发出了警告提示
•为此，贝克曼公司曾给用户发出忠告文件，详见参考文献:
Selhub J. Homocysteine metabolism. Ann Rev Nutr, 1999, 19:217-46
同型半胱氨酸HCY检测试剂方法学比较
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直接法优点
➢干扰项目
1、间接法试剂会受到脂肪酶试剂的干扰
•如果间接法Hcy试剂与脂肪酶试剂在同一台仪器上使用，那 么其结果将受到脂肪酶试剂的严重干扰。间接法试剂厂家同 样对客户发出了忠告性文件称如果同时使用脂肪酶试剂，请 务必仔细清洗。
同型半胱氨酸HCY检测试剂方法学比较
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如何区分两种方法学的试剂
➢ 很多胱硫醚循环酶法的试剂其试剂比例也可以完 全够模仿水解酶循环酶法试剂。有一个方法可以 简易的区分两者：
• 胱硫醚循环酶法（简称间接法）：其试剂二（R2）是 淡黄色的！
• 水解酶循环酶法（简称直接法）：其试剂二（R2）是 无色的！
同型半胱氨酸HCY检测试剂方法学比较
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同型半胱氨酸（Hcy）简介
➢ 同型半胱氨酸（Hcy）致血管病变机制
致血管内皮细胞损伤和功能异常 对血管平滑肌细胞(VSMCS)的影响
刺激血管平滑肌增殖 对凝血系统的影响
增加血液中血小板的黏附性 对血脂的影响
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常用Hcy测定方法