兼性厌氧苯胺降解菌的分离鉴定及其特性

兼性厌氧苯胺降解菌的分离鉴定及其特性

曾国驱1,任随周1,2,曹渭1,胡锦财1,林璐菁1,孙国萍13

(1.广东省微生物研究所广东省菌种保藏与应用重点实验室,广州　510070;2.中国科学院研究生院,北京　100039)

摘要:从处理印染废水的厌氧折流板反应器(ABR )系统中分离、纯化并筛选出1株能以苯胺为唯一碳氮源进行代谢的兼性厌氧苯胺降解菌株AN29.经过形态、生理生化特征试验和16S rDNA 序列分析结果,鉴定菌株AN29为假单胞菌(Pseudomonas

sp.),其特性为:降解苯胺的最适温度为37℃,降解苯胺合适的起始p H 值为615～810,可以利用苯胺的最高浓度为4000mg/L ,合适起始浓度为500～2000mg/L.

关键词:苯胺;兼性厌氧;生物降解;特性

中图分类号:X172　文献标识码:A 文章编号:025023301(2006)0821618205

收稿日期:2005209209;修订日期:2005211208

基金项目:国家高技术研究发展计划(863)项目(2003AA214040);广

东省自然科学基金研究团队项目(2015017);广东省科技攻关重大项目(2004A30404002);广东省自然科学基金项目(032319);广东省科技攻关项目(2002C31605)

作者简介:曾国驱(1966～),男,硕士,副研究员,主要研究方向为环

境生物技术.

3通讯联系人,E 2mail :ebiotech @1631com

Isolation and Characterization of a F acultative Anaerobic Aniline 2Degrading B acterium

ZEN G Guo 2qu 1,REN Sui 2zhou 1,2,CAO Wei 1,HU Jin 2cai 1,L IN Lu 2jing 1,SUN Guo 2ping 1

(1.Guangdong Provincial K ey Laboratory of Microbial Culture Collection and A pplication ,Guangdong Institute of Microbiology ,Guangzhou 510070,China ;2Graduate School of the Chinese Academ y of Sciences ,Beijing 100039,China )

Abstract :An aniline 2degrading bacterium (designated strain AN29)was isolated from dyeing wastewater process (anaerobic baffled reactor ,ABR )with the capability of utilizing aniline as sole carbon source and nitrogen source.It was identified as Pseudomonas sp.based upon the phenotypic properties and a partial analysis of the 16S rDNA.The strain could degrade aniline under the aerobic and anaerobic conditions ,the optimal initial p H 615～810,a temperature of 37℃,and initial aniline concentrations of 500～2000mg/L with maximum concentration of 4000mg/L respectively.

K ey w ords :aniline ;facultative anaerobic ;biodegradation ;characterization

苯胺被用以制造农药、染料、塑料、药品[1,2],除此之外还作为污染物释放到环境中且其进入途径日渐增多,对环境造成严重的威胁,引起多个国家的重视并列为优先控制物或危险物[3,4].生物降解被认为是水环境苯胺消除最有效的方法[5],近年来,降解苯胺的微生物和以苯胺降解菌为核心的生物处理工艺2个方面的研究都取得了进展[6],其中苯胺降解菌的分离筛选、代谢途径及其降解基因的研究有不少的报道,但以好氧菌的研究为主,苯胺厌氧降解菌或苯胺兼性厌氧降解菌的研究甚少,而且存在菌体生长缓慢和降解效果与好氧状态下相差甚远的问题[6～15].兼性厌氧苯胺降解菌适合应用于不同环境中,有着苯胺好氧降解菌不可替代的优势,因此筛选高效兼性厌氧苯胺降解菌是环境污染治理、土壤生物修复的关键之一.本研究从印染废水处理系统中分离出在兼性厌氧条件下有较高降解能力的苯胺降解菌AN29,并对其进行鉴定和特性研究,以期为构建降解基因工程菌和实际应用提供帮助.1　材料与方法111　菌株来源

分离样品采自处理印染废水的厌氧折流板反应

器(ABR )小试装置.112　培养基

LB 培养基:每L 含酵母抽提物5g ,蛋白胨10g ,NaCl 10g ,调p H 值至710.

MMN 培养基组成按文献[16]略作修改(mg/L ):含Na 2HPO 4:141916,KH 2PO 4:136019,MgSO 4:9815,CaCl 2・2H 2O :5188,H 3BO 4:1116,FeSO 4・7H 2O :2178,ZnSO 4・7H 2O :1115,MnSO 4・H 2O :1169,CuSO 4・5H 2O :0138,CoCl 2・6H 2O :0124,ED TA :312.113　菌株的富集

取1mL 待分离样品置于预先灭菌的250mL 的锥形瓶中,加入100mL 苯胺浓度为250mg/L 的无机盐培养基,静置富集培养,直到培养液由澄清变

第27卷第8期2006年8月

环 境 科 学ENV IRONM EN TAL SCIENCE

Vol.27,No.8Aug.,2006