细菌分离培养[知识研究]

运作姿势
专业知识
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分区划线： 多用于粪便等 含菌量较多的 标本。
每划一个区域，将
接种环烧灼一次，
待冷却后再划下一
个区域。每一区域
的划线应接触上一
区域接种线的2~3
次，使菌量逐渐减
少，以形成单个菌
落。
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连续划线（曲线划线）：分离含菌量较少的培养物
右手持接种环， 通过火焰灭菌， 冷却后，挑取标 本或培养物少许
是否皆为纯种？何为纯种？
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涂布平板法：
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平板划线法：
98％ 661genes
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细胞只来源同一个细专胞业知的识 后代。
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试验内容：
1.需氧菌的分离移植和增菌
• 平板划线分离
• 营养（普通）斜面接种
• 营养（普通）肉汤增菌
2. 厌氧菌的分离培养方法（本次试验不做）
• 生物学方法、化学方法、物理学方法
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实验要求：
掌握：
掌握细菌分离培养的基本要领和方法 掌握无菌操作程序 掌握细菌在培养基上生长特点
认识：
认识菌落形态
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无菌操作工具
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接 种 工 具
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分离纯化法：（细菌分离纯化）
• 1、平板划线法 • 2、稀释涂布平板法 • 3、稀释混合（倾注）平板法 • 4、显微操作器单细胞挑取法 • 5、棋盘格划线法
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1.平板划线：
将蘸有混合细菌的接种环在平板表面多方 向连续划线，使混杂的微生物细胞在平板表面 分散，浓度变稀，经培养得到由单个细胞繁殖 而成的菌落，从而达到纯化。
实验三 细菌分离培养及移植
刘书超
专业知识
预防兽医教研室
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细菌的分离纯化技术
分离纯化技术是细菌学实验中最基本的技术之一
• 临床送检样品或混杂的样品 • 分离受杂菌污染的菌种 • 细菌纯培养物
分离纯化：
• 使微生物共生群体分离开，得到纯培养物的
过程称微生物的纯分离技术。得到的纯培养
物称纯种。
• 纯种：指一种或一株微生物培养物中所有的
环。
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操作顺序：
接种环灭菌 勾取细菌
取棉塞
接种
塞棉塞
接种环灭菌
标记 培养。
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思考题：
1、划线分离时为什么每次都要讲接种环上多余 的菌体烧掉？划线时为何不能重叠？
2、在恒温箱培养微生物时为何培养皿均需倒置？ 3、如何进行菌落形状的检查？检查时应注意观
察菌落的哪些性状？ 4、分离培养的目的是什么？经一次分离的菌种
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2. 斜面移植法：培养，保存菌种及其它。
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手执塑料杆处
小指夹棉塞 试管口离火焰
1cm
手执试管底 露出斜面
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培养后生长的斜面菌种
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液体培养基接种法：
用于增菌及纯培养细菌的生长特点观察， 如表面生长，沉淀生长，均匀混浊生长等。
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细菌在液体培养基中生长的三种不同现象 混浊：细菌均匀弥漫扩散，出现不同程度混浊。 沉淀：细菌由下沉。肉眼可见沉淀物（颗粒絮状） 菌膜：需氧菌易在液面生长，形成可见的菌膜，菌
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1.平板划线：
平板划线的原则和目的： 通过划线稀释细菌
划线均匀而细密， 不重复
充分利用培养基 面积
获得单个菌落
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培养基不能划破
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A
B
C
图1 平板画线法 A、B、C分别为1、2、3次画线
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Hale Waihona Puke Baidu
注意手势
1.培养皿与酒
精灯的距离
2.左手打开培
养皿的动作
3.右手握接种
棒的姿势
4.右手划线的
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1.平板划线：
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4
3
1
2
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细菌在固体培养 基中的生长情况：
单个菌落（S型）
菌落（R型）
菌苔
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细菌的培养特征：
不同种类的细菌在固体、半固体和液体培 养基中可表现出各自特有的培养特征。可以作 为细菌鉴别的特征之一。
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细菌在固体培养基中生长表现：
1、大小 （ mm表示。1mm以内露滴状；1-2mm小菌落。
2- -4mm中等大菌落；4-6mm以上称大菌落或巨大菌落）
2、形状 （圆形、不规则形） 3、边缘 （整齐、锯齿状） 4、表面性状（光滑、粗糙） 5、隆起度（扁平、隆起、中凸） 6、颜色及透明度（黄色、灰白、光泽、透明） 7、硬度（干燥、湿润、粘液） 8、溶血（在血培养基上的表现）