鹿流行性出血病病毒双抗夹心ELISA方法的建立

Ｈቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ Ｐ标 记 羊 抗
兔 ＩＧ 为 Ｓｇ ｇ ｉｍａ公 司 产 品 ， 溶 型单 组 分 ＴＭＢ底 可
物 溶液 为 Ｍｉｉｏ ｅ 司 产 品 ， ６孔 （ ｌｐ ｒ 公 ｌ ９ ８孔 × １ ２条 ） Ｅ ＩＡ 微孔 板为 Ｃ ｓａ 司产 品 ， 白 Ａ／ ＬＳ ｏｔ 公 蛋 Ｇ抗体 纯
化试 剂盒 为 Ｐｅｃ 公 司产 品 。 ｉｒｅ
Ｅ Ｉ Ａ方 法 。通 过 对 ＥＨＤ 阳性 样 品 、 性 样 品 、 ＬＳ Ｖ 阴
其 他 病毒 阳性样 品及 参 考 样 品 的检 测 ， 果 表 明该 结
以用 于 Ｅ ＨＤ 快 速检 测 。 Ｖ
（ ＨＤ 引起 的 ， Ｅ Ｖ） 以引起 白尾鹿 体 温 升 高 、 黏膜 和 浆 Ｅ ＩＡ 方 法具 有 良好 的特 异 性 和 敏感 性 ， 方 法 可 ＬＳ 该 膜广泛 出血并 常处 于 昏迷 状态 下死 亡 为 特征 的致死 性虫媒 传染 病 ， 牛和 羊也 可 以感染 发 病 。流 行 期 时 ， 此病危 害 较 大 ， 重 影 响 畜 牧 业 和 国 际 贸 易 的 发 严
境 检验 检疫 局 动植 物检 验检疫 技 术 中心 动检 实 验 室
保 存 。３月龄新 西 兰 家兔 购 自广 东 省 医学 实 验 动 物
中心 。
异性 抗原 ， Ｓ 由 ７基 因编码 ， 因全 长 １１ ２ｂ ， 码 基 ６ ｐ 编
３ ９个氨 基酸 残基 。 ４ ］
１１２ 主 要 试 剂 、 料 及 试 剂 盒 ．． 材
展 Ｌ 。 由于 ＥＨＤ 在周 边 国家 （ 日本 、 １ ］ Ｖ 如 朝鲜 ） 曾 都
１ 材 料 与 方 法
１ １ 材 料 ．
１ １ １ 病 毒 、 胞 株 及 实验 动 物 Ｅ ． ． 细 ＨＤＶ（ 清 １ 血 型 ＂ ８型） 蓝舌 病病 毒 （ ＴＶ） 、 、Ｏ和 １ － － － 、 Ｂ １３ １ ７血 清 型 、 新 泽 西 型 水 疱 性 口炎 病 毒 （ Ｖ ＮＪ 、 羽 病 病 毒 ＶＳ － ） 赤 （ ＡＫＶ） 小 反 刍 兽 疫 病 毒 （ Ｐ Ｖ） 灭 活 抗 原 （ 、 ＰＲ 等 经
（ ． 圳 出入 境 检 验 检 疫 局 ， 东 深 圳 ５ ８０ ； ． 南 出 入 境 检 验 检 疫 局 ， 南 昆 明 ６ ０ ２ ） １深 广 １０ １ ２ 云 云 ５ ２ ８
摘
要 ： 建立鹿 流行 性 出血病 病毒 （ ＨＤ 病原 学检 测方 法 ， 为 Ｅ Ｖ） 用纯 化 的抗 Ｅ Ｖ 特 异性 单 克 隆 抗体 ＨＤ
包被 Ｅ Ｉ Ａ板 ， 兔抗 ＥＨＤ Ｉ Ｇ作 为 夹心抗 体 ，ｇ 作 为 夹心抗体 建 立 Ｅ ＬＳ 用 Ｖ ｇ ＩＧ ＨＤ 双 抗 夹心 Ｅ Ｉ Ａ 方 法 ， Ｖ ＬＳ 并
对 该方 法 的特异性 和敏 感性 进行 了试 验 。用 Ｅ ＩＡ 分 别检 测 ＥＨＤ 蓝 舌病 病毒 （ ＴＶ） 水疱 性 口炎病 毒 ＬＳ Ｖ、 Ｂ 、
Ｂ ＨＫ一 １ ２ 细胞 增 殖 ） Ｂ 和 ＨＫ一 １细胞 均 由深 圳 出 入 ２
暴发过 ， 在 Ｅ 存 ＨＤＶ 传人 我 国 的风 险 。 因此 ， ＨＤ Ｅ
是 我 国进 出 口贸 易 中需 要监 测 的重要 疫病 。
Ｅ Ｖ 属 呼肠 病 毒 科 （ ｅｖｒｄ ｅ ＨＤ Ｒ ｏ ｉｉａ ）环 状 病 毒
动 物 医学进 展 ，０ １ ３ （０ ：一 ２ １ ，２ １ ） ｌ５
Ｐｒ ｇ ｅ ｓ ｉ ｔ ｒｎ ｒ ｅ ｉｉ ｏ ｒ ｓ ｎ Ｖｅ ｅ ｉ ａ ｙ Ｍ ｄ ｃｎｅ
鹿 流 行 性 出血 病 病 毒 双 抗 夹 心 Ｅ Ｉ Ａ 方 法 的建 立 ＬＳ
陈 兵 李健 波 杨 俊 兴 阮周 曦 孙 洁 张 彩 虹 刘 建 利 ， 群 义ｈ ， 晓黎 ， ， ， ， ， ， 花 周
（ Ｖ） 赤 羽病病毒 （ ＶＳ 、 ＡＫＶ） 小反 刍兽 疫病 毒 （ Ｐ Ｖ） 品 ， Ｒ — Ｃ 作 对 照 。结 果表 明 ， Ｌ Ｓ 具有 良 、 ＰＲ 样 用 ＴＰ Ｒ Ｅ ＩＡ
好 的特异 性和敏 感 性 。用 夹心 Ｅ Ｉ Ａ 和 Ｒ — Ｃ 同 时检 测 １ ８份 参 考样 品 ， ＬＳ ＴＰ Ｒ ２ 结果表 明 夹心 Ｅ Ｉ Ａ 的特 异 ＬＳ
目前 ， 常用 的 Ｅ Ｖ 检测方 法 有 琼脂 扩 散 试 验 ＨＤ （ ＡＧＩ 和 Ｒ － Ｐ Ｒ方 法Ｌ 。 由于 Ｅ Ｖ 与 Ｂ Ｄ） Ｔ－ Ｃ ｓ ］ ＨＤ ＴＶ
之 间有很 强 的免 疫 学交 叉 反 应［ ， ６ 因此 ， ］ ＡＧＩ 的特 Ｄ
性 和 敏 感 性 分 别 为 １ ０ 和 ９ ． ， 种 方 法 的 符 合 率 为 ９ ． 。 本 研 究 结 果 为 Ｅ ０ ６３ 两 ９２ ＨＤ 检 测 及 鹿 流 行 性 Ｖ
出血 病流 行病 学调 查提供 了有效 的工 具 。 关 键 词 ： 流行 性 出病 ； 流行 性 出病病 毒 ； 鹿 鹿 双抗体 夹心 ＥＬ Ｓ 单 克 隆抗体 Ｉ Ａ；
中 国分 类 号 ：８４ ４ ￥５．３ 文献标识码 ： Ａ 文 章 编 号 ：０ ７５ ３ （０ １ １—０ １０ １０ —０ ８ ２ １ ）００ ０—５
鹿 流 行 性 出 血 病 （ ｐｚ ｏｉ ｈ ｍｏｒ ａ ｉ ｄｓ Ｅ ｉ ｔ ｅ ｒｈ ｇｃ ｉ ｏ ｃ — ｅｓ ｆｄ ｅ，ＥＨＤ） 由 鹿 流 行 性 出 血 病 病 毒 ａ ｅｏ ｅｒ 是
属 （ ｂｖｒ ｓ ， Ｏ ｉｉｕ ） 是节 肢 动 物 源 （ 要 是 库 蠓 ） 主 的双 股 ＲＮＡ病 毒［ 。Ｅ Ｖ 由 １ 片段 （ ～１ ） ２ ］ ＨＤ Ｏ个 １ ０ 组成 ， 编 码 ７个结 构 蛋 白 （ １７ 和 ３个 非 结 构 蛋 白 （ １ ＶＰ － ） ＮＳ 、
ＮＳ 、 ａ ＮＳ Ａ） ］ ２ ＮＳ ／ ａ Ｌ 。ＶＰ ３ ７蛋 白是 Ｅ ＨＤＶ 的 群 特