石蜡切片的制作方法
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石蜡切片的制作方法
试剂FAA固定液(70%酒精90ml、冰醋酸5ml、福尔马林
5ml)、10%番红水溶液、0、5%固绿(用95%的酒精配制)、酒精(100%、95%、80%、70%、50%)、二甲苯、蒸馏水、甘油、中性树胶等。
3 方法与步骤固定:FAA固定液固定48小时以上。
脱水:50%酒精70%酒精83%酒精95%酒精100%酒精100%酒精。
每级2h。
100%酒精中1、5h。
其中70%酒精可长期保存。
透明:1/2二甲苯+1/2无水乙醇(2h)纯二甲苯(1、5h)纯二甲苯(1、5h)浸蜡:将处理的材料置于1/2石蜡(固体粉末状)+1/2二甲苯中,40℃烘箱敞口过夜。
包埋:先提升恒温想的温度至60℃,换纯蜡3次,每次1-2h,用硬的电光纸、牛皮纸叠纸盒,置于45-60℃的烫板上,倒入材料,摆放好材料,把标签(正面向外置于底部),补足石蜡,倒好后轻轻的置于冷水盆中,注意底面要接触盆中凉水,待石蜡全部凝固后可取出晾干,也可在凉水喷中放置过夜。
切片:对包埋的材料进行修块、粘块、整修后,保证材料四周都有石蜡包围。
但不可太多。
切面的上、下边平行。
用加热的解剖刀蘸取少许石蜡碎屑,并迅速将石蜡块四周的碎屑烫平,使石蜡块牢固的粘在台木上。
检查切片机,安装切片刀、调整好刀的角度,调整石蜡块与刀口之间的角度与位置后开始切片。
粘片:将粘贴剂置于薄玻片上,再取切片浮置粘片剂上,然后置烘片台上,使切片展开烫平,材料不现皱纹为度。
最后将切
片依次排好,用滤纸吸去多余水分,同时以记号笔在载玻片上编号,放入温箱中烘干,温度30-40℃中过夜。
脱蜡:脱蜡用二甲苯,把烤好的载玻片放于盛二甲苯的染缸中:纯二甲苯(10-
20min)纯二甲苯(5-10min)。
染色:将纯二甲苯脱蜡完全的材料,1/2二甲苯+1/2纯酒精100%酒精95%酒精85%酒精70%酒精50%酒精1%番红染色(4h以上)50%酒精70%酒精85%酒精95%酒精0、5%固绿(1min)95%酒精100%酒精100%酒精(未注明时间各级均为3min)。
胶封:滴加加拿大树胶封藏。
镜检,拍照。