7章 第十一节 致泻性大肠杆菌及其检验

婴儿
世界各地 散发或暴发婴儿腹 泻 细胞毒素 定居因子
成人，儿童
世界各地 散发或暴发，常 见于年龄较大儿 童 侵袭肠粘膜细胞
各种年龄
北美、日本 起散发性或暴发 性出血性结肠炎 细胞毒素
常见O血 清型
2、26、44、55、86、 28、29、112、 111、114、119、 6、8、15、20、25、 124、136、143、 125、126、127、 27、78、148、159 144、152、164、 128、142、146、 167 158
(3)肠侵袭性大肠杆菌 （Enteroinvasive E.coli,EIEC）
EIEC的多数菌株无动力，生化反应和抗原结 构均近似痢疾杆菌，应予注意。
（4）肠出血性大肠杆菌 （Enterohemorrhagic E.coli,EHEC）
引起散发性或暴发性出血性结肠炎，可产生志贺氏 毒素样细胞毒素。EHCO的主要菌型是O157：H7， 还可有O26、OⅢ等。 此外，肠粘附性大肠杆菌（Enteroadhesive E.coli,EAEC）也可引起腹泻，但对其发病机理与血 清型尚不了解。EAEC不侵入肠上皮细胞，不产生 LT或ST，也无VT毒素。唯一特征是具有与Hep-2细 胞（人喉上皮细胞癌细胞系）粘附的能力，故也称 Hep-2细胞粘附性大肠杆菌
肠毒素试验（产毒素性大肠杆菌）
（LT－不耐热肠毒素，ST－耐热肠毒素） 1 酶联免疫吸附试验检测LT和ST。 2 双向琼脂扩散试验检测LT 3 乳鼠罐胃试验检测ST
结果报告

综合以上生化试验、血清学试验、肠毒 素试验作出报告。
（1）肠产毒性大肠杆菌 （Enterotoxigenic E. coli,ETEC）
引起婴幼儿和旅游者腹泻，出现轻度水泻， 也可呈严重的霍乱样症状。腹泻常为自限性， 一般2～3天即愈。营养不良者可达数周，也 可反复发作。致病因素是LT或ST，或两者同 时致病。有些菌株具有定居因子，常见者为 O6：K15：H16、O25：K7：H42。鉴定 ETEC主要测定大肠杆菌肠毒素，血清型有一 定参考意义
第十一节 致泻性大肠杆菌及其 检验
大肠杆菌为人和动物肠道中的常居菌，一般 多不致病，在一定条件下可引起肠道外感染。 某些血清型菌株的致病性强，引起腹泻， 与人类疾病有关的大肠杆菌，统称为致泻性 大肠杆菌（enterovirulent E. coli ）。
一般包括四种： 肠毒素性大肠杆菌（ETEC） 致病性大肠杆菌（EPEC） 出血性大肠杆菌（EHEC） 侵袭性大肠杆菌（EIEC）
表：引起急性腹泻的大肠杆菌
肠产毒性大肠杆菌 感染部 位 腹泻类 型 易感人 群 分布 流行病 学 致病机 理 小肠 水泻 肠致病性大肠杆菌 小肠 水泻 肠侵袭性大肠杆 菌 大肠 痢疾样 肠出血性大肠杆菌 大肠 血性腹泻
婴儿，成人
发展中国家(热带) 散发或暴发婴儿腹 泻及旅游者腹泻 LT、ST 定居因子
分离

将乳糖发酵阳性的乳糖胆盐发酵管和增 菌液分别划线接种麦康凯或伊红美蓝琼脂平 板；污染严重的检样，可将检样匀液直接划 线接种麦康凯或伊红美蓝平板，于36±1℃培 养18～24h，观察菌落。不但要注意乳糖发 酵的菌落，同时也要注意乳糖不发酵和迟缓 发酵的菌落。
生化试验

自鉴别平板上直接挑取数个菌落分别接种三糖铁 琼脂(TSI)或克氏双糖铁琼脂(KI)。同时将这些培养 物分别接种蛋白胨水、半固体、pH7.2尿素琼脂、 KCN肉汤和赖氨酸脱羧酶试验培养基。以上培养物 均在36℃培养过夜。 TSI斜面产酸或不产酸，底层产酸，H2S阴性， KCN阴性和尿素阴性的培养物为大肠埃希氏菌。 TSI底层不产酸，或H2S、KCN、尿素有任一项为阳 性的培养物，均非大肠埃希氏菌。必要时做氧化酶 试验和革兰氏染色
（2）肠致病性大肠（Enteropathogenic E.coli,EPEC）
是婴儿腹泻的主要病原菌，有高度传染性，严重者 可致死；成人少见。细菌侵入肠道后，主要在十二 指肠、空肠和回肠上段大量繁殖。切片标本中可见 细菌粘附于绒毛，导致刷状缘破坏、绒毛萎缩、上 皮细胞排列紊乱和功能受损，造成严重腹泻。 EPEC不产生LT或ST。有人报道，EPEC可产生一 种由噬菌体编码的肠毒素，因对Vero细胞（绿猴肾 传代细胞）有毒性，故称VT毒素。VT毒素的结构、 作用与志贺氏毒素相似，具有神经毒素、细胞毒素 和肠毒素性。鉴定EPEC可根据临床表现与血清型。
O157：H7
鉴定
பைடு நூலகம்
测定LT、ST、检出 定居因子血清型
血清型与临床表现
血清型测定细菌 侵袭力
血清型
致泻性大肠杆菌的检验
增菌 以无菌手续称取检验25g，加在225mL营 养肉汤中，以均质器打碎1min或用乳钵加灭 菌砂磨碎。取出适量，接种乳糖胆盐培养基， 以测定大肠菌群MPN，其余的移入500mL广 口瓶内，于36±1℃培养6h。挑取1环，接种 于1管30mL肠道菌增菌肉汤内，于42℃培养 18h。
血清学试验

假定试验：挑取经生化试验证实为大肠埃希氏 菌的琼脂培养物，用致病性大肠埃希氏菌、侵袭性 大肠埃希氏菌和产肠毒素大肠埃希氏菌多价O血清 和出血性大肠埃希氏菌O157血清做玻片凝集试验。 当与某一种多价O血清凝集时，再与该多价血 清所包含的单价O血清做试验。如与某一个单价O 血清呈现强凝集反应，即为假定试验阳性。
证实试验
制备O抗原悬液，稀释至与Mac Farland3号 比浊管相当的浓度。原效价为1：160～1： 320的O血清，用0.5%盐水稀释至1：40。稀 释血清与抗原悬液在10mm×75mm试管内等 量混合，做单管凝集试验。混匀后放于50℃ 水浴箱内，经16h后观察结果。如出现凝集， 可证实为该O抗原