药用植物组织培养

药用植物组织培养

1.药用植物组织培养的定义及组培中所涉及的主要概念。

定义：是指在无菌条件下，将离体的药用植物器官、组织、细胞及原生质体，培养在人工培养上和人工控制的环境中，使其生长、分化、形成新的植株的过程和技术。（又称植物离体培养、植物克隆）

组培中所涉及的主要概念：

培养基：指根据植物营养原理和植物组织离体培养的要求而人工配制的营养基质。

初代培养：也叫第一代培养，指将从植物体上分离下来的材料进行的一次培养。

继代培养：将初代培养的培养物转移到新的培养基上继续培养。

固体培养基：指把加入琼脂或结冷胶使培养基呈固体状态的培养。外植体：由植物体上切取下来用于组织培养的离体材料。（泛指第一次接种所用的植物组织、器官等一切离体材料。）

愈伤组织：指外植体因受伤或离体培养时，其未分化的细胞和已分化的细胞进行活跃的分裂，形成的一种无特定结构和功能的薄壁细胞。

5.植物组织培养的特点?

特点: (1 )、培养条件可以人为控制；

（2）、生长周期短，繁殖率高；

（3）、管理方便，利于工厂化生产和自动化控制。

1.一般药用植物组织培养实验室由那些分室所组成?各分室的作用及所需仪器设备等。

一般药用植物组织培养实验室由准备室（条件许可的情况下，可细分为储存室、洗涤室、配制室）、无菌操作室、培养室和温室。

（1）准备室：

①作用:主要进行一些常规的试验操作，如所需器皿的洗涤、干燥和保存，培养基的配制和灭菌，蒸馏水的生产，常规的生理生化分析，以及组织培养中常用的化学试剂、玻璃器皿的存放。

②所需仪器设备：普通天平（1/10）。分析天平（1/10000）、冰箱、高压蒸汽灭菌锅、蒸馏水制造装置、干燥箱或烘箱、酸度计（或PH 试纸5.0-7.0）、微波炉或电炉、药品柜及培养容器、分注器等。（2）无菌操作室①作用:主要进行植物材料的表面灭菌、接种及培养物的继代转接等。②所需仪器设备：超净工作台、周转小推车、紫外灯、（显微镜、显微摄影装置）、酒精灯、镊子剪刀类、细菌过滤器。（3）培养室①作用:对接种后的材料进行培养，使其生长、分化的场所。②所需仪器设备：为了满足培养材料生长、繁殖所需的温度、光照、湿度和通风条件，培养室必须有培养架日光灯、电炉或空调、自动定时器以及增湿机或去湿机、震荡培养机等。

（4）温室①作用:栽培提供组培取材用的材料，或作为试管苗炼苗、移栽管理的场所。②所需仪器设备：喷雾、灌溉装置（灌输、增加空气湿度等），遮阴网（进行遮光处理），移植床等设施。

2.若对某种药用植物进行组培时选材需考虑那些因素?

外植体的选择

（1)取材部位部位不同，培养的难易程度不同，有的部位来源困难，

有的部位容易变异，因此，选材时既要考虑培养成苗的难易程度，又要考虑材料来源是否有保障，同时兼顾遗传稳定性。一般幼嫩的茎、叶为最理想的。

（2)取材季节在取材季节上，应尽量选择旺盛生长的季节取材，因旺盛生长时期的材料内源激素含量较高，再分化比较容易。

（3)材料的老嫩在外植体的选择上应尽量选择未分化或分化程度较轻的组织作为外植体。年幼的组织比年老的组织好培养，因而茎尖和嫩梢是很好的外植体材料。

（4)材料的大小材料越少，带毒越少，但不易成活。

3.污染是组培中经常发生的，而引起污染的污染源主要有哪些？其表现特征为？预防措施为？

污染源主要有：细菌和真菌

细菌性污染：主要表现：在培养基某一位置或培养材料周围出现黏液状物或浑浊的水迹状痕迹，有时呈现发酵状泡沫。一般在接种1~3d 后即可发现。

真菌性污染：主要表现：培养基污染部位发霉，出现黑、白、黄等不同颜色的霉菌，一般在接种后3~5d或更长时间后才会出现。

预防措施：1.选择植物材料取材时选择带菌少的时期、部位等进行培养。2.严格消毒灭菌

⑴培养基：灭菌时要检查高压蒸汽灭菌的温度、压力、时间和正确使用情况；

⑵接种环境：是否对接种室定期用甲醛和高锰酸钾混合液熏蒸，接种

前用紫外灯消毒、保持室内清洁、干燥和密闭等；

⑶接种用具：接种用具是否进行灭菌处理等；

3.规范操作

整个接种操作过程是否规范、熟练等。

4.对接种室进行灭菌的方法主要有哪两种?

（1）定期用甲酸及高锰酸钾熏蒸

(2) 工作前还应用紫外灯照射20分钟及用70%酒精喷雾降尘。

5.组织培养中,一般培养温度设定为?

25士2o C

6.接种的定义为?

接种：把处理好的外植体经无菌操作程序转移到培养基上的过程7.对培养基进行高压蒸汽灭菌时,一般灭菌时间为?

一般灭菌时间：15～20min

8.组培中对外植体消毒的目标是?

既要消灭材料上的病菌，又要不损伤植物材料。

1.碳水化合物在培养基的添加中具有哪些作用?

既作为碳源、能源，也有调节培养基渗透压的作用

2.生长素类物质在培养基中添加具有的作用是?

主要被用于诱导愈伤组织形成、促进细胞脱分化、促进细胞伸长、促进生根。

3.细胞分裂素类物质在培养基中添加具有的作用是?

（1）诱导芽的分化促进侧芽萌发生长。

（2）促进细胞分裂与扩大。

（3）抑制根的分化。

4.培养基中添加的GA3除促进幼苗茎的伸长生长，促进不定胚发育成小植株外,还具有的作用是?

对器官形成有很好的促进作用

1. 以MS培养基为代表的高盐成分培养基的特点为?

无机盐，如钾盐、铵盐及硝酸盐含量较高，微量元素种类齐全，营养丰富，不需要添加更多的有机附加物。

2.以White培养基为代表的低无机盐含量培养基的特点是?

无机盐含量非常低，为MS的1/4左右（主要指大量元素），有机成分也很低，多用于生根培养。

4.用手提式高压蒸汽灭菌锅进行灭菌时,是否需要将冷空气排净? 灭菌时排除冷空气非常重要，因为冷空气使锅内温度不一致，低层的温度不一致，低层温度达不到121oC，导致培养基不能充分灭菌。

5.灭好菌的的培养基需进行灭菌效果检验时，检验方法为？

检验方法：置于培养室中2—3天，若没有污染现象，说明灭菌的培养基可靠，可以使用。

1.药用植物离体培养中通过器官发生再生植株的方式？

⑴先分化芽，待芽伸长后在其幼茎基部长根，形成完整的小植株。

⑵先分化根，再在根上产生不定芽而形成完整植株。

⑶在愈伤组织的不同部位分别形成芽和根，然后二者的维管组织互相连接进而成为一个完整的植株。