血清中尿酸和尿素含量测定的超高效液相色谱–单四级杆质谱法国际比对

化学分析计量

CHEMICAL ANALYSIS AND METERAGE

第26卷，第4期2017年7月

V ol. 26，No. 4

July 2017

85

doi ：10.3969／j.issn.1008–6145.2017.03.022

血清中尿酸和尿素含量测定的超高效液相

色谱–单四级杆质谱法国际比对*

石莲花，金有训，何海红，全灿，徐蓓，李红梅

(中国计量科学研究院，北京　100029)

摘要　基于单四极杆质谱建立了血清中尿酸、尿素含量准确测定的同位素稀释超高效液相色谱–质谱方法，并以该方法参加了国际物质量咨询委员会(CCQM)组织的“血清中尿酸尿素含量测定”的K 、P 国际比对。血清样品用乙腈除去蛋白质，分别采用C 18反相柱和电喷雾(ESI)负离子模式检测尿酸、CN 正相柱和ESI 正离子模式检测尿素，同位素稀释的单点校准法进行定量，用3种标准物质(GBW 09157，GBW 09169，NIST SRM 909c)进行方法验证，测量比对血清样品(Ⅰ，Ⅱ)获得国际等效一致性。该方法操作简单、

快速准确，适用于血清中尿酸尿素的定量分析。关键词　单四级杆质谱；同位素稀释液相色谱–质谱法；尿酸；尿素；血清；国际比对中图分类号：O657.7 文献标识码：A 文章编号：1008–6145(2017)03–0085–04

Determination of Uric Acid and Urea in Serum by Ultra Performance Liquid

Chromatography–Single Quadrupole Mass Spectrometry for International Comparison

Shi Lianhua, JinYouxun, He Haihong, Quan Can, Xu Bei, Li Hongmei

(National Institute of Metrology, Beijing 100029, China)

Abstract The method to determine uric acid and urea in serum was established by single quadrupole–based isotope dilution ultra performance liquid chromatography–mass spectrometer, which was used for CCQM–K and P international comparison. Acetonitrile was added in the sample for protein precipitation, a C 18 reversed-phase column and electrospray ionization (ESI) negative ion mode was used to determine uric acid, and CN normal-phase column and ESI positive ion mode were used to determine urea, and a single point calibration method for quantitative isotope dilution. This method was veri fied with GBW 09157, GBW 09169 and NIST SRM 909c certi fied reference materials, and serum samples (Ⅰ，Ⅱ) were measured to obtain international equivalent consistency. The method is simple in operation, rapid and accurate, it is suitable for quantitative analysis of urea in serum uric acid.

Keywords single quadrupole mass spectrometry; isotope dilution high performance liquid chromatography–mass spectrometry; uric acid; urea; serum; international comparison

血清尿酸、尿素是医学临床检查肾功能的重要指标［1］。尿酸是嘌呤代谢物的最终产物，其在血清中的浓度若超过正常值则会引起痛风、肾结石、冠心病等疾病［2–4］；尿素是蛋白质代谢产物，是蛋白质代谢与尿毒症临床诊断的重要指标之一［5］。因此血清尿酸、尿素的准确定量对临床诊断及治疗具有重要意义。

目前血清尿酸、尿素的测定方法［6–8］中，质谱技术因具有快速、准确、灵敏度高等优点而得以广泛应用，其中同位素稀释液相色谱–串联质谱联用(LC–

IDMS ／MS)［9–12］ 、气相色谱–质谱(GC–ID ／ MS)［13–15］

技术，是国际检验医学溯源联合委员会(JCTLM)认可的参考测量方法。近年来，质谱技术发展迅速，一

级和二级质谱性能进一步提升，分辨率和灵敏度、特

异性都有了显著提高。本研究结合同位素稀释技术，建立了操作简便、特异性强、灵敏度高的液相色谱–单四级杆质谱(LC–IDMS)法，可代替前处理繁琐的气相色谱–质谱法(GC–MS)和易被高浓度待测物污染的液相色谱–串联质谱法(LC–MS ／MS)。用此方法参加国际物质量咨询委员会组织的K ，P 国际比对，使用中国计量科学研究院的纯物质标准物质和血清基体标准物质进行了校准和方法验证，使

*国家科技基础专项(2011FY130100)；国家重点研发计划项目(2016YFD0500800)；中国计量科学研究院比对专项(03-AJLSF15)

联系人：石莲花；E-mail: shilh@ 收稿日期：2017–04–01