动物细胞融合与单克隆抗体课件(用)
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5. 第二次筛选：在“多孔培养板上”培养杂交瘤细胞系列 ，每 孔只放一个杂交瘤细胞。“克隆化培养”每个杂交瘤细胞，并
进行“单一抗体检测”，“检测阳性”的孔内即是所需要的杂
交瘤细胞。 6. 选择所需要的杂交瘤克隆细胞群，体外培养或注射到小鼠腹腔 内增殖。
单抗的制备过程要点：
下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤 风杆菌的实验方案 A 1、该实验方案的目的是__________ 制备单克隆抗体
原
理
细胞膜的流动性 用胰蛋白酶 使细胞分散 物理、化学、 生物方法 主要用于制备 单克隆抗体
融合前处理
诱 导方法
用
途
二、单克隆抗体
什么是单克隆抗体
单： 单个细胞？ 克隆： 无性繁殖
抗体： 抗原 ————
特异性结合
抗体
单克隆抗体
？
1. 2 .
抗体是由何种细胞产生的？ 抗体是如何产生的？
单克隆抗体
提取单克隆抗体
单克隆抗体
思考：
细胞融合后培养液中有几种细胞？ B BB B瘤 瘤瘤 瘤
筛选杂种细胞
已知细胞合成DNA有D和S两条途径，其中 D途径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞中有这 两条DNA合成途径，但一般不分裂增殖。鼠骨 髓瘤细胞中尽管没有S途径，但能不断分裂增 殖，将这两种细胞在试管中混合，加PEG促融， 获得杂种细胞。
3、传统制备抗体的方法是？
抗原
刺激
动物体内
浆细胞 抗体不纯
抗体
筛选单一 浆细胞
不能增殖 产生大量 抗体
4、传统制备抗体的缺点是？
产量少、纯度低、特异性差
单克隆抗体
问题讨论
如何获得化学性质单一、特异性强的抗体？
提示： 1 . 什么样的细胞可以产生抗体？
2 . 什么样的细胞可以无限增殖？
单克隆抗体
设计方案：
单克隆抗体
思考：
1. 小鼠骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合？ 细胞的同源性越近，融合形成的杂种细 胞越易成活 2. 制备过程中应用哪些细胞工程技术手段？ 细胞融合技术、细胞培养技术
单克隆抗体
单克隆抗体的应用
① 在基础理论研究中具有重要意义 ② 在疾病诊断、治疗和预防方面，具有 特异性强、灵敏度高等优越性。 ③ 生物导弹（作为载体，运载抗癌药物， 形成“生物导弹”治疗肿瘤）
一个B淋巴细胞:只分泌一种特异性抗体 小鼠骨髓瘤细胞:能无限增殖
杂交瘤细胞
特点
既能无限增值又能产生特异性抗体
经免疫的小鼠
提取
B淋巴细胞
小鼠骨髓瘤细胞
灭活的病毒等手段
杂交 细胞
用特定的选 择性培养基
第一次筛选
杂交瘤细胞 第二次筛选 能产生特定抗体、培养条件 下能无限增殖的杂交瘤细胞
注射到小鼠腹腔
体外培养
一、动物细胞融合
1.概念：
动物细胞融合（cell fusion）也称细胞杂 交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细 胞的过程。
融合和形成的具有原来两个或多个细胞遗传 物质的单核细胞，称为杂交细胞。
2、原理： 细胞膜的流动性
3、动物Fra Baidu bibliotek胞融合过程
为什么灭活的病 毒能作诱导剂？
灭活丧失感染性
保留融合活性
1.
动物特异性免疫
2.
3. 4.
分离B淋巴细胞（B）；找到骨髓瘤细胞（G）。注意B淋巴细
胞是一个系列。（B1,B2,B3,---Bn） 细胞融合——三种融合方式:（BB;BG;GG） 第一次筛选：在“选择培养基培养”上培养筛选杂交瘤细胞 （只有BG杂交瘤细胞存活。但BG杂交瘤细胞也是一个系列：
如B1G,B2G---BnG。而BB,GG在此培养基上不能存活。）
二.动物细胞融合
诱导融合的方法
物理法： 电激、离心、振动
化学法： 聚乙二醇（PEG)
生物法： 灭活的病毒
4.意义： 突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交 （种间、属间、科间、动植物之间）成为 可能。
5.应用：
最重要的用途是制备单克隆抗体
总结：比较植物体细胞杂交和动物细胞融合
比较项目 植物体细胞杂交 细胞膜的流动性、 植物细胞的全能性 用纤维素酶、 果胶酶去壁 物理、化学方法 获得部分 或完整植株 动物细胞融合
有梦想，才会有创造！
生物种间杂交想像图
已成功的动物细胞融合实例有很多，如人—小鼠、人—兔、 人—鸡、鼠—兔、鸡—鼠等上百种融合细胞。甚至已成功完成了酵 母菌—鸡 、人—胡萝卜 等细胞的融合。 想了解更多信息，可通过网络、电视、杂志等途径关注细胞融合和 单克隆抗体的最新信息。
一、动物细胞融合
请同学们阅读课本P52动物融合
2、A是从小鼠的脾脏中取得 抗体 _______, B 细胞 该细胞能够产生______ B 骨髓瘤细胞
杂交瘤细胞
C
3、图中B为细胞融合 ________过程，常用 灭活病毒 _________作为诱导剂，该细胞继承 足够数量的细胞群 双亲细胞 的遗传特性，既能 ___________ 分泌抗体 无限增殖 。 __________,又能___________ 体外培养 注射到 4、C过程指细胞培养，该过程包括 小鼠腹腔 原代 培养和_____ 传代 培养两个阶段。 _____
进行“单一抗体检测”，“检测阳性”的孔内即是所需要的杂
交瘤细胞。 6. 选择所需要的杂交瘤克隆细胞群，体外培养或注射到小鼠腹腔 内增殖。
单抗的制备过程要点：
下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤 风杆菌的实验方案 A 1、该实验方案的目的是__________ 制备单克隆抗体
原
理
细胞膜的流动性 用胰蛋白酶 使细胞分散 物理、化学、 生物方法 主要用于制备 单克隆抗体
融合前处理
诱 导方法
用
途
二、单克隆抗体
什么是单克隆抗体
单： 单个细胞？ 克隆： 无性繁殖
抗体： 抗原 ————
特异性结合
抗体
单克隆抗体
？
1. 2 .
抗体是由何种细胞产生的？ 抗体是如何产生的？
单克隆抗体
提取单克隆抗体
单克隆抗体
思考：
细胞融合后培养液中有几种细胞？ B BB B瘤 瘤瘤 瘤
筛选杂种细胞
已知细胞合成DNA有D和S两条途径，其中 D途径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞中有这 两条DNA合成途径，但一般不分裂增殖。鼠骨 髓瘤细胞中尽管没有S途径，但能不断分裂增 殖，将这两种细胞在试管中混合，加PEG促融， 获得杂种细胞。
3、传统制备抗体的方法是？
抗原
刺激
动物体内
浆细胞 抗体不纯
抗体
筛选单一 浆细胞
不能增殖 产生大量 抗体
4、传统制备抗体的缺点是？
产量少、纯度低、特异性差
单克隆抗体
问题讨论
如何获得化学性质单一、特异性强的抗体？
提示： 1 . 什么样的细胞可以产生抗体？
2 . 什么样的细胞可以无限增殖？
单克隆抗体
设计方案：
单克隆抗体
思考：
1. 小鼠骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合？ 细胞的同源性越近，融合形成的杂种细 胞越易成活 2. 制备过程中应用哪些细胞工程技术手段？ 细胞融合技术、细胞培养技术
单克隆抗体
单克隆抗体的应用
① 在基础理论研究中具有重要意义 ② 在疾病诊断、治疗和预防方面，具有 特异性强、灵敏度高等优越性。 ③ 生物导弹（作为载体，运载抗癌药物， 形成“生物导弹”治疗肿瘤）
一个B淋巴细胞:只分泌一种特异性抗体 小鼠骨髓瘤细胞:能无限增殖
杂交瘤细胞
特点
既能无限增值又能产生特异性抗体
经免疫的小鼠
提取
B淋巴细胞
小鼠骨髓瘤细胞
灭活的病毒等手段
杂交 细胞
用特定的选 择性培养基
第一次筛选
杂交瘤细胞 第二次筛选 能产生特定抗体、培养条件 下能无限增殖的杂交瘤细胞
注射到小鼠腹腔
体外培养
一、动物细胞融合
1.概念：
动物细胞融合（cell fusion）也称细胞杂 交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细 胞的过程。
融合和形成的具有原来两个或多个细胞遗传 物质的单核细胞，称为杂交细胞。
2、原理： 细胞膜的流动性
3、动物Fra Baidu bibliotek胞融合过程
为什么灭活的病 毒能作诱导剂？
灭活丧失感染性
保留融合活性
1.
动物特异性免疫
2.
3. 4.
分离B淋巴细胞（B）；找到骨髓瘤细胞（G）。注意B淋巴细
胞是一个系列。（B1,B2,B3,---Bn） 细胞融合——三种融合方式:（BB;BG;GG） 第一次筛选：在“选择培养基培养”上培养筛选杂交瘤细胞 （只有BG杂交瘤细胞存活。但BG杂交瘤细胞也是一个系列：
如B1G,B2G---BnG。而BB,GG在此培养基上不能存活。）
二.动物细胞融合
诱导融合的方法
物理法： 电激、离心、振动
化学法： 聚乙二醇（PEG)
生物法： 灭活的病毒
4.意义： 突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交 （种间、属间、科间、动植物之间）成为 可能。
5.应用：
最重要的用途是制备单克隆抗体
总结：比较植物体细胞杂交和动物细胞融合
比较项目 植物体细胞杂交 细胞膜的流动性、 植物细胞的全能性 用纤维素酶、 果胶酶去壁 物理、化学方法 获得部分 或完整植株 动物细胞融合
有梦想，才会有创造！
生物种间杂交想像图
已成功的动物细胞融合实例有很多，如人—小鼠、人—兔、 人—鸡、鼠—兔、鸡—鼠等上百种融合细胞。甚至已成功完成了酵 母菌—鸡 、人—胡萝卜 等细胞的融合。 想了解更多信息，可通过网络、电视、杂志等途径关注细胞融合和 单克隆抗体的最新信息。
一、动物细胞融合
请同学们阅读课本P52动物融合
2、A是从小鼠的脾脏中取得 抗体 _______, B 细胞 该细胞能够产生______ B 骨髓瘤细胞
杂交瘤细胞
C
3、图中B为细胞融合 ________过程，常用 灭活病毒 _________作为诱导剂，该细胞继承 足够数量的细胞群 双亲细胞 的遗传特性，既能 ___________ 分泌抗体 无限增殖 。 __________,又能___________ 体外培养 注射到 4、C过程指细胞培养，该过程包括 小鼠腹腔 原代 培养和_____ 传代 培养两个阶段。 _____