脑缺血模型制备

脑缺血模型制备方法

一、以往学生实验方案：

1.4方法

1.4.1造模：制备双血管阻断大鼠全脑缺血实验模型：按10%水合氯醛0.35ml/g的量麻醉大鼠，按仰卧位固定大鼠；将需要暴露切口附近的毛剪去；做颈部正中切口，其下组织有胸骨舌骨肌、胸锁乳突肌；在胸骨舌骨肌、胸锁乳突肌与下颌骨组成的三角里找颈总动脉，用手术线从下穿过颈总动脉结扎；在手术区撒上磺胺粉以消毒，缝合伤口，禁食两天，给予糖水；一周后再结扎另一侧颈总动脉。

实验动物苏醒后1h，参考Zealonga 等[1]的报道，进行神经功能缺损体征评分:

0 级,无功能障碍;

1 级,不能伸展对侧前肢;

2 级,向对侧旋转;

3 级,向对侧倾倒;

4 级,无自主活动伴意识抑制;

5 级,死亡.

1-4分为模型成功。

1.4.2实验动物给药

结扎一侧颈总动脉后，将“大椎”、“气海”、“命门”穴（参照新世纪全国高等中医药院校规划教材《实验针灸学》常用实验动物针灸穴位）部位用8%硫化钠脱毛（1cm×1cm），随即将巴布剂敷贴以上穴位并固定，1次6h，每天1次，连续治疗7天，并连续给药直至大鼠处死前24h。针刺组治疗时间同穴贴组，采用电针，每次留针10min，缺血组及正常组相应时段给予捉抓。

1.4.3大鼠脑组织灌注实验

脑缺血模型成功后分别于6h、12h、24h后进行脑组织灌注。

实验器材：粗剪刀，输液管，多聚甲醛，止血钳，输液针，输液瓶2个，生理盐水等

实验步骤：

a、麻醉大鼠

b、固定大鼠

c、打开胸廓在腹部剪一切口，沿腹部中线剪至胸骨剑突，再沿肋骨向两边剪至适当位置向上剪，翻起胸廓剪断。

d、分离出主动脉用镊子打开心包，分离出主动脉（将心脏向左上方提起可见主动脉），用线穿过以备结扎灌注针。

e、用组织钳固定心脏，将灌注针插入左心室并送至主动脉内，夹闭组织钳，使之不能退出，打开调节阀，灌注生理盐水，灌注时的灌流量约20 ml/分钟。同时，剪开右心耳，使血液排出。观察肝脏逐渐变为白色为止。

f、待生理盐水灌注完后，换固定液继续灌注。固定液进入大鼠血管后，逐渐出现四肢抽动，表明灌注液进入大鼠大脑。

g、待抽动完全停止，全身组织器官变硬后，开颅取出脑组织，将其浸泡在4%的多聚甲醛里。

二、四血管阻断法制备脑缺血再灌注模型：推荐使用这种方法造模

采用改良的Pulsinelli四血管闭塞法。成年Wistar 大鼠（200±20g）禁食过夜以恒定血糖水平，缺血前一天烧灼阻断双侧椎动脉，第二天夹闭双侧颈总

动脉15分钟后松开，恢复脑血供，缺血期间用取暖器维持大鼠肛温在37－

37.5℃。术后在约20℃的空调环境下单笼饲养，自由进食、进水。

三、电凝大脑中动脉制备局灶性脑缺血模型（以往我们做过）

1.4.1造模：采用美国南卡罗来纳医学院神经病理科S．T Chen等[1]的局灶性脑缺血模型:

①结扎颈总动脉（CCA）：用10％水合氯醛腹腔麻醉（4ml/kg·b.w.）。颈中线做一1.5cm 的切口，分离两侧CCA，右侧CCA结扎。左侧用一无创小动脉夹夹闭1小时后开放。②阻断大脑中动脉（MCA）：用立体定位仪固定大鼠，在右眼与右耳连线上做一1.5cm的切口，分离颞肌，暴露颞骨，借助手术显微镜，用牙科钻在鳞状骨与颧骨交界处向嘴侧1mm所对的鳞骨上，钻开0.5×0.5cm的骨窗。用11号手术刀将硬膜小心切开，暴露大脑中动脉主干，用双极电凝刀将其阻断，使颞肌复位，缝合伤口，模拟临床缺血性脑中风急性阶段。模型成功的标志为实验大鼠苏醒后出现同侧Horner征及对侧以前肢为重的偏瘫。

2.2 TTC染色正常脑组织染成红色，梗塞灶呈白色。梗塞区域主要为大脑皮质，部分可波及海马区域。梗死体积为(115.07±52.95)mm3，约占大鼠脑组织体积的(10.82±2.91)%左右，梗死灶体积与电凝的大脑中动脉分枝支配的范围相吻合，比较接近临床缺血性中风患者脑梗塞比例。