PAGE银染方法

TA钠盐或者1g甘氨酸加去离子水到终体积250ml。 浸泡凝胶10min。 9．保存 1%冰醋酸，4℃。 1．银染主要出现在胶的表面，用薄胶（0.5-0.7
5mm）可以提高灵敏度。 2．固定时间较长，则加一步水洗30min，以免胶 太脆而破碎。 3．最好多配制一份显色液，第一次显色到溶液 变混浊时换一份显色液，显色
由于其成本低，所用试剂安全、快速、灵敏度高 而被广泛应用。银染的原理是银离子在碱性pH环 境下被还原成金属银，沉淀在蛋白质的表面上而 显色。由于银染的灵敏度很高，可染
出凝胶上低于1ng/蛋白质点，故广泛的用在2D凝 胶分析上，及极低蛋白含量测定的垂直凝胶中。 这里介绍的是一种实验室常用的银染方法，主要 是用于垂直凝胶电泳中低丰度蛋
．室温操作，温度的波动往往会干扰银染的效果， 恒温水浴可以解决这个问题。 14．当蛋白质中含有核酸或金属时，银染则不会 奏效。改变固定剂和染色之前对胶进行漂洗可以
改进染色效果。 15．据称戊二醛预处理可以使各种蛋白质的染色 提高40倍。在染色效果不佳的情况下可以考虑。 16．银染应尽快照相，随着时间延长，蛋白条带 会变浅
，而背景会加深。 17．不同蛋白质对银染反应不一样，尤其是碱性 蛋白染色效果差。因此不宜用银染测定不同蛋白 的比例。
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致在60KDa或67KDa处出现两条水平线。减少巯 基乙醇的用量即可避免。。 8．染色、水洗等过程中，缓慢的振荡是必要的， 一般选择40-60rpm。没有设备，用
手推轻晃亦可。 9．凝胶表面的裂纹多是由于压力、手印及表面 干燥所致，所以全程操作中都应带手套。 10．凝胶背景呈均一的黑色多是水中的杂质引起 的，所以溶液的配
去离子水浸泡。3x20sec。注意把握时间，水洗 时间长显色速度慢，点的颜色偏黄色。水洗不充 分，背景较深。 7．显色 6.25gNa2CO3、50ul37
%甲醛（在使用前加入）加去离子水到终体积 250ml。2-15min，显色时间视凝胶大小、厚薄 情况而定。看到各条带，即可将凝胶捞出。 8．终止 3.65gED
银染是一种重要的PAGE染色方法，由于其成本 低，所用试剂安全、快速、灵敏度高而被广泛应 用。银染的原理是银离子在碱性pH环境下被还原 成金属银，沉淀在蛋白质的表面上
而显色。由于银染的灵敏度很高，可染出胶上低 于1ng/蛋白质点，故广泛的用在2D凝胶分析上， 及极低蛋白含量测定的垂直凝胶中。 银染是一种重要的PAGE染色方法，
制应使用电导率小于1μS的去离子水。丙烯酰胺 中的杂质也会导致呈现较深的背景。 11．如果染色后有呈灰尘或烟雾状灰色或棕色的 沉淀出现在凝胶表面，可能是在几步漂洗
过程中洗得不够彻底，或是染色过程时温度太低。 12．在最初甲醇洗脱时就应该先除去甘油、尿素、 甘氨酸、TritonX-100和两00ml乙醇，25ml冰醋酸加去离子水到 250ml(视胶板大小情况，适当等比例配制，增加 固定液量，以下相同。)，使其终浓度达到4
0%乙醇，10%冰醋酸。将凝胶板浸入固定液中， 固定30min以上。 2.水洗 去离子水浸泡。3x10min。 2.致敏 量取75ml乙醇，17g乙酸钠或
28.2g三水乙酸钠，0.5g硫代硫酸钠加去离子水 到体积250ml。将固定后的凝胶板拿起，浸入致 敏液中，浸泡30min。 4.水洗 去离子水浸泡。3x10m
in。 5．银染 0.625gAgNO3、100ul37%甲醛（在使用前加入） 加去离子水到终体积250ml。将胶板浸入银染液 中，浸泡30min。 6．水洗
到点清晰。 4．对于考马斯亮蓝染色的胶，可用甲醇将胶漂 洗后，继续进行银染。乙酸会干扰银染，因此要 确保将凝胶中的乙酸彻底洗净。如果凝胶被过度 银染，可用Rapid
Fix脱色，并用考马斯亮蓝二次染色。 5．银染液和显色液需要预冷。 6．所用器皿要很洁净，不用手直接接触，以免 杂蛋白污染。 7．SDS凝胶中的巯基乙醇会导
碘酸钾
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