丹参有效成分的分离与提取

丹参有效成分的分离与提取

【关键词】丹参；隐丹参酮；丹参酮ⅡA

丹参为唇形科多年生草本植物,丹参的干燥根及根茎，主产于四川、安徽、江苏及河南等省。春秋两季采挖，除去茎叶泥沙，须根晒干。其根茎短粗，顶端有残留茎基，根数条，长圆柱形，略弯曲，有的分枝并有须状细根，长10-20 cm，直径0.3-1 cm，表面棕红色或暗棕红色，粗糙，具纵皱纹，老根外皮疏松，多显紫棕色，常呈鳞片状脱质硬而脆，断面疏松，有裂隙或略平整而致密，皮部棕红色，本部灰黄色或紫色，导管束黄白色，呈放射状排列，气微，味微苦涩。丹参有效成分主要有脂溶性非醌色素类化合物，如丹参酮ⅡA、丹参酮ⅡB、隐丹参酮及其异构体。水溶性酚酸类成分如原儿茶醛、丹参素。其中，隐丹参酮是抗菌的有效成分。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂丹参粉末，乙醇，苯，氧化铝，丙酮。

1.2 实验方法取丹参粉末，用乙醇热煮，煮沸15-20 min，用苯洗脱过滤，洗脱液经氧铝(Ⅲ级)层析，再用苯洗脱，样品呈紫色样段，橙红色样段，暗红色样段，取橙红色样段经过苯洗脱，再用丙酮

洗脱，呈板状结晶，为丹参酸甲脂，呈橙红色结晶，为隐丹参酮。将暗红色样段，氧化铝棒置容器中，经苯洗脱，再用丙酮洗脱，呈暗红色结晶，为丹参酮ⅡA。隐丹参酮与丹参酮ⅡA为脂溶性成分，样品的甲醇提取液，回收溶剂至干，残渣溶于氯仿期滤，滤液加水振摇静止，取氯仿层浓缩至干，加氯仿显色。原儿茶醛、丹参素为水溶性成分，用荧光法鉴别。取本品粉末，置白瓷板上，于紫外灯(365 mm)下检视，呈灰色荧光，即原儿茶醛。薄层色谱法:样品水提液，浓缩后，以80%醇沉，用盐酸调值，pH 2，乙醚萃取，醚提取液挥去乙醚，用乙醇溶液，点于硅胶G(或H)—羧甲基纤维素钠薄层板上，先以苯—乙酸—乙甲酸(4∶4∶1)展开1 cm取出挥溶剂再以苯—乙酸乙酯—甲酸(80∶50∶8)展开，以三氯化铁—铁氰化钾(1∶1)试剂显色。

1.2.1 指纹图谱参照高效液相色谱法(《中国药典》2000版1部VID)测定。系统适用性试验十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，流速0.5 mL/min，检测波长为281 nm，理论板数按原儿茶醛峰计算，应不低于5000，见表1、表2。表1 二元梯度洗脱参数表2 特征峰相对保留时间表3 特征峰标准相对峰面积

1.2.2 对照品溶液的制备取原儿茶醛对照品适量，精密称定，加甲醇制成相当于每2 mL含原儿茶醛0.01 mg的溶液，摇匀，即得。

1.2.3 供试品溶液的制备取含量测定项下供试品溶液。

1.2.4 测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10 mL，注入液相色谱仪，根据色谱峰面积，按照指纹图谱技术要求测定，即得。

1.2.5 确定10个特征峰 1号峰为丹参，2号峰为原儿茶醛(参照物S)，10号峰为丹酚酸B。指纹图谱见图1。

图1 丹参HPLC指纹图谱

1.2.6 丹参素的鉴别

1.2.6.1 取本品粉末5 g，加水50 mL，煎煮15-20 min，放冷，滤过，滤液置水浴上浓缩至粘稠状，放冷后，加乙醇3-5 mL使溶解，滤过，取滤液数滴，点于滤纸上。午后，置紫外线灯(365 nm)下观察，显亮蓝灰色荧光，将滤红悬挂在浓氨溶液瓶中(不接触液面)，20 min 后取出，置紫外灯(365 nm)下观察，显亮蓝灰色荧光。

1.2.6.2 取前项下的滤液0.5 mL，加三氯化铁液1-2滴，显污绿色。

1.2.6.3 取本品粉末1 g加乙醇0.5 mL，置具塞试管中，振摇，

放置1 h，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯1 mL溶解作为供试品溶液。另取，丹参对照药材1 g，同法制成对照液药材溶液再取丹参酮ⅡA对照品加醋酸乙酯制成每1 mL含2 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2000年版的1部附录VIB)试验，吸取上述3种溶液各5 mL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯—醋酸乙酯(19∶1)为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同的暗红色斑点。

1.2.7 原儿茶醛的鉴别

1.2.7.1 样品的水提液浓缩用盐酸调至pH 2，乙醚萃取，醚提液挥去乙醚，用乙醇溶解，点于硅胶G(或H)CMC板上，以苯乙酸乙酯甲醇(80：50：8)展开。以氯化铁铁氰化钾(1∶1)试剂显色。

1.2.7.2 样品前项下的制备点样液。点于硅胶H CMC板上，以(Ⅰ)苯乙酸乙酯甲酸(80∶70∶8)或(Ⅱ)氯仿丙酮甲醇甲酸(70∶20∶15∶5)展开，紫外灯下检视后喷三氯化铁、铁氰化钾(1∶1)试剂，再将薄板置0.1MHCL中泡数分钟，流水冲去酸液显色。 2 实验结果

2.1 化学结构见图2。

图2

参照高效液相色谱法(《中国药典》2000版1部VID)测定。

2.2 系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为固定相；甲醇水醋酸(8∶91∶1)为流动相；检测波表为281 nm。理论板数按丹参素峰计算，应低于2000。

2.3 对照品溶液的制备精密称定丹参素钠对照品适量，加甲醇制成相当于每1 mL含丹参0.15 mg的溶液(1 mL丹参素钠相当于0.900 mg丹参素)，摇匀，即得。

2.4 供试品溶液的制备精称丹参药材5.0 g加入30 mL，水浴回流2 h，放冷，过滤精取滤液2 mL，甲醇定容25 mL，摇匀，即得。

2.5 测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 mL，注入液相色谱仪，根据色谱图的峰面积，以外标法进行计算，即得。

本品含丹参素(C9H1005)不得少于1%；按《中国药典》2000版丹参中丹参酮ⅡA含量测定法测定，丹参酮ⅡA(C9H1803)不得少于0.20%。

3 讨论

中药的提取应该严格按照具体药品品种的提取工艺而进行。得到的成品必须按标准进行检验，符合持量标准的才能用于药品制剂的生产。

丹参的分离提取要注意原料的选择，原料要优质，测量光密度选择原料较可靠。丹参的得取生产现场内选题保证部门应派现场质量管理员进行现场控制。做好生产现场监控记录，转序、药品检验、取样、异常情况处置及现场物品定置、定位等的管理，从而保证最终产品检验合格，保证产品质量和稳定性。

本实验中，从中药丹参中提取得到多种菲醌衍生物，丹参醌结构已具有菲醌母核，但生源都属于二萜类，丹参中有效成分之间溶解各不相同，故提取方法也多种多样。一般选用甲醇、乙醇作为提取溶剂，把不同的有效成分提取出来，浓缩后再进行提取分离。它的质谱特征是分子、离子峰为基峰；游离醌依次脱去2个分子CO，得到M CO 及M2CO的强峰以及它们的双电荷峰，见图3。

图3