白蜡虫ws基因RNAi载体构建及原核表达dsRNA

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摘要:[目的]构建白蜡虫(Ericeruspela)蜡酯合酶(waxsynthase,WS)基因干扰载体并建立其体外 dsRNA(double
strandedRNA,dsRNA)原核表达体系,低成本大量制备白蜡虫 ws基因的 dsRNA。[方法]克隆白蜡虫蜡酯合酶基因
ws片段,连入 L4440载体,将重组质粒转入大肠杆菌 HT115感受态细胞,经 IPTG诱导获得与目的片段相对应的
生物蜡酯普遍存在于自然界生物中,蜡酯对生 物生命活动具有储能、保护等诸多功能,在生物生命 活动中扮演的角色极为重要[1-3]。昆虫和植物体表 的蜡酯层能对抗有害细菌及真菌入侵,同时还能减 少体表水分蒸发、疏水御潮、防止紫外辐射、反射阳
光辐射、躲 避 天 敌 袭 击[4-7]。 有 些 昆 虫 则 特 化 了 泌 蜡的性状,比如介壳虫,这一类昆虫体表覆盖大量蜡 泌物形成的介壳[8],由于蜡酯的保护,常规方法很难 达到防治效果,喷洒、涂抹等机械方法和化学治理方 法也较为困难不容易操作,且污染环境、耗资大、大
Abstract:[Objective]ThisstudyaimsatconstructtheinterferencevectorofEriceruspelawaxsynthasegeneand prokaryoticexpressionsysteminvitro,andpreparealargenumberofdoublestrandedRNA(dsRNA)ofE.pelaws geneatlowcost.[Method]TheclonedE.pelawsgenefragmentwasinsertedintoL4440vectortoconstructE. pelawsL4440geneinterferencevector.TherecombinantplasmidwastransformedintoHT115competentcell,then inducedbyIPTGtogetthedsRNAcorrespondingtotargetfragment.[Result]TheinterferencevectorofEricerus pelawsgenewassuccessfullyconstructedinvitro,andthedsRNAcanalsobeexpressedbyHT115competentcell withtransformedrecombinantplasmidinducedbyIPTG.TheaverageproductionofdsRNAwas1705ng·mL-1. [Conclusion]TheexpressionofthedsRNAofE.pelawsgenebyprokaryoticexpressionsystemmaylayfoundation forusingRNAitechnologytostudythefunctionandmechanism ofE.pelawsgene. Keywords:Ericeruspela;WS;L4440;prokaryoticexpression;dsRNA
第 4期
王雪庆,等:白蜡虫 ws基因 RNAi载体构建及原核表达 dsRNA
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量杀伤天敌,介壳虫已成为农林果树危害严重的害 虫。如果对蜡酯进行破坏,则易达到介壳虫防治的 效果。
不同物 种 的 蜡 酯 合 酶 (waxsynthase,WS)研 究 显示,在 生 物 蜡 酯 合 成 过 程 中 WS具 有 关 键 作 用[9-12]。笔者以我国历史悠久的特产 资 源 昆 虫— 白蜡虫(一种 介 壳 虫)为 研 究 对 象,鉴 定 出 白 蜡 虫 WS,实验表明 WS在白蜡虫泌蜡中发挥极其重要的 作用[13]。近年来,昆虫中对未知基因功能及作用机 理研究主要是利用 dsRNA诱导的 RNAi实现[14],由 此本研究欲探索较低成本获取 dsRNA,以期建立一 种通过原核菌体表达获取大量白蜡虫 ws基因 dsR NA的方法,从而为介壳虫防治提供一定参考。
关键词:白蜡虫;WS;L4440;原核表达;dsRNA
中图分类号:S899.1
文献标识码:A 文章编号:10011498(2018)04007005
ConstructionofRNA InterferenceVectorofEriceruspela(Chavannes) wsGeneandPreparationofdsRNA byProkaryoticExpression
林 业 科 学 研 究 2018,31(4):70 74 ForestResearch DOI:10.13275/j.cnki.lykxyj.2018.04.010
白蜡虫 ws基因 RNAi载体构建及原核表达 dsRNA
百度文库王雪庆,赵遵岭,孙 涛,陈晓鸣,杨 璞
(中国林业科学研究院资源昆虫研究所,国家林业局资源昆虫培育与利用重点实验室,云南 昆明 650224)
WANGXueqing,ZHAOZunling,SUNTao,CHENXiaoming,YANGPu
(ResearchInstituteofResourcesInsects,ChineseAcademyofForestry,KeyLaboratoryofCultivatingandUtilizationofResourcesInsectsof StateForestryAdministration,Kunming 650224,Yunnan,China)
收稿日期:20171025 基金项目:林业公益性行业科研专项 201504302;国家自然科学基金 31572337;中央级科研院所基金 CAFYBB2017ZB005 作者简介:王雪庆(1993—),女,硕士研究生.研究方向:昆虫分子生物学.Email:wangxueqing1018@163.com 通讯作者:杨 璞,研究员,主要从事分子生物学研究.Email:zjuyangpu@aliyun.com
dsRNA。[结果]白蜡虫 ws基因 RNA干扰(RNAinterference,RNAi)载体成功构建,重组质粒转入 HT115感受态细
胞经 IPTG诱导后菌体成功表达 dsRNA,dsRNA的平均获得量 1705ng·mL-1。[结论]该研究通过原核表达白蜡
虫 ws基因的 dsRNA,为后续利用 RNAi实验研究白蜡虫 ws基因功能及作用机理奠定基础。
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