病毒感染的诊断与防治-PowerPointPresen
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第三章 病毒感染的诊断与防治
第一节 病毒感染的诊断
常用的病毒学诊断方法包括： 病毒的分离鉴定 病毒的血清学检查 病毒蛋白和核酸的检测
一、标本的采取与送检
应注意下列原则：
1.对本身带有杂菌 (如咽拭子、粪便) 或易 受污染的标本，要进行病毒分离培养时， 应使用抗生素。
2.因病毒在室温中易失去活性，标本应低温 保存并尽快送检。
三、病毒感染的血清学诊断
原理是用已知病毒抗原来检测病人 血清中有无相应抗体，故须待病人感染 后体内产生抗体时才能检出。
另外，在采取临床标本及病人血清 应注意病程，必须采取患者急性期血清 与恢复期血清 (双份血清) 进行血清学 试验。若第2次血清抗体滴度比第1次高 出4
1.中和试验(neutralizing test,NT test)
3.干扰现象(interference)
某些病毒感染细胞时不出现CPE或其他 易于测出的变化(如HAd)，但能干扰在 其后感染的另一病毒的增殖。如风疹病 毒感染Vero细胞时CPE不明显，但它能 干扰后感染的埃可病毒 (ECHOV) 的增 殖，从而阻抑后者所特有的CPE。
4.细胞代谢的改变
病毒感染细胞的结果可使培养液的pH 值改变，说明细胞的代谢在病毒感染后 发生了变化。这种培养环境的生化改变 也可作为判断病毒增殖的指标。
2.鸡胚培养
鸡胚对多种病毒敏感。一般采用孵化 9～14天的鸡胚，根据病毒种类不同， 将病毒标本 接种于鸡胚的不同部位， 最常用的鸡胚接种部位有：羊膜腔、尿 囊腔、绒毛尿囊膜和卵黄囊等。
3.组织培养法 (tissueculture) 或细胞 培养 (cellculture)法
是将离体活组织块或分散的组织细胞加 以培养的技术总称，为病毒分离鉴定中 的最常用的基本方法。
病毒培养时出现的CPE
2.红细胞吸附 (hemadsorption,HAd)
流感或副流感病毒等感染细胞后，由于细胞 膜上出现了血凝素(haemagglutinin,HA)，具 有吸附脊椎动物 (豚鼠、鸡、猴等) 红细胞的 能力，这一现象称红细胞吸附，常用来测定 具有HA的粘病毒与副粘病毒的增殖。若有相 应的抗血清，则能中和细胞膜上的HA，HAd 不再发生，称红细胞吸附抑制试验。
inhibition test, HI test)
具有HA的病毒能凝集鸡、豚鼠、人等 的红细胞，称血凝现象。这种现象能被 相应抗体抑制，称HI试验。其原理是相 应抗体与病毒结合后，阻抑了病毒表面 的HA与红细胞的结合。本试验简易、 经济，特异性高，常用于粘病毒及乙型 脑炎病毒感染的辅助诊断及流行病学调
有些病毒在宿主细胞内增殖后，在细胞 的一定部位(胞核、胞浆或两者兼有) 出 现一个或数个、圆形或椭圆形、嗜酸性 或嗜碱性的结构，即包涵体。包涵体对 病毒感染的诊断有一定价值。
(二)病毒蛋白抗原检查
用荧光素、放射性同位素、过氧化物酶等标记抗体， 采用免疫学和分子生物学技术，检测标本中的病毒 蛋白抗原，具有敏感、特异、快速等优点。
是病毒在活体内或细胞培养中被特异性抗 体中和而失去感染性的一种试验。
中和抗体(netralizing antibodies,NTAb)是 作用于病毒表面抗原 (衣壳或包膜) 的抗体， 同种不同型病毒间一般无交叉，特异性高，而 且抗体在体内维持时间长。中和抗体阳性不一 定表示正在感染中，也可能因以前有过隐性感 染所致。因此，中和试验适用于人群免疫情况 的调查，在临床诊断上较少使用。
(二) 病毒的数量与感染性测定
1.蚀斑测定
是一种检查和准确滴定病毒感染性的方法。将稀释的 病毒悬液加入单层细胞培养瓶中。病毒吸附后，再覆 盖一层融化的半固体营养琼脂，使病毒在单层细胞培 养中有限扩散。结果是每一个有感染性的病毒在单层 细胞中可产生一个局限性的感染灶。用活性染料 (如 中性红) 染色，则活细胞着色，受病毒感染而破坏的 细胞不着色，形成肉眼可见的蚀斑(plaque)。每个蚀 斑是由一个感染性病毒颗粒形成的，称作蚀斑形成单 位 (plaque forming unit,PFU)。病毒悬液中的感染 性病毒量的滴度可用PFU／ml表示。
2.50%组织细胞感染量 (TCID50)测定法
该方法是测定病毒能使50%的组织培养细胞发 生感染的最小量。一般是将病毒悬液作10倍的 系列稀释，分别接种细胞，经一定时间后观察 CPE、血细胞吸附等指标，以最高稀释度能感 染50%细胞的量为终点。最后用统计方法计算 出50%组织细胞感染量（ 50%tissue culture infectious dose,TCID50)。
2.补体结合试验 (complement
fixation test,CF test)
用已知病毒可溶性(CF)抗原来检测病人 血清中相应(CF)抗体。CF抗原是病毒的 内部抗原，同种异型间常有交叉，故特 异性较中和试验低。但CF抗体出现较早， 消失较快，故CF阳性可作为近期感染的 指标。
3.血凝抑制试验(hemagglutinatia
病毒在培养细胞中增殖的指标
1. 细胞的变化
① 有些病毒在细胞内增殖时可引起特有的细胞病变， 称为细胞病变效应 (CPE)。常见的变化有细胞变圆、 聚集、坏死、溶解或脱落等。
② 有些病毒如麻疹病毒、CMV、RSV等 作用于细胞膜， 可使邻近的细胞相互融合，形成多核巨细胞或称融 合细胞。
③ 有些病毒 (如狂犬病病毒、麻疹病毒等) 可在培养 细胞中形成胞浆或核内的包涵体。
3.血清学诊断标本的采取应在发病初期和病 后2～3w内各取1份血清，以便对比双份 血清抗体效价的动态变化。
二、病毒的分离与鉴定
(一)
1.动物接种 是最原始的病毒培养方法，根据病毒种 类不同，选择敏感动物及适宜接种部位， 如嗜 神经性病毒（狂犬病毒）可接种 于小鼠脑内，痘病毒可接种于家兔角膜 或皮内。
病毒 +鸡RBC = 凝集（血凝试验）
病毒 +特异性抗体 +鸡RBC=不凝集 （ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ凝抑制试验）
四、病毒感染的快速诊断
快速诊断主要是指从含有病毒标本 及感染机体的血清中检测病毒颗粒、 蛋白抗原、IgM抗体和核酸等，往 往在数小时内即可得出结果。
(一) 形态学检查
1.电镜和免疫电镜检查 2.普通光学显微镜检查
第一节 病毒感染的诊断
常用的病毒学诊断方法包括： 病毒的分离鉴定 病毒的血清学检查 病毒蛋白和核酸的检测
一、标本的采取与送检
应注意下列原则：
1.对本身带有杂菌 (如咽拭子、粪便) 或易 受污染的标本，要进行病毒分离培养时， 应使用抗生素。
2.因病毒在室温中易失去活性，标本应低温 保存并尽快送检。
三、病毒感染的血清学诊断
原理是用已知病毒抗原来检测病人 血清中有无相应抗体，故须待病人感染 后体内产生抗体时才能检出。
另外，在采取临床标本及病人血清 应注意病程，必须采取患者急性期血清 与恢复期血清 (双份血清) 进行血清学 试验。若第2次血清抗体滴度比第1次高 出4
1.中和试验(neutralizing test,NT test)
3.干扰现象(interference)
某些病毒感染细胞时不出现CPE或其他 易于测出的变化(如HAd)，但能干扰在 其后感染的另一病毒的增殖。如风疹病 毒感染Vero细胞时CPE不明显，但它能 干扰后感染的埃可病毒 (ECHOV) 的增 殖，从而阻抑后者所特有的CPE。
4.细胞代谢的改变
病毒感染细胞的结果可使培养液的pH 值改变，说明细胞的代谢在病毒感染后 发生了变化。这种培养环境的生化改变 也可作为判断病毒增殖的指标。
2.鸡胚培养
鸡胚对多种病毒敏感。一般采用孵化 9～14天的鸡胚，根据病毒种类不同， 将病毒标本 接种于鸡胚的不同部位， 最常用的鸡胚接种部位有：羊膜腔、尿 囊腔、绒毛尿囊膜和卵黄囊等。
3.组织培养法 (tissueculture) 或细胞 培养 (cellculture)法
是将离体活组织块或分散的组织细胞加 以培养的技术总称，为病毒分离鉴定中 的最常用的基本方法。
病毒培养时出现的CPE
2.红细胞吸附 (hemadsorption,HAd)
流感或副流感病毒等感染细胞后，由于细胞 膜上出现了血凝素(haemagglutinin,HA)，具 有吸附脊椎动物 (豚鼠、鸡、猴等) 红细胞的 能力，这一现象称红细胞吸附，常用来测定 具有HA的粘病毒与副粘病毒的增殖。若有相 应的抗血清，则能中和细胞膜上的HA，HAd 不再发生，称红细胞吸附抑制试验。
inhibition test, HI test)
具有HA的病毒能凝集鸡、豚鼠、人等 的红细胞，称血凝现象。这种现象能被 相应抗体抑制，称HI试验。其原理是相 应抗体与病毒结合后，阻抑了病毒表面 的HA与红细胞的结合。本试验简易、 经济，特异性高，常用于粘病毒及乙型 脑炎病毒感染的辅助诊断及流行病学调
有些病毒在宿主细胞内增殖后，在细胞 的一定部位(胞核、胞浆或两者兼有) 出 现一个或数个、圆形或椭圆形、嗜酸性 或嗜碱性的结构，即包涵体。包涵体对 病毒感染的诊断有一定价值。
(二)病毒蛋白抗原检查
用荧光素、放射性同位素、过氧化物酶等标记抗体， 采用免疫学和分子生物学技术，检测标本中的病毒 蛋白抗原，具有敏感、特异、快速等优点。
是病毒在活体内或细胞培养中被特异性抗 体中和而失去感染性的一种试验。
中和抗体(netralizing antibodies,NTAb)是 作用于病毒表面抗原 (衣壳或包膜) 的抗体， 同种不同型病毒间一般无交叉，特异性高，而 且抗体在体内维持时间长。中和抗体阳性不一 定表示正在感染中，也可能因以前有过隐性感 染所致。因此，中和试验适用于人群免疫情况 的调查，在临床诊断上较少使用。
(二) 病毒的数量与感染性测定
1.蚀斑测定
是一种检查和准确滴定病毒感染性的方法。将稀释的 病毒悬液加入单层细胞培养瓶中。病毒吸附后，再覆 盖一层融化的半固体营养琼脂，使病毒在单层细胞培 养中有限扩散。结果是每一个有感染性的病毒在单层 细胞中可产生一个局限性的感染灶。用活性染料 (如 中性红) 染色，则活细胞着色，受病毒感染而破坏的 细胞不着色，形成肉眼可见的蚀斑(plaque)。每个蚀 斑是由一个感染性病毒颗粒形成的，称作蚀斑形成单 位 (plaque forming unit,PFU)。病毒悬液中的感染 性病毒量的滴度可用PFU／ml表示。
2.50%组织细胞感染量 (TCID50)测定法
该方法是测定病毒能使50%的组织培养细胞发 生感染的最小量。一般是将病毒悬液作10倍的 系列稀释，分别接种细胞，经一定时间后观察 CPE、血细胞吸附等指标，以最高稀释度能感 染50%细胞的量为终点。最后用统计方法计算 出50%组织细胞感染量（ 50%tissue culture infectious dose,TCID50)。
2.补体结合试验 (complement
fixation test,CF test)
用已知病毒可溶性(CF)抗原来检测病人 血清中相应(CF)抗体。CF抗原是病毒的 内部抗原，同种异型间常有交叉，故特 异性较中和试验低。但CF抗体出现较早， 消失较快，故CF阳性可作为近期感染的 指标。
3.血凝抑制试验(hemagglutinatia
病毒在培养细胞中增殖的指标
1. 细胞的变化
① 有些病毒在细胞内增殖时可引起特有的细胞病变， 称为细胞病变效应 (CPE)。常见的变化有细胞变圆、 聚集、坏死、溶解或脱落等。
② 有些病毒如麻疹病毒、CMV、RSV等 作用于细胞膜， 可使邻近的细胞相互融合，形成多核巨细胞或称融 合细胞。
③ 有些病毒 (如狂犬病病毒、麻疹病毒等) 可在培养 细胞中形成胞浆或核内的包涵体。
3.血清学诊断标本的采取应在发病初期和病 后2～3w内各取1份血清，以便对比双份 血清抗体效价的动态变化。
二、病毒的分离与鉴定
(一)
1.动物接种 是最原始的病毒培养方法，根据病毒种 类不同，选择敏感动物及适宜接种部位， 如嗜 神经性病毒（狂犬病毒）可接种 于小鼠脑内，痘病毒可接种于家兔角膜 或皮内。
病毒 +鸡RBC = 凝集（血凝试验）
病毒 +特异性抗体 +鸡RBC=不凝集 （ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ凝抑制试验）
四、病毒感染的快速诊断
快速诊断主要是指从含有病毒标本 及感染机体的血清中检测病毒颗粒、 蛋白抗原、IgM抗体和核酸等，往 往在数小时内即可得出结果。
(一) 形态学检查
1.电镜和免疫电镜检查 2.普通光学显微镜检查