实验三、 动物染色体的制备及细胞的生理活动.

实验三、动物染色体的制备及细胞的生理活动

一．动物染色体的制备：

1. 原理：染色体只有在分裂期的细胞，特别是中期细胞中表现出典型形态便于观察和计数，

所以必须采取特殊的技术方法，从发生有丝分裂的组织和细胞悬液中得到。最常用的途径是从骨髓细胞、血淋巴细胞和组织培养的细胞中制备。骨髓细胞数量多，分裂旺盛，不需体外培养和无菌操作，便于取材。

2. 方法与步骤：

① 注射秋水仙素：实验前3-4小时先给小鼠腹腔注射秋水仙素（2ug/g体重），由于

秋水仙素能抑制纺锤体的形成，从而使有丝分裂停于中期。

② 取股骨：用颈椎脱臼法处死小鼠，在盘中用剪刀剪开小鼠后肢大腿上的皮肤和肌肉，

暴露出股骨几其两端相连的关节，从两端关节处分离下股骨。彻底除去肌肉和肌腱，然后在培养皿中用少量等渗氯化钠溶液洗净。

③ 收集细胞：用剪刀将股骨的两端各剪一个小洞，在培养皿内加入5ml的0.075mol/L

KCL低渗溶液，用小针筒吸取溶液后将针尖插入股骨的一端，然后将针筒内的溶液注射入股骨，这样反复冲洗就可将股骨内的骨髓细胞给洗脱下来。

④ 低渗处理：将作好标记的试管防于37℃恒温水浴锅中低渗处理20分钟。经低渗处

理可使细胞膨胀，促使中期染色体散开。

⑤ 固定和离心：低渗处理后加入固定液5滴，用吸管轻轻吹打混匀，然后平衡重量，

以2000r/min离心5分钟。弃上清夜，倾倒时要轻、快，一次倒完，留下沉淀的细胞团。

沿管壁加入固定液5ml，用吸管打匀，室温下固定至少10分钟（可任意延长）。再重复离心一次。

⑥ 制备骨髓细胞悬液：弃上清夜，在留有细胞的试管中加入8-10滴固定液，用吸管

打匀成细胞悬液。

⑦ 滴片：吸2-3滴细胞悬液，在20-30cm的高度滴于刚从冰箱内取出的预冷洁净的载

玻片上，轻吹片上的液滴，使细胞在玻片上铺展和分散，用吹风机微热吹干。

⑧ 染色：在干燥的玻片上滴几滴Giemsa染液，用滴管将染液铺匀，平放染色7分钟，

然后用自来水轻轻冲洗，凉干等待镜检。

3．观察结果：

将制好的染色体标本，先在低倍镜下作全面观察，可见到许多大小不等被染成紫红色呈圆形的间期细胞核以及分散在它们之间的中期分裂相。选取染色体形态良好、分散适中的分裂相，移至视野中央，转换高倍镜进行观察。小鼠染色体一般呈“U”形，染色体2n=40。

二．细胞的生理活动:细胞膜的渗透压

3. 原理:细胞通过细胞膜与周围环境进行有选择性的物质交换.这种物质交换有几种形式.

水分子常以简单扩散的方式通过细胞膜.如果细胞内外存在着渗透压的差别时，水分子较多地由渗透压低（水分子的密度高）的一侧，向渗透压高的一侧扩散，水分子较少地向渗透压低的一侧扩散。因此，在高渗环境中，动物细胞失水而皱缩，而植物细胞由于有细胞壁的存在，细胞的细胞膜向细胞内皱缩产生质壁分离。在低渗环境中，动物细胞能吸水膨胀直至破裂。

4. 实验方法：

洋葱表皮细胞的渗透性（示植物细胞的质壁分离现象）

先用吸管滴一滴蒸馏水在干净的载玻片中央，然后用尖镊子在洋葱内用镊子展平表皮勿使其折叠和皱缩，再用尖镊子夹取一盖玻片，并使其与载玻片成45°角徐徐放下，将此做好的洋葱表皮细胞临时制片置低倍镜下观察，可见到洋葱表皮是由 许多长方形的细胞组成，细

胞内有圆形的细胞核。

换用高倍镜观察，每个细胞的外边均有一层厚厚的细胞壁，细胞壁内侧紧贴细胞膜（但不能分辨），在细胞膜与细胞核之间是细胞质。正常细胞的细胞质紧靠着细胞壁内侧的细胞膜，并无分离现象。用吸管滴一滴10%氯化钠溶液在盖玻片的一侧（不要直接滴在盖玻片上），随即用吸水纸在对侧的盖玻片边缘吸水，此时氯化钠溶液随之流入盖玻片下面，再用高倍镜观察洋葱表皮细胞，可以看到分离现象。