核酸提取经验及原理总结
有关核酸采样知识点总结
有关核酸采样知识点总结一、核酸采样的基本原理核酸采样的基本原理是通过采集样本，提取其中的核酸进行检测。
在采样过程中，应尽可能避免对核酸的污染，以确保采样质量和检测结果的准确性。
核酸采样一般涉及到DNA和RNA两种核酸的采集和提取，其基本原理如下：1. DNA采样原理DNA采样是指通过采集样本中的细胞，提取其中的DNA进行检测。
常用的DNA采样方法包括咽拭子采样、血液采样、组织切片采样等。
在采样过程中，需要注意避免采样工具和容器的污染，以及保持采样样本的完整性和稳定性。
提取DNA的方法包括酚-氯仿提取、磁珠提取、硅基柱提取等，其中酚-氯仿提取是最为常用的方法之一。
2. RNA采样原理RNA采样是指通过采集样本中的细胞，提取其中的RNA进行检测。
常用的RNA采样方法包括咽拭子采样、血液采样、组织切片采样等。
与DNA采样相似，RNA采样也需要注意避免采样工具和容器的污染，以及保持采样样本的完整性和稳定性。
提取RNA的方法包括三种主要方法，包括直接法、酚-氯仿提取法和硅基柱提取法。
在这些方法中，硅基柱提取法通常被认为是最为高效和纯净的RNA提取方法。
二、常见的核酸采样方法核酸采样方法多种多样，根据采样部位和需要检测的核酸种类的不同，采用的方法也各有特点。
常见的核酸采样方法包括：1. 咽拭子采样咽拭子采样是通过用具有吸附功能的棉签或刷子沾取患者咽部黏膜表面的分泌物，以采集患者的DNA或RNA样本。
采样方法简单、操作方便，适用于新冠病毒、流感病毒等呼吸道病原体的检测。
同时，咽拭子采样也适用于细菌和真菌的检测。
2. 血液采样血液采样是通过穿刺患者静脉或毛细血管，收集血液样本以进行DNA或RNA检测。
血液采样适用于体内病理变化和很多感染疾病的检测，比如艾滋病、疟疾、乙肝、肺结核等。
此外，血液采样也是检测血液学疾病和遗传性疾病的必备方法。
3. 组织切片采样组织切片采样是通过外科手术、内窥镜或穿刺等方式，取得可疑肿瘤或其他组织，并用特殊工具采集组织切片进行病理学检测。
核酸的提取与鉴定实验报告
核酸的提取与鉴定实验报告
实验报告：核酸的提取与鉴定
I. 实验目的：
通过实验学习核酸提取和鉴定的步骤，掌握核酸提取实验技能，初步了解PCR技术及其在分子生物学中的应用。
II. 实验原理：
DNA分子在水性条件下具有极强的极性，由此，在化学性质上只要是极性且亲水性的溶剂都能迅速膨胀和破裂DNA分子的双链
结构，并溶解其中的碱基、核苷酸、脱氧糖等。
利用这一原理，
我们可以用溶液来提取含有核酸的样品，然后通过紫外吸光度计
检测该提取物中核酸的含量。
此外，PCR技术是一种被广泛运用
于DNA扩增的技术，其主要原理是通过DNA聚合酶扩增DNA
的特定片段。
III. 实验步骤及结果：
1. 核酸提取：将实验样品加入细胞破解液并混匀，离心后取上
清液，加入等体积的异丙醇，轻轻振荡混合并离心15分钟，然后
弃上清液，加入70%无水乙醇并离心，倒掉液体后用氧气吹干。
最终的核酸提取物的溶解液浑浊且无法肉眼辨认样品。
2. 核酸鉴定：将已经提取的样品分别用紫外吸光度计测量其光密度，结果表明与对照的D.W相比，样品中的核酸具有极高的光密度值，证明核酸提取步骤成功，核酸鉴定实验成功。
IV. 结论：
通过本次实验，我们成功地提取了样品中的核酸，并对提取后的核酸进行了鉴定，证明提取物中含有大量的核酸，表明核酸提取和鉴定实验成功，也为分子生物学的研究提供了基础。
核酸提取原理及方法
核酸提取原理及方法核酸提取是分子生物学实验中的重要步骤，它是从细胞或组织中分离出核酸并净化的过程。
核酸提取的成功与否直接影响到后续的实验结果，因此掌握核酸提取的原理和方法对于科研工作者来说至关重要。
一、核酸提取原理。
核酸提取的原理主要包括细胞破碎、核酸溶解和净化三个步骤。
首先，细胞膜和细胞壁需要被破坏，以释放细胞内的核酸。
其次，核酸需要被有效地溶解，使其能够被提取出来。
最后，通过净化步骤去除蛋白质、多糖和其他杂质，从而得到纯净的核酸样品。
二、核酸提取方法。
1. 酚氯仿法。
酚氯仿法是最常用的核酸提取方法之一。
其原理是利用酚和氯仿两种有机溶剂与水相不相溶的特性，将细胞裂解液中的蛋白质等杂质分离出去，从而得到纯净的核酸。
这种方法操作简单，适用于提取大量样品。
2. 硅胶柱法。
硅胶柱法利用硅胶膜对核酸的亲和力进行提取和分离。
通过将样品加入硅胶柱后，核酸能够与硅胶膜结合，而其他杂质则被洗脱掉。
这种方法提取的核酸纯度高，适用于对纯度要求较高的实验。
3. 磁珠法。
磁珠法是近年来发展起来的一种核酸提取新方法。
通过在磁珠表面修饰亲核酸的功能基团，使得核酸能够与磁珠结合。
利用磁场的作用，可以将核酸与磁珠分离出来，从而实现核酸的提取和纯化。
这种方法操作简便，且适用于高通量提取。
三、注意事项。
在进行核酸提取时，需要注意以下几点：1. 样品的质量和保存对提取结果有重要影响，因此在提取前需要确保样品的完整性和纯度；2. 根据不同的实验目的和样品特点选择合适的提取方法，以确保提取效果；3. 在操作过程中要注意无菌操作，避免外源性核酸的污染；4. 核酸提取后，应根据实验需求储存或立即进行下一步实验。
总结，核酸提取是分子生物学实验中的重要步骤，掌握核酸提取的原理和方法对于科研工作者来说至关重要。
不同的提取方法有着各自的特点和适用范围，选择合适的提取方法能够提高实验效率和结果的准确性。
在实验操作中要严格按照操作规程进行，确保提取的核酸样品质量和纯度。
核酸提取的原理
核酸提取的原理
核酸提取是一种用来从生物样本中分离和纯化核酸（DNA或RNA）的技术。
其原理基于核酸在细胞中的特定性质和化学
特性。
下面是核酸提取的原理步骤：
1. 细胞破碎：首先，将生物样本（如细胞、组织或血液）收集到离心管中，并使用生理盐水或缓冲液洗涤样本以去除杂质。
然后，采用机械、化学或热能等方法，破碎细胞膜和细胞核，使细胞内的核酸释放到溶液中。
2. 蛋白质去除：为了去除细胞破碎后溶液中的蛋白质和其他杂质，可以使用蛋白酶、蛋白质沉淀剂或有机溶剂等方法进行蛋白质的沉淀或显色反应。
这一步骤可以有效地除去干扰物，使核酸纯化更加纯粹。
3. DNA和RNA分离：如果需要纯化DNA和RNA，则可以使用亲水性柱、酸性沉淀剂或硅胶膜等吸附剂。
这些吸附剂可以特异性地结合DNA或RNA，并将其与其他杂质分离开来。
根据吸附剂的不同，可以选择适当的提取方法。
4. 封闭或洗脱：提取后的核酸通常需要保存或进一步分析。
可以将其封闭在储存液中，以避免降解。
此外，还可以使用适当的缓冲液来洗脱核酸，以备后续实验使用。
总的来说，核酸提取的原理是通过破碎细胞、去除蛋白质、分离DNA或RNA，并最终纯化核酸。
这一过程涉及到细胞破碎、蛋白质去除、核酸分离和后续处理等多个步骤，可以根据具体
实验需求进行调整和优化。
这些步骤中的关键是选择合适的试剂和技术，以获得高质量和高纯度的核酸提取产物。
核酸提取经验及原理总结
核酸提取经验及原理总结核酸提取是分子生物学研究中的一项重要技术，它可以从生物样品中分离和纯化出目标的核酸分子，为后续的实验操作提供基础。
本文将对核酸提取的经验和原理进行总结，以帮助读者更好地理解和应用该技术。
核酸提取的经验总结：2.样品的预处理：在核酸提取前，需要对样品进行一些预处理，如细胞裂解、组织破碎等。
这些步骤有助于释放和保护核酸分子，促进提取效果。
3.溶解和裂解：核酸提取的第一步是将样品溶解和裂解，以释放核酸分子。
溶解缓冲液常用于裂解样品，并加入蛋白酶进行蛋白质降解。
此时需要考虑样品的特性和实验要求，选择合适的裂解缓冲液和裂解方法。
4.核酸分离：核酸分离是核酸提取的关键步骤，常用的分离方法有酚-氯仿法、硅胶柱法和磁珠法等。
在选择分离方法时需考虑样品的类型和实验要求，以及各种方法的特点和优势。
5.纯化和浓缩：提取的核酸分子中常含有杂质，需要进行纯化和浓缩。
常用的纯化方法有酚-氯仿法、琼脂糖凝胶电泳法和商用纯化试剂盒等。
纯化后的核酸可以进行浓缩，以提高其浓度和纯度。
6.质量检测：核酸提取后，需要对提取的核酸分子进行质量检测。
常用的检测方法有琼脂糖凝胶电泳、比色法和荧光分析等。
通过检测可以了解核酸的浓度、纯度和完整性，为后续实验提供准确的数据。
核酸提取的原理总结：1.细胞裂解和溶解：细胞裂解是将细胞壁和细胞膜破坏，使细胞内容物暴露在溶液中。
细胞溶解液中常含有裂解缓冲液和蛋白酶等物质，以促进细胞的裂解和蛋白质的降解。
2.核酸分离和纯化：核酸在细胞溶解液中可以与其他细胞成分分离，常用的方法有酚-氯仿法。
酚可溶于水，而氯仿可溶于有机溶剂，通过两相溶剂的分层，可以将核酸沉淀到有机相中，从而实现核酸的分离。
3.杂质去除和浓缩：通过纯化方法，可以将核酸与其他杂质分离。
如硅胶柱和磁珠法通过静电吸附和洗脱来除去杂质，商用纯化试剂盒则通过离心柱等固相材料来实现。
纯化后的核酸可以进行浓缩，以提高其浓度和纯度。
4.质量检测：核酸提取后，需要对提取的核酸进行质量检测。
核酸实验报告小结
一、实验目的本次实验旨在学习核酸提取和检测的基本原理和方法，掌握从细胞或组织中提取核酸的操作步骤，并利用相关技术检测核酸的纯度和浓度。
二、实验原理核酸是生物体内的重要遗传物质，包括DNA和RNA。
DNA主要存在于细胞核中，而RNA则主要存在于细胞质中。
核酸提取是将细胞或组织中的核酸分离出来，以便进行后续的检测和分析。
常用的核酸提取方法有苯酚-氯仿法、CTAB法等。
核酸检测主要包括定量检测和定性检测，常用的定量检测方法有比色法、荧光定量PCR等。
三、实验材料1. 细胞或组织样本2. 无菌操作工具（镊子、剪刀、吸管等）3. 提取试剂（苯酚、氯仿、异丙醇、NaCl溶液等）4. 试剂盒（如核酸提取试剂盒、PCR试剂盒等）5. 仪器（离心机、电泳仪、凝胶成像系统等）四、实验步骤1. 样本处理：取适量细胞或组织样本，加入适量缓冲液，用匀浆器充分匀浆。
2. 核酸提取：将匀浆后的样本加入苯酚-氯仿混合液，剧烈振荡混匀，静置分层。
取上层水相，加入氯仿再次混匀，静置分层。
取上层水相，加入等体积的异丙醇，混匀，静置，待核酸沉淀。
3. 核酸纯化：将沉淀的核酸用70%乙醇洗涤，弃去上清液，将核酸沉淀干燥后溶解于适量缓冲液中。
4. 核酸定量：取适量核酸溶液，加入比色试剂，在特定波长下测定吸光度，计算核酸浓度。
5. 核酸检测：取适量核酸溶液，加入PCR试剂盒，进行PCR扩增。
将扩增产物进行电泳，观察结果。
五、实验结果与分析1. 核酸提取：通过观察苯酚-氯仿分层情况，判断核酸提取效果。
若分层明显，则表明核酸提取成功。
2. 核酸纯化：通过观察沉淀情况，判断核酸纯化效果。
若沉淀物呈白色絮状，则表明核酸纯化效果较好。
3. 核酸定量：通过比色法测定核酸浓度，计算结果。
若吸光度值在标准曲线范围内，则表明核酸浓度测定准确。
4. 核酸检测：通过PCR扩增和电泳检测，观察结果。
若出现特异性条带，则表明核酸检测成功。
六、实验结论本次实验成功从细胞或组织中提取了核酸，并通过比色法和PCR技术对核酸进行了定量和检测。
核酸提取原理及方法
➢ 洗涤使得丢失DNA
一．核酸简介 二．基因组DNA提取 三．质粒DNA提取 四．真核细胞总RNA提取 五．琼脂糖凝胶电泳
质粒DNA提取
质粒DNA提取的方法： ➢碱裂解法 ➢煮沸法
质粒DNA提取——碱裂解法原理
离心柱型质粒DNA提取试剂盒工作原理
离心柱型质粒DNA提取试剂盒采用改进的SDS-碱裂 解法裂解细胞，离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低pH 值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA，再通过漂洗 液将杂质和其它细菌成分去除，最后用低盐、高pH值的 洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。
4.实验材料
对数期菌株（pEGFP-N1 in DH5α）
质粒DNA提取——碱裂解法
碱裂解法试剂配方
Ⅰ液 Ⅱ液 Ⅲ液
组分1
组分2
25 mM Tris-HCl （pH 8.0） 10 mM EDTA（pH 8.0 ）
0.2 M NaOH
1% SDS
3 M KAc （pH 4.2）
RNase A
10 μg/ml RNase A
基因组DNA提取常见问题
DNA样品不纯，抑制后续酶解和PCR反应 DNA降解 DNA量少
基因组DNA提取常见问题分析
DNA样品不纯，抑制后续酶解和PCR反应
➢ DNA中含有蛋白、多糖、多酚类物质 ——抽提纯化、高盐洗涤
➢ DNA在溶解前，有酒精残留，酒精抑制后续酶解反应 ——重新沉淀
➢ DNA中残留有金属离子 ——重新70%乙醇漂洗
4.加入待测RNA样品在三个波长处读取OD值。
质粒DNA提取及检测——实验准备
1.实验器材
台式高速离心机、旋涡混合仪、移液器、定时器、 marker笔、 电子天平、电泳设备、凝胶成像系统、微波炉、量筒、试剂瓶、锥形瓶等。
核酸提取技术的原理和应用
核酸提取技术的原理和应用介绍核酸提取技术是生物学研究和临床实验中常用的一种实验方法。
它被广泛应用于基因组学、遗传学、病理学等领域，为研究人类疾病的发生机制以及改进治疗方法提供了重要的方法支持。
本文将介绍核酸提取技术的原理以及在不同领域的应用。
核酸提取技术的原理核酸提取技术旨在从生物样本中提取纯净的核酸（包括DNA和RNA），以便进行后续的实验操作。
其基本原理如下：1.细胞破裂：首先需要将生物样本中的细胞破裂，以释放细胞内的核酸。
这可以通过物理、化学或者生物学方法实现。
常用的方法包括冻融法、酶切法、声波破碎法等。
2.蛋白质去除：提取到的核酸常常伴随有大量的蛋白质、碳水化合物、脂质等杂质。
因此，为了得到纯净的核酸，需要使用蛋白酶或化学试剂去除这些杂质。
常用的方法有酚-氯仿法、硅胶柱法等。
3.核酸沉淀：通过适当的条件，如加入盐、有机溶剂或乙醇，可以使核酸从溶液中沉淀出来。
核酸沉淀的条件可根据所用的核酸类型（DNA还是RNA）进行调整。
4.质量检测：在提取核酸后，为了确认提取到的核酸质量和纯度，通常需要进行质量检测。
这可以通过比色法、吸光度测定、凝胶电泳等方法实现。
核酸提取技术的应用核酸提取技术在不同领域都有广泛的应用，以下是一些常见的应用领域：基因组学研究•DNA测序：核酸提取是进行DNA测序的前提，测序结果可以帮助研究人员深入了解生物的基因组结构和功能。
•基因表达研究：通过提取RNA并转录为cDNA，可以分析基因的表达水平，进而了解不同细胞状态或组织中基因的表达差异。
遗传学研究•遗传疾病研究：核酸提取技术可以帮助研究人员分析与遗传疾病有关的基因变异，揭示疾病的发生机制。
•个体鉴定：通过核酸提取和DNA指纹技术的结合，可以进行个体鉴定，如刑事侦查中的DNA比对。
病理学研究•癌症诊断：通过提取癌细胞中的核酸，可以进行基因突变的检测，从而帮助癌症的早期诊断和治疗方法选择。
•感染病原体检测：核酸提取技术可以用于检测病原体的核酸，如病毒、细菌等，有助于早期发现和诊断传染病。
核酸的提取经验和原理总结.doc
核酸的提取经验和原理总结一、核酸核苷酸单体聚合而成的生物大分子，是生物细胞最基本和最重要的成分。
一般认为，生物进化即始于核酸，因为在所有生命物质中只有核酸能够自我复制。
今天已知核酸是生物遗传信息的贮藏所和传递者。
一种生物的蓝图就编码在其核酸分子中。
核酸是1869年米歇尔F.Miescher在脓液的白细胞中发现的。
他当时称之为核素。
阿尔特曼R.Altmann于1889年认识其酸性后，定名为核酸。
二、核酸的分类和功能核酸分为核糖核酸RNA和脱氧核糖核酸DNA两大类。
这两类核酸有某些共同的结构特点，但生物功能不同。
DNA贮存遗传信息，在细胞分裂过程中复制，使每个子细胞接受与母细胞结构和信息含量相同的DNA；RNA主要在蛋白质合成中起作用，负责将DNA的遗传信息转变成特定蛋白质的氨基酸序列。
核酸的基本结构单元是核苷酸，核苷酸含有含氮碱基、戊糖和磷酸3种组分。
碱基与戊糖构成核苷，核苷的磷酸酯为核苷酸。
DNA和RNA中的戊糖不同，RNA中的戊糖是D-核糖；DNA不含核糖而含D-2-脱氧核糖核糖中2位碳原子上的羟基为氢所取代。
核酸就是根据其中戊糖种类来分类的，DNA和RNA的碱基也有所不同。
三、核酸的理化性质RNA和核苷酸的纯品都呈白色粉末或结晶，DNA则为白色类似石棉样的纤维状物。
除肌苷酸、鸟苷酸具有鲜味外，核酸和核苷酸大都呈酸味。
DNA、RNA和核苷酸都是极性化合物，一般都溶于水，不溶于乙醇、氯仿等有机溶剂，它们的钠盐比游离核酸易溶于水，RNA钠盐在水中溶解度可达40g/L，DNA钠盐在水中为10g/L，呈黏性胶体溶液。
在酸性溶液中，DNA、RNA易水解，在中性或弱碱性溶液中较稳定。
天然状态的DNA 是以脱氧核糖核蛋白DNP形式存在于细胞核中。
要从细胞中提取DNA 时，先把DNP抽提出来，再把P 除去，再除去细胞中的糖，RNA 及无机离子等，从中分离DNA 。
四、细胞裂解（一）裂解原理在核酸提取过程中，细胞裂解是非常重要的。
核酸提取原理及的方法
核酸提取原理及的方法核酸提取是生物学研究中常用的一项操作技术，用于从生物样本中提取出纯度较高的核酸物质，以供进一步的分析和实验使用。
核酸提取的原理是将细胞膜破裂，使得核酸释放到溶液中，然后通过几种方法去除蛋白质、其他杂质和溶液中的酶，最后将纯的核酸物质从溶液中沉淀出来。
核酸提取的方法有很多种，下面将介绍常用的几种方法。
1. 酚/氯仿法（Phenol/Chloroform Extraction）：这是最常用的核酸提取方法之一、首先将细胞样本加入到含有酚和氯仿的溶液中，酚能溶解脂质，破坏细胞膜；然后离心使其分为两相，上层为水相，下层为有机相。
水相中含有核酸和水溶性杂质，有机相中含有脂质和非水溶性杂质。
将上层水相取出，通过分子筛或盐的作用去除水相中的酚、蛋白质等杂质，最后通过异丙醇沉淀法将核酸沉淀下来。
2. 硅胶柱层析法（Silica Column Chromatography）：这是一种常用的纯化核酸的方法。
首先将细胞样本经过裂解步骤释放核酸，然后将裂解液加入硅胶柱中，硅胶能够吸附核酸。
通过洗涤和洗脱的步骤去除杂质，最后将纯度较高的核酸溶液从硅胶柱中洗脱出来。
3. 盐沉淀法（Salt Precipitation）：这是一种简单快速的核酸提取方法。
首先将细胞样本经过裂解步骤释放核酸，然后加入盐溶液（如氯化钠），通过高盐浓度的作用沉淀核酸。
通过离心将核酸沉淀下来，去除杂质。
最后通过加入适当的溶剂将核酸溶解出来。
4. 柱层析法（Column Chromatography）：这是一种基于分子大小差异的核酸提取方法。
首先将细胞样本经过裂解步骤释放核酸，然后将裂解液加入到一个具有分子层次的柱中。
根据核酸的大小和形状差异，通过洗涤和洗脱的步骤将目标核酸从其他杂质中分离出来。
除了以上介绍的几种方法，还有磁珠萃取法、酵素消化法等核酸提取方法。
这些方法各有优缺点，可以根据实验的需要选择适合的方法。
需要注意的是，在进行核酸提取过程中，应当避免核酸样本的污染，一些常见的措施包括使用丙酮等剂去除有机物和酶，使用无菌工具和试剂，以及进行负控实验等。
核酸提取的基本步骤和原理
核酸提取的基本步骤和原理
核酸提取是从生物样本中分离和纯化核酸的过程，常用于分子生物学研究和诊断。
它的基本步骤和原理如下：
1. 样本收集：从植物、动物或微生物等样本中收集细胞，如血液、组织、细胞培养物等。
2. 细胞破碎：使用适当的缓冲溶液将细胞膜破碎，释放细胞核和细胞质中的核酸。
破碎方法可以是机械碾磨、超声波处理或酶切等。
3. 蛋白质去除：加入蛋白酶或蛋白质沉淀剂，使蛋白质凝聚成团或被酶降解，然后通过离心沉淀去除。
4. 染色体沉淀：加入沉淀剂（如高浓度盐溶液或醇），使DNA或RNA沉淀形成白色颗粒。
这一步是用于分离和富集核酸。
5. 洗涤：重悬沉淀后的核酸在洗涤缓冲溶液中，通过离心去除杂质如盐、蛋白质等。
6. 纯化：经过洗涤后，核酸溶液通过旋转膜或硅胶填充柱等纯化方法，去除残留的污染物和杂质。
7. 进一步处理：获得纯化的核酸后，可以根据实验需要进行浓缩、检测含量和质量、保存等处理。
核酸提取的原理主要基于核酸和其他细胞成分之间的物理性质和化学性质的差异。
通过破碎细胞膜释放核酸，然后利用核酸的特性和其他成分的物理性质差异，如溶解度、电荷、亲疏水性等，进行分离和纯化。
其中，核酸具有亲水性，可以通过加入沉淀剂来使其沉淀。
核酸提取原理及方法
核酸提取原理及方法核酸提取是指从细胞、组织或病毒中分离纯化出来的DNA或RNA分子。
核酸提取的过程包括以下几个步骤。
1. 细胞破碎：首先需要将目标细胞破碎，破碎细胞的方法可以选择机械破碎、化学破碎或酶解等。
机械破碎可以通过高速离心、超声波处理等方法实现，化学破碎则可以使用表面活性剂或蛋白酶K等物质，酶解则是利用特定酶降解细胞壁。
2. 蛋白质消化：细胞内的蛋白质需要消化在提取核酸的过程中，可以使用蛋白酶、高盐离心等方法使蛋白质失活和沉淀。
高盐离心可通过加入高盐溶液，使蛋白质和核酸形成络合物，然后离心，使蛋白质沉淀，核酸在上清液中。
3. 去除杂质：在提取的过程中，会存在一些杂质如RNA、酶和多肽，这些物质会影响纯化核酸的质量和浓度。
可以通过酶切、RNA去除试剂等方法去除这些杂质。
酶切是利用特定的核酸酶对RNA进行消化，RNA去除试剂则是通过特定试剂与RNA结合形成沉淀，然后进行离心分离。
4. 纯化：纯化的目的是除去核酸提取过程中的其他杂质，获得纯净的核酸分子。
常用的纯化方法有酚/氯仿法、琼脂糖凝胶电泳法、硅胶纯化法和离心柱纯化法等。
酚/氯仿法是利用酚和氯仿疏水性差异的原理，将核酸分子转移到酚相中，然后进行重溶解和沉淀分离。
琼脂糖凝胶电泳法则是利用琼脂糖凝胶孔径大小的差异，通过电场的作用将核酸分子从琼脂糖凝胶中分离出来。
硅胶纯化法是利用硅胶对DNA和RNA分子的亲和性，将核酸与硅胶结合，然后通过洗脱和浓缩得到纯化的核酸。
离心柱纯化法则是利用柱体内特定的亲和基质，选择性地结合核酸分子，然后洗脱和收集纯化的核酸。
5. 检测：最后核酸提取的纯度和浓度可以通过吸光度测量或荧光染料法进行检测。
吸光度测量通过核酸溶液吸收紫外光的特性来计算核酸的浓度和纯度。
荧光染料法则是利用特定荧光染料与核酸结合形成荧光复合物，通过荧光信号的强度来计算核酸的浓度和纯度。
综上所述，核酸提取的方法和原理主要包括细胞破碎、蛋白质消化、去除杂质、纯化和检测等步骤。
核酸提取原理及方法
核酸提取原理及方法核酸提取是从生物样品中分离纯化核酸的一种常用技术。
核酸提取的目的是获得高质量的DNA或RNA样品，这对于进行分子生物学实验、遗传分析和基因工程等研究都具有重要意义。
本文将介绍核酸提取的原理和常用的方法。
1.核酸提取的原理核酸提取的主要原理是利用核酸的生化性质和细胞膜结构的特点。
通常情况下，核酸存在于细胞核和线粒体中的DNA和细胞核和线粒体中的RNA两种形式。
核酸提取的基本步骤包括样品裂解、蛋白质沉淀、核酸溶解和纯化。
（1）样品裂解：样品裂解的目的是破坏细胞膜和胞壁，释放核酸。
裂解方法包括物理方法（如冻融、超声波等）和化学方法（如酶解、有机溶剂的应用等），具体选择方法应根据不同样品的特点而定。
（2）蛋白质沉淀：裂解样品中存在大量的蛋白质，在提取核酸前需要将蛋白质沉淀。
常用的方法有酚酸法和酚氯仿法。
酚酸法通过将样品加入等体积的酚酸混合液中，形成两相体系，蛋白质会沉淀到有机相中，然后通过旋转分离出蛋白质相。
酚氯仿法则是在酚酸法的基础上，加入氯仿与酚酸相分离，从而得到较纯的核酸。
（3）核酸溶解：蛋白质沉淀之后，需要将核酸从蛋白质中溶解出来。
一般可使用三氯化锂、氢氧化钠或磷酸缓冲液等。
（4）核酸纯化：核酸溶解之后，需要将其中的杂质（如酶、盐、聚合酶等）去除，获得纯化的核酸。
常用的方法有酒精沉淀法、硅胶柱法和磁珠法。
酒精沉淀法通过在核酸溶液中加入酒精，使核酸沉淀到底部。
硅胶柱法是利用硅胶的亲合性，将核酸吸附在硅胶柱上，然后经过一系列的洗脱步骤得到纯化的核酸。
磁珠法是利用磁性珠子的特性，在核酸样品中加入磁珠，通过磁力将磁珠聚集在一起，然后用洗涤缓冲液去除杂质，再用洗涤缓冲液洗脱核酸。
2.核酸提取的方法核酸提取的方法有很多种，以下介绍常用的几种方法。
（1）酚酸法：酚酸法是核酸提取的经典方法之一、该方法将样品裂解后，加入等体积的酚酸混合液，通过旋转离心沉淀蛋白质。
然后将上清液取出，加入异丙醇沉淀DNA或RNA，离心沉淀出核酸。
核酸的提取经验及原理总结
核酸的提取经验及原理总结提取核酸是分子生物学中的基础实验技术，广泛应用于基因克隆、PCR、DNA测序、基因表达分析等领域。
核酸的提取过程需要克服细胞破裂、蛋白质降解、核酸损伤等多个难题。
在实际操作中，我们通常采用溶解细胞壁、降解蛋白、去除杂质等步骤来提取核酸。
以下是核酸提取的经验及其原理的总结。
1.细胞壁的破裂细胞壁是植物和真菌细胞中的特殊结构，需要特殊方法破裂。
常用的方法有机械破碎、酶解、离心破缺等。
机械破碎常用玻璃珠、球磨器等进行细胞破裂，并在低温条件下进行，以避免核酸的降解。
酶解方法利用细胞壁酶或丝裂霉素等酶来破裂细胞壁。
离心破缺则是通过高速离心来破裂细胞，适用于单细胞或细菌等。
2.蛋白质的降解细胞中富含蛋白质，必须去除蛋白质才能提取纯净的核酸。
常用的方法有蛋白酶处理、热处理和有机溶剂沉淀。
蛋白酶处理是利用蛋白酶来降解细胞中的蛋白质，常用的蛋白酶有蛋白酶K、胰蛋白酶等。
热处理方法是通过加热来使蛋白质变性和沉淀，其后可用离心去除蛋白。
有机溶剂沉淀法是利用有机溶剂如醋酸等与蛋白质结合形成络合物，沉淀后去除沉淀物。
3.核酸的损伤核酸在提取过程中容易受到降解和损伤。
为了防止核酸的降解和损伤，常采用以下方法：（1）使用缓冲液，保持pH值的稳定，因为pH的变化会导致核酸断裂。
（2）将细胞裂解液置于低温条件，减缓核酸的降解。
（3）加入螯合剂如EDTA，以去除金属离子对核酸的损伤。
（4）添加蛋白酶抑制剂，防止核酸被附着的蛋白酶降解。
4.去除杂质提取核酸过程中，常伴随有细胞膜、RNA、酶、金属离子等带入到提取液中。
为了得到纯净的核酸样品，需要去除这些杂质。
常用的方法有去膜、酶降解、沉淀和离心等。
去膜方法是通过洗涤或离心的方式去除细胞膜或细胞碎片。
酶降解是将RNase等降解核酸酶加入提取液中，去除RNA。
沉淀和离心是利用沉淀物的不溶性或离心分离的原理，去除蛋白质和其他杂质。
综上所述，核酸的提取是一项关键的实验步骤，合理选择提取方法和条件对成败至关重要。
核酸提取的原理及方法
核酸提取的常见方法及原理核酸提取作为分子实验中最基础的实验之一，几乎是所有实验的基本，无论后续的克隆、PCR、qPCR、建库测序等等都需要核酸才能顺利进行。
今天我们就来简单了解核酸提取的基本原理和方法。
1、什么是核酸核酸是由许多核苷酸聚合成的生物大分子化合物，为生命的最基本物质之一，分为脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA），其中RNA又可以根据功能的不同分为核糖体RNA(r RNA)，信使RNA（m RNA）和转移RNA（t RNA）。
核酸广泛存在于所有动植物细胞、微生物内、生物体内的核酸常与蛋白质结合形成核蛋白。
不同的核酸，其化学组成、核苷酸排列顺序等不同。
DNA主要集中在细胞核内，线粒体和叶绿体中，而RNA主要分布在细胞质当中。
2、核酸提取类型1、总RNA提取总RNA中，75-85%为rRNA(主要是28S-26S/23S和18S/16S rRNA)，其余的由分子量大小和核苷酸序列各不相同的mRNA和小分子RNA如tRNA、5S rRNA、5.8S rRNA、miRNA、siRNA、小核RNA（small nuclear RNA，snRNA）及核仁小分子RNA（small nuceolar RNA，snoRNA）等组成。
2、miRNA提取MicroRNAs (miRNAs)是小型的、高度保守的RNA分子，如小干扰RNAs (siRNAs)，通过与他们的碱基配对调节其同源mRNA的分子表达，以预防通过各种机制的表达。
他们已成为进行发育、细胞增殖、分化和细胞周期的重点监管机构。
3、基因组DNA提取进行基因结构和功能研究以及基因诊断，通常要求得到的片段长度不小于100～200kb。
在DNA提取过程中应尽量避免使DNA断裂和降解的各种因素，以保证DNA的完整性，为后续的实验打下基础。
4、质粒抽提质粒抽提方法即去除RNA，将质粒与细菌基因组DNA分开，去除蛋白质及其它杂质，以得到相对纯净的质粒。
提取核酸的基本步骤和原理
提取核酸的基本步骤和原理提取核酸是生物学和分子生物学研究中的重要步骤之一，它可以被用于许多实验和研究，比如PCR（聚合酶链反应）、蛋白质分析、基因克隆等。
核酸的提取步骤和原理如下。
核酸提取的基本步骤如下：1. 选择样本：根据研究目的选择合适的样品，可以是细胞、组织、培养物、血液、植物材料等。
2. 细胞裂解：使用适当的缓冲液裂解细胞。
如细胞溶解液（Cell lysis buffer）、裂解缓冲液等。
这是为了破坏细胞膜和核膜，释放核酸。
3. 去除蛋白质：通过蛋白酶处理方法去除细胞裂解液中的蛋白质。
常用的方法有蛋白酶K处理和蛋白酶分析等。
4. 沉淀核酸：通过添加盐、乙酸钠或乙醇等方式沉淀DNA或RNA。
5. 洗涤沉淀物：用酒精或乙酸乙酯洗涤沉淀物，以去除残留的污染物和盐。
6. 重溶核酸：用适当的缓冲液（如TE缓冲液）重溶核酸。
核酸提取的原理主要涉及以下几个方面：1. 细胞裂解：细胞膜和核膜是细胞内核酸的主要障碍，因此，先通过细胞裂解溶解细胞，释放核酸。
细胞裂解液通常包含盐和表面活性剂，以帮助破坏细胞膜和核膜。
2. 去除蛋白质：核酸提取过程中，蛋白质会干扰核酸的测量和下游实验，因此需要去除蛋白质。
这通常通过蛋白酶分解法或钠盐沉淀法实现。
蛋白酶会切断蛋白质，降解它们的功能，从而分离核酸和蛋白质。
3. 核酸沉淀：通过加入盐、乙酸钠或乙醇等物质，可以使核酸从溶液中沉淀。
这是因为核酸在高盐浓度下形成疏水结构，从而从溶液中析出。
4. 洗涤沉淀物：在核酸提取过程中，有时会有杂质残留在核酸沉淀物中，这些杂质可能干扰后续实验。
因此，需要用酒精或乙酸乙酯进行洗涤，去除这些杂质。
5. 重溶核酸：核酸通常以高浓度保存，便于存储和下游实验。
因此，通过加入适当的缓冲液重溶核酸，使其浓度适合后续实验。
总之，核酸提取是一系列的步骤和原理组成的过程，它能够从样品中有效地提取出核酸，为后续实验提供重要的基础。
这个过程中的每个步骤都需要使用适当的试剂和设备，并遵循严格的实验操作规范，以获得高质量的核酸样品。
核酸原理实践总结报告(2篇)
第1篇一、前言核酸是生物体内携带遗传信息的分子，是生物遗传信息的载体。
在过去的实验中，我们通过对核酸的提取、分离、鉴定等操作，加深了对核酸原理的理解。
以下是本次实践总结报告。
二、实验目的1. 学习核酸的基本概念、结构和功能。
2. 掌握核酸的提取、分离、鉴定方法。
3. 熟悉核酸实验操作，提高实验技能。
三、实验原理核酸分为DNA和RNA两种，它们在生物体内发挥着重要作用。
DNA主要存在于细胞核中，负责遗传信息的存储和传递；RNA主要存在于细胞质中，参与蛋白质的合成。
核酸提取、分离、鉴定方法如下：1. 提取：采用酚-氯仿法、碱法等方法，从细胞、组织、血液等生物材料中提取核酸。
2. 分离：利用核酸在不同溶液中的溶解度差异，通过离心、层析等方法将DNA和RNA分离。
3. 鉴定：采用比色法、电泳法等方法，对提取的核酸进行鉴定。
四、实验方法与步骤1. 核酸提取（1）取一定量的生物材料，加入适量的缓冲液和洗涤剂，进行匀浆处理。
（2）加入酚-氯仿溶液，进行抽提，去除蛋白质、脂质等杂质。
（3）加入等体积的异丙醇，沉淀核酸。
（4）将沉淀的核酸用70%乙醇洗涤，晾干，溶解于适量的水中。
2. 核酸分离（1）将提取的核酸溶液加入适量的琼脂糖凝胶中，进行电泳分离。
（2）观察电泳图谱，分析DNA和RNA的分布情况。
3. 核酸鉴定（1）取适量的核酸溶液，加入适量的二苯胺试剂，进行比色鉴定。
（2）观察溶液颜色变化，判断核酸的类型。
五、实验结果与分析1. 核酸提取：实验成功提取了生物材料中的核酸，经鉴定为DNA和RNA。
2. 核酸分离：电泳图谱显示，DNA和RNA在凝胶中呈现明显的条带，成功分离。
3. 核酸鉴定：比色法鉴定结果显示，提取的核酸为DNA。
六、实验总结1. 通过本次实验，我们掌握了核酸的提取、分离、鉴定方法，加深了对核酸原理的理解。
2. 实验过程中，我们学会了如何操作实验仪器，提高了实验技能。
3. 本次实验也让我们认识到，实验过程中应注重细节，确保实验结果的准确性。
提取核酸的方法及原理
提取核酸的方法及原理
提取核酸的方法有以下几种：
1. 碱裂解法：将细胞或组织样本加入含有氢氧化钠或EDTA的缓冲液中，使细胞或组织中的蛋白质、脂质等被丧失活性，然后用氯仿酚提取法将核酸从碱裂解液中分离出来。
2. 酚/氯仿法：将细胞或组织样本加入含有酚和氯仿的缓冲液中，酚在高pH条件下能溶解蛋白质，氯仿用于分离酚的上清液和有机相，进而分离出核酸。
3. 乙醇沉淀法：将核酸溶液中加入适量的醋酸钠和乙醇，使核酸从溶液中析出，然后通过离心沉淀收集纯化的核酸。
4. 硅基法：利用硅基质具有与核酸亲和性的特点，将核酸结合到硅基上，然后通过洗脱等步骤来分离纯化核酸。
这些方法的原理是基于核酸与其他有机物质（如蛋白质、脂质）的不同性质，在不同环境条件下发生反应，从而达到分离和纯化核酸的目的。
其中，碱裂解法和酚/氯仿法通过改变样本的pH值和溶剂的成分，使核酸与其他物质发生相互作用，然后通过沉淀或上清液的分离来分离核酸。
乙醇沉淀法则是利用核酸与乙醇相互作用，形成可沉淀的复合物，然后通过离心沉淀收集纯化的核酸。
硅基法利
用硅基质与核酸的亲和性，将核酸定向结合到硅基上，然后通过洗脱等步骤分离纯化核酸。
核酸的提取技术实验报告
一、实验目的1. 熟悉核酸提取的基本原理和操作步骤。
2. 掌握使用酚/氯仿法提取动物组织中的DNA。
3. 了解DNA提取的纯度和质量检测方法。
二、实验原理核酸（DNA和RNA）是生物体内的重要遗传物质，广泛存在于各种生物细胞中。
核酸提取技术是分子生物学实验的基础，对于基因克隆、基因表达、基因突变等研究具有重要意义。
本实验采用酚/氯仿法提取动物组织中的DNA，通过一系列物理和化学方法使细胞裂解，释放DNA，并最终获得纯化DNA。
三、实验材料与试剂1. 动物组织（如鸡肝、鸡血等）2. 10×TE缓冲液（pH 8.0）3. 2M NaCl溶液4. 95%乙醇5. 70%乙醇6. 酚/氯仿混合液（酚：氯仿=1:1）7. 3M醋酸钠溶液（pH 5.2）8. Tris-HCl缓冲液（pH 8.0）9. 0.1M NaCl溶液10. 氯化钠11. 无水乙醇12. 3M醋酸钠溶液（pH 5.2）13. 1×TE缓冲液（pH 8.0）14. 硅胶柱15. 离心机16. 电子天平17. 移液器18. 烧杯19. 试管20. 玻璃棒21. 紫外分光光度计四、实验步骤1. 准备样品：称取约0.5g动物组织，置于1.5ml离心管中，加入1ml 10×TE缓冲液，使用玻璃棒充分研磨，使组织完全破碎。
2. 加入酚/氯仿混合液：向上述离心管中加入等体积的酚/氯仿混合液，充分混匀，静置5分钟。
3. 分离水相和有机相：将混合液转移至另一离心管中，加入等体积的3M醋酸钠溶液（pH 5.2），充分混匀，静置5分钟。
将离心管置于离心机中，以12,000r/min离心5分钟。
4. 提取DNA：将上层水相转移至另一离心管中，加入等体积的95%乙醇，混匀，静置5分钟。
将离心管置于离心机中，以12,000r/min离心5分钟。
5. 洗涤DNA：弃去上清液，加入1ml 70%乙醇，混匀，静置5分钟。
将离心管置于离心机中，以12,000r/min离心5分钟。
核酸的提取经验及原理总结
核酸的提取经验及原理总结一、常用的核酸提取方法目前常用的核酸提取方法主要包括酚/氯仿法、柱式法、磁珠法和自动提取仪法等，下面对这几种方法进行一一介绍。
1.酚/氯仿法酚/氯仿法是最早用于核酸提取的方法之一、它的基本原理是利用酚的亲脂性和氯仿的亲水性来分离DNA和RNA。
这种方法适用于大规模批量提取核酸的情况。
2.柱式法柱式法是近年来广泛应用于核酸提取的一种方法。
它以硅胶柱或玻璃纤维柱为基质，通过离心等方法将核酸吸附到柱子上，然后通过洗脱步骤将核酸从柱子上洗脱下来。
这种方法操作简便，提取纯度高，适用于少量样品的提取。
3.磁珠法磁珠法是一种基于磁性珠子的核酸提取方法。
磁性珠子上包裹有石墨烯或其他亲核酸物质，可以通过磁场将其中的核酸吸附到珠子表面，然后洗脱并收集核酸。
这种方法操作简便，提取效果好，适用于不同规模的样品。
4.自动提取仪法自动提取仪是一种基于电力或机械力的核酸提取设备。
它具有自动化、高通量、操作简单等优点。
通常采用矽基杂化技术或磁珠法来提取核酸。
这种方法适用于大量样品的高通量提取。
二、核酸提取的基本步骤不管采用哪种提取方法，核酸提取的基本步骤大致相同，包括样品处理、细胞破碎、核酸与蛋白质分离、纯化和沉淀等环节。
1.样品处理：将样品收集并进行初步处理，包括洗涤、离心、冻存等。
根据样品的不同，处理方法也会有所差异。
2.细胞破碎：将细胞或组织中的细胞膜破碎，释放核酸。
常用的破碎方法有冻融、酶解、研磨等。
3.核酸与蛋白质分离：利用酚类或其他化学物质使蛋白质发生沉淀，将净化后的上清液中的核酸收集起来。
这个步骤是核酸提取中最关键的步骤之一4.核酸纯化：通过离心、柱子或其他方法去除杂质，纯化核酸。
5.核酸沉淀：将纯化后的核酸沉淀出来，去除纯化液。
三、核酸提取中的注意事项在进行核酸提取时，有几个方面需要特别注意。
1.质量控制：核酸提取的质量会直接影响到后续实验的结果。
因此，在进行提取之前要确保提取试剂的质量、样品的保存条件等达到要求。
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核译和表达，分子量要比 DNA小得多。RNA为单链分子， 根据RNA的功能，可以分为三 种： 信使核糖核酸（mRNA）； 转运核糖核酸（tRNA）； 核蛋白体核糖核酸（rRNA）。
核酸的理化性质
RNA的纯品都呈白色粉末或结晶，DNA 的纯品都呈白色粉末或结晶， 的纯品都呈白色粉末或结晶 则为白色类似石棉样的纤维状物。 则为白色类似石棉样的纤维状物。 DNA、 、 RNA和核苷酸都是极性化合物，一般都 和核苷酸都是极性化合物， 和核苷酸都是极性化合物 溶于水，不溶于乙醇、氯仿等有机溶剂， 溶于水，不溶于乙醇、氯仿等有机溶剂， 它们的钠盐比游离核酸易溶于水，RNA 它们的钠盐比游离核酸易溶于水， 钠盐在水中溶解度可达40g/L，DNA钠盐 钠盐在水中溶解度可达 ， 钠盐 在水中为10g/L，呈黏性胶体溶液。 在水中为 ，呈黏性胶体溶液。
关于紫外分光光度仪的检测
在核酸分子中，由 在核酸分子中， 于嘌呤碱和嘧啶碱 具有共轭双键体系， 具有共轭双键体系， 因而具有独特的紫 外线吸收光谱， 外线吸收光谱，一 般在260nm左右有 般在260nm左右有 260nm 最大吸收峰， 最大吸收峰，可以 作为核酸及其组份 定性和定量测定的 依据。 依据。
细胞裂解-细胞的裂解方法 细胞裂解
机械方法 化学试剂法 反复冻融法 酶解法
细胞裂解-裂解方法的评价 细胞裂解
含蛋白酶的裂解方法，可以认为是抽提基因组 DNA 的首选 。 高浓度蛋白质变性剂 (如 GIT、GuHCl 等) 的裂 解方法，是抽提 RNA 的首选 。 含 CTAB 的裂解液，几乎成为富含多糖的样品， 如细菌、植物的基因组 DNA 抽提的首选裂解 方法。 SDS 碱裂解法是质粒抽提的首选裂解方法，具 有快速、得率高、几乎无基因组 DNA 污染的 特点。
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核酸提取
提取是使样品中的核酸游离在裂解体系 中的过程。 中的过程。
DNA提取的几种方法
1 浓盐法 2 阴离子去污剂法 4 水抽提法 3 苯酚抽提法
RNA提取
总RNA的试剂盒快速提取 蛋白酶－热酚法 氯化锂法提取总RNA
核酸纯化-方法 核酸纯化 方法
经典的使用苯酚/氯仿抽提的纯化技术 使用离子交换介质的纯化技术 密度梯度离心法 使用吸附介质的纯化技术
核酸纯化-纯化方法评价 核酸纯化
针对不同的用途，选择不同的纯化方法， 任何一种方法他都有其优缺点，在试验 中，没有错误的方法，只是选择的方法 不正确。
核酸纯化-醇的沉淀 核酸纯化
沉淀的原理目的 沉淀剂的选择 沉淀温度的选择
核酸纯化-醇的沉淀-目的 核酸纯化
目的是使核酸从裂解体系中沉淀下来， 从而实现核酸与其它杂质–主要是盐的分 离。
脱氧核糖核酸（ 脱氧核糖核酸（DNA） ）
DNA分子含有生物物 DNA分子含有生物物 种的所有遗传信息， 种的所有遗传信息， 分子量一般都很大 RNA病毒外 病毒外）。 （除RNA病毒外）。 DNA为双链分子 为双链分子， DNA为双链分子，其 中大多数是链状结构 大分子， 大分子，也有少部分 呈环状结构。 呈环状结构。
关于电泳检测
观察琼脂凝胶中DNA的 最简单方法是利用荧光 染料溴化乙锭进行染色。 该物质含有一个可以嵌 入DNA的堆积碱基之间 的一个平面基团，这个 基团的固定位置及其与 碱基的密切接近，导致 染料与DNA结合并呈现 荧光，其荧光产率比游 离染料溶液有所增加。
核酸中杂质的去除
肝糖元、淀粉及粘多糖 蛋白质的除去 不同类型核酸的分离 同类核酸的分离
核酸中除杂质核酸中除杂质 蛋白质的除去
①加入去污剂如硫酸十二脂钠，从提取到分离 纯化各阶段均可反复使用此法。去污剂与氯仿 法或苯酚法结合使用，效果更加理想。②氯仿戊醇或辛醇对提取液摇荡抽提，蛋白质在氯仿水界面形成凝胶，离心后除去，核酸留在水溶 液中。此法在分离纯化中也常反复使用。③苯 酚水溶液抽提，在对氨基水杨酸等阴离子化合 物存在下，DNA或RNA都可以进入水相，蛋白 质则沉淀于酚层，然后取水相加入乙醇或2-乙 氧基乙醇沉淀RNA或DNA，残余的酚可用葡聚 糖凝胶G-10或G-25除去。
细胞裂解-样品与裂解液的比例 细胞裂解
裂解液的用量原则是：确保能彻底裂解 样品，同时使裂解体系中核酸的浓度适 中。浓度过低，将导致沉淀效率低，影 响得率；浓度过高，去除杂质的过程复 杂且不彻底，导致纯度下降。另外，裂 解液的用量是以样品中蛋白质的含量为 基准的，而不是以核酸含量为基准，这 一点务必牢记。
核酸纯化-醇的沉淀-沉淀剂 核酸纯化
醇沉淀使用异丙醇还是乙醇，我们没有发现这 醇沉淀使用异丙醇还是乙醇， 二者对质量有大的影响，虽然许多人“发现” 二者对质量有大的影响，虽然许多人“发现” 乙醇沉淀的核酸纯度更高。 乙醇沉淀的核酸纯度更高。异丙醇沉淀的核酸 比较紧凑，帖壁紧，颜色不是很白； 比较紧凑，帖壁紧，颜色不是很白；乙醇沉淀 的核酸比较蓬松，容易从壁上移动， 的核酸比较蓬松，容易从壁上移动，颜色比较 白。这是现象，提示结论：异丙醇沉淀的核酸 这是现象，提示结论： 不容易丢掉，但比较难洗涤。因此， 不容易丢掉，但比较难洗涤。因此，少量核酸 用异丙醇沉淀 ，大量核酸用乙醇沉淀 。
细胞裂解
裂解原理 细胞的裂解方法 裂解方法的评价 样品与裂解液的比例
细胞裂解-裂解原理 细胞裂解
经典的裂解液几乎都含有去污剂 和盐 。盐的 作用，除了提供一个合适的裂解环境 ，还包括 抑制样品中的核酸酶在裂解过程中对核酸的破 坏 、维持核酸结构的稳定 等。去污剂则是通 过使蛋白质变性，破坏膜结构及解开与核酸相 连接的蛋白质，从而实现核酸游离在裂解体系 中。裂解体系中还可能加入蛋白酶，利用蛋白 酶将蛋白质消化成小的片段，促进核酸与蛋白 质的分开，同时，也便于后面的纯化操作以及 获得更纯的核酸。
核酸纯化-醇的沉淀-温度 核酸纯化
如果核酸抽提的起始样品是杂质比较多 时，原则上不要使用低温沉淀。低温沉 淀能提高沉淀效率：当核酸浓度很低时， 效果明显；当核酸浓度比较高时，效果 不明显，但却会导致杂质的大大增加。
核酸纯化-核酸的洗涤 核酸纯化
洗涤目的方法 首先一定要将沉淀悬浮起来； 第二就是要控制一定的时间，尤其是当 核酸沉淀比较大时 (使核酸沉淀最终蓬 松)； 第三是少量多次； 第四则是去上清要彻底。
核酸纯化-核酸的溶解 核酸纯化 核酸的溶解
其中 RNA 以水为主，DNA 则多以弱碱 性的 Tris 或者 TE 溶解。
核酸纯化-核酸保存 核酸纯化
核酸在保存中的稳定性，与温度成反比， 与浓度成正比。一般的我们选择，-20℃ 或70℃ 保存的稳定。如果温度不合适， 保存中核酸发生降解或者消失，首要原 因是酶残留导致的酶解，第二个原因则 是保存核酸溶液的 pH 值不合适导致的水 解 。还有一个不为人重视的，就是 EP 管对核酸的影响。
核酸提取经验及原理总结
主办单位： 主办单位：螺旋网 主讲人： 主讲人：wsuquan 时 间：2008.4.21
主要内容
一、核酸的发现 、核酸的分类和功能 、 核酸的理化性质 二、细胞裂解 三、核酸提取 四、核酸纯化 五、核酸检测 六、核酸除杂质
核酸的发现 核酸是1869年米 核酸是 年米 歇尔(F.Miescher)在脓液 歇尔 在脓液 的白细胞中发现的， 的白细胞中发现的，他 当时称之为核素。 当时称之为核素。阿尔 特曼(R.Altmann)于1889年 特曼 于 年 认识其酸性后， 认识其酸性后，定名为核 酸。核酸分为核糖核酸 (RNA)和脱氧核糖核酸 和脱氧核糖核酸 (DNA)两大类。 两大类。 两大类
核酸纯化-核酸的浓缩 核酸纯化
应用最广的核酸浓缩法是乙醇沉淀法。 在中等浓度单价阳离子存在下，加入一 定量的乙醇后，所形成有核酸沉淀可经 离心而回收，甚至对低至pg量的DNA或 RNA，也可定量回收。回收的核酸可按 所需浓度，再溶于适当的缓冲液中。
核酸质量的检测问题
关于紫外分光光度仪的检测 关于电泳检测
核酸中除杂质-肝糖元、淀粉及粘多糖 核酸中除杂质
①取材前尽量减少组织中多糖的含量，如先使 动物饥饿数天然后杀死，可使细胞内肝糖元大 大减少。②加入淀粉酶，将大分子多糖分解为 小分子，在以后纯化步骤中逐渐被除去。③在 浓磷酸盐存在下，以2-甲氧基乙醇抽提核酸提 取液，使多糖溶于下层水相，核酸在上面有机 层中。④以钙盐沉淀DNA，再以草酸钾处理， 使之形成DNA钾盐回收，然后用离子交换法吸 附DNA，使之与多糖分离。
核酸中除杂质核酸中除杂质 不同类型核酸的分离
在RNA制品中除去DNA，苯酚水溶液抽提 是较有效和常用的方法 。 在DNA中加核糖核酸酸酶选择地破坏RNA， 是除RNA比较有效的方法 。
核酸中除杂质核酸中除杂质 同类核酸的分离
DNA混合物的分离：主要是变性或降解 的DNA和天然的分离。 RNA混合物的分离经过提取的初步纯化 的RNA制品中含有各类RNA和某些已降 解的RNA混杂物。进一步纯化时，多应 用柱层析、梯度离心及逆流分溶等方法。