4α-丁酸萘酚酯酶染色液

1.检验原理

在碱性条件下，丁酸萘酚被细胞内酯酶水解，产生-萘酚，与重氮盐偶联生成不溶性有色沉淀，定位于细胞浆中。本染色液对酯酶染色无特异性，故又称作非特异性酯酶染色液。2.主要组成成分

组成主要成分

2.1、固定剂（A液）甲醛

2.2、偶氮溶液（B液）副品红

2.3、亚硝酸钠溶液（C液）亚硝酸钠

2.4、磷酸盐缓冲溶液（D液）磷酸盐

2.5、-丁酸萘酚溶液（E液）-丁酸萘酚

2.6、甲基绿溶液（F液）甲基绿

2.7、NaF溶液氟化钠

3.储存条件及有效期

有效期：一年（十二个月）。

储存条件：本试剂盒应储存于2～8℃低温环境。

4.样本要求

新鲜的骨髓细胞涂片及血液细胞涂片。

5.检验方法

5.1 工作液配制：

5.1.1 浸染工作液配制（一份浸染工作液量为42.2ml,至少可同时放置8-10张涂片）：5.1.1.1、重氮盐溶液的准备：B液0.1ml与C液0.1ml彻底混匀，静置2分钟；

5.1.1.2、染缸（自备染液）内加入D液40ml;

5.1.1.3、将重氮盐溶液倒入染缸内，混匀；

5.1.1.4、再加E液2ml入染缸内，轻轻混匀。

B液C液D液E液 NaF液

A染缸0.1ml 0.1ml 40ml 2ml ——

B染缸（抑制试验）0.1ml 0.1ml 40ml 2ml 60mg

5.1.2 滴染工作液配制（一份滴染工作液量为2ml）

使用器材：一次性塑料试管、微量移液器、一次性吸嘴、滴管。

操作：加B液10ul、C液10ul 、混匀，静置1分钟；再加D液4ml,E液200ul混匀（NaF 抑制试验加NaF液1滴）。

B液C液D液E液NaF液

10ul

10ul

4ml

200ul A管2ml -

B管(抑制试验)2ml 1滴

注：100Tests中的20mlD液（浓缩缓冲液）用蒸馏水稀释成200ml缓冲液使用。

5.2. 染色步骤：

5.2.1、干燥涂片，滴加A液固定涂片30秒，蒸馏水冲洗，待干或滤纸吸干；

5.2.2、滴加或浸入工作液布满涂片室温下60分钟（如冬天室温低，需用37℃孵育），蒸馏水冲洗，待干或滤纸吸干；

5.2.3、F液复染1～2分钟，蒸馏水冲洗，待干后镜检。

6．临床意义

6．1.阳性:单核细胞和组织细胞呈强阳性,但可被氟化钠抑制;巨核细胞及血小板呈阳性;早幼粒细胞白血病时早幼粒细胞可阳性,且不受氟化钠抑制.

6．2.弱阳性及阴性:粒细胞,淋巴细胞一般为阴性,若有弱阳性也可被氟化钠抑制.

6．3.临床鉴别:主要用于鉴别急性单核细胞性白血病与急性粒细胞白血病,前者NSE阳性,且受氟化钠(NaF)抑制;而后者NSE阴性,若有阳性也不受氟化钠抑制.

7.注意事项

7.1、5Tests只限滴染使用。

7.2、使用前应恢复室温，用前请摇匀试剂；B、C液请充分混匀，所用容器必须洁净。

7.3、标本要新鲜。

7.4、工作液配制后应及时使用，以免影响效果。

5、每次试剂使用后，请迅速盖好密封保存，以免挥发及影响效果。

7.6、本品应由专业人士使用及进行结果的判读。

7、使用前应详细阅读使用说明书及产品包装标识，在有效期内使用，并做好个人卫生防护。

7.8、生产批号、有效期见外包装。

7.9、用后应按医院或环保部门要求处置废弃物。

8.参考文献

8.1、中华人民共和国卫生部医政司.全国临床检验操作规程〔M〕.第3版.南京：东南大学出版社，2006

8.2、Gradwohl’s Clinical Laboratory Methods And Diagnosis,8th,ed.