细胞化学染色

酸性磷酸酶（ACP）染色
【原理】
抗酒石酸酸性磷酸酶染色： 用相同方法制备两份基质液，一份加入适量的L-
酒石酸（左旋酒石酸）,另一份不加酒石酸。取两张相
同标本的涂片，分别用这两种不同的基质液做酸性磷 酸酶染色。 如果血细胞内的酸性磷酸酶耐L-酒石酸，两张涂 片均呈阳性；如不耐L-酒石酸，不加L-酒石酸的涂片
酸性酯酶(酸性α- 醋酸萘酚酯酶 ) α- 醋酸萘酚酯酶 中性酯酶 醋酸AS-D萘酚酯酶
pH值不同
非特异性酯酶
单核巨噬细胞类
碱性酯酶( α-丁酸萘酚酯酶 )
（一）氯乙酸AS-D萘酚酯酶(NAS-DCE)染色 【原理】
血细胞内的氯乙酸AS-D萘酚酯酶水解基质液中的 氯乙酸AS-D萘酚，产生AS-D萘酚，进而与基质液中的 重氮盐偶联形成不溶性的有色沉淀，定位于细胞质内
• 固定有物理法与化学法，
• 物理法为干燥和火焰固定，
• 化学法最常用的是甲醛、乙醇、 丙酮和醋酸等。
（二）显示
1、偶氮偶联法：利用人工合成的酶底物，
在酶作用下，产生分解产物，再与重氮盐
结合引起偶氮偶联，使其形成不溶性的偶
氮色素，以此证明酶的存在。
2、联苯胺法：粒细胞和单核细胞中的过氧 化物酶作用于过氧化氢，释放新生态氧， 使无色的联苯胺形成蓝色沉淀。
酶所在的部位。
本试验常用的重氮盐为坚牢紫酱GBC，形成的有色
沉淀为红色。
（一）氯乙酸AS-D萘酚酯酶(NAS-DCE)染色 【临床意义 】
1.急性粒细胞白血病 原始粒细胞呈阳性或阴性。 早幼粒细胞呈强阳性。 2.急性早幼粒细胞白血病
3.急性单核细胞白血病
乎呈阴性。
原始单核及幼稚单核细胞几
原始粒细胞及早幼粒细胞 白血
双醛基 + 无色品红
(雪夫试剂)
（-CHO-CHO）
紫红色化合物
（ 定位于胞浆中）
称过碘酸-雪夫（PAS）反应，以前又称为糖原染色
【正常血细胞的染色反应 】
过碘酸-雪夫（PAS）反应
【正常血细胞的染色反应 】
1、粒系：原粒（-），以后阶段（+） 且越成熟阳性越强，阳性率达67.2％， 嗜酸（浆）、嗜碱（颗粒） （+） 2、淋巴系：原淋（+）或（-），成熟（+） 阳性率10-50％，多20％ ； 3、红系：呈（-）； 4、巨核细胞：呈强（+）。 5、单核系：分化差原单（-），其他弱（+）。
【临床意义 】
1、鉴别M6与巨幼细胞性贫血：
M6：幼红细胞 PAS 强（+），积分率明显↑。
巨幼贫、再障：幼红细胞（-）。 2、鉴别三种急性白血病 急粒：（-）。 急淋：强（+）， 急单：（+），强弱不定。 3、鉴别戈谢病和尼曼-匹克病 戈谢细胞 强（+），
尼曼-匹克细胞呈（-～弱+）。
糖原染色（PAS染色） A、AML-M6（+）； B、MA（-）
呈阳性反应，而加L-酒石酸呈阴性反应。
酸性磷酸酶（ACP）染色
【正常血细胞的染色反应 】
粒细胞、单核细胞、淋巴细胞、巨核细胞、血小板、
浆细胞、巨噬细胞均呈阳性。
酸性磷酸酶（ACP）染色
【临床意义 】
1. 诊断多毛细胞白血病
多毛细胞呈阳性（常呈强阳性），阳性反应不被L-酒 石酸抑制。
CLL的淋巴细胞和恶性淋巴瘤细胞ACP染色也可呈阳性， 但可被L-酒石酸抑制。
项目三 细胞化学染色
第一节
定义
概
述
细胞化学染色
细胞学和化学相结合而形成的一门科学， 是以细胞形态学为基础，结合运用化学反应
的原理对血细胞内的各种特定的化学成分
(如酶类、酯类、铁、蛋白质、核酸等)，
作定性、定位、半定量分析的方法。
原粒
原单
原淋
POX 染 色
+
弱+
-
血细胞化学染色流程
• （一）固定
4.急性粒-单核细胞白血病
呈阳性，原始单核及幼稚单核细胞呈阴性。 5.急性淋巴细胞白血病和急性巨核细胞白血病 病细胞均呈阴性。
（一）氯乙酸AS-D萘酚酯酶(NAS-DCE)染色 【正常血细胞的染色反应 】
常用细胞化学染色
过氧化物酶染色 （POX） 苏 丹 黑 染 色（SBB）
酯 酶 染 色（SE、NSE）
糖原染色（过碘酸-雪夫反应）（PAS） 中性粒细胞碱性磷酸酶染色（NAP） 酸性磷酸酶染色（ACP） 铁 染 色
过碘酸-雪夫（PAS）反应 【原理】
含乙二醇基的多糖
（-CHOH-CHOH）
过碘酸
• 3、普鲁士蓝法：细胞内、外铁与酸性亚铁 氰化钾作用，形成蓝色亚铁氰化铁沉淀。 • 4、雪夫反应：过碘酸氧化细胞内糖类中乙 二醇基形成乙醛基，醛基与雪夫试剂作用， 使无色品红形成红色沉淀。 • 5、金属沉着法 • 其他尚有物理学方法，如脂溶性染料染色 （显示脂质）、荧光显示、放射自显影以 及体外活体染色亦常用于临床血液细胞学 诊断。
2. 鉴别戈谢细胞和尼曼-匹克细胞 前者阳性，不被L-酒石酸抑制；后者阴性。 3. T淋巴细胞和B淋巴细胞的鉴别
T淋巴细胞ACP呈阳性反应；
B淋巴细胞ACP呈阴性或弱阳性反应。
多毛细胞白血病酸性磷酸酶染色 多毛细胞呈阳性反应
酯酶染色
中性粒细胞类
根据 酯酶 特异 性高 低分 为:
特异性酯酶(氯乙酸AS-D萘酚酯酶)
PAS染色A、CLL；B、ALL 原始、幼稚淋巴细胞均阳性，呈粗颗粒状阳性 幼稚红细胞 阴性
酸性磷酸酶（ACP）染色
【原理】
偶氮偶联法：
血细胞内的酸性磷酸酶在酸性（pH 5.0）条件下
水解基质液中的磷酸萘酚AS-BI，释放出萘酚AS-BI， 后者与基质液中的重氮盐偶联形成不溶性的有色沉淀， 定位于细胞质内酶所在的部位。
正常血细胞PAS染色 1.原始粒细胞（-） 2.早幼粒细胞（+） 3.中性中幼粒细胞（++） 4.中性晚幼粒wenku.baidu.com胞（+++）5.中性杆状核粒细胞（++++） 6.中性分叶核粒细胞（++++） 7.嗜碱性粒细胞（+++）8.嗜酸性粒细胞（+++） 9.单核细胞（±） 10.淋巴细胞（++++）
过碘酸-雪夫（PAS）反应
• （三）细胞化学定量
• 粗略估量，以染色反应的强弱，受色的深浅， 人为地区别为阴性和各种程度的阳性。 • 百分法，只能反映细胞阳性率，不能反映受 色强弱。 • 积分法，是常用的半定量法，将等级估量与 百分率相结合它既反映了细胞阳性率的高低， 又反映了细胞受色的强弱。
• 下面介绍几种常用的细胞化学染色方 法 • 这些方法学在白血病的鉴别诊断上具 有重要意义。