白色念珠菌与抑菌效力检查方法
抑菌类产品抑菌性能测试方法
其他菌种
其他菌种
白念、铜绿
液体、凝胶、固体 液体、凝胶、固体 液体
0.5mL混合液 +5mLPBS 对照组用染菌载片
5×105~5×106
直接取样
0.5mL混合液 +4.5mLPBS
对照组是同材质不
/
含抑菌成分的样品
5×105~5×106
1×104~9×1 04
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20min 20min30s 21min 21min30s 27min 27min30s
WS650：产品测试浓度样液与加入其中的菌 作用完成后，直接取样（即不做稀释）于平皿 中作活菌菌落计数
QB2738：取试验菌与样品混合液0.5mL加 入到含4.5mL经灭菌的PBS试管中
0 2 载 体 抑 菌
抑菌类产品抑菌性能测试方法
➢ GB15979-2002《一次性使用卫 生用品卫生标准》—附录C4、C5 ➢ QB/T 2738-2012《日化产品抗 菌抑菌效果的评价方法》 ➢ 消毒技术规范 ➢ WS/T 650-2019《抗菌和抑菌 效果评价方法》
液体类
凝胶类
固体类
适用产品性状
15979 2738 消规 650
常用菌株
1
2
3
金黄色葡萄球菌 ATCC6538
大肠杆菌8099 白色念珠菌ATCC10231
0 1 悬 液 法
浓度为5×106~4.5×107cfu/mL
作用至一定时间后，吸取0. 5 mL样液至含5 mL PBS的试管内
滴加0.1mL菌悬液
2min 5min 5mL样液 2min 5min
10min 20min
作用至一定时间后，将样片夹至含5 mL PBS的试管内
白色念珠菌病的检测方法及抗真菌药物的研究进展
白色念珠菌病的检测方法及抗真菌药物的研究进展摘要：白色念珠菌感染的发生率极高，对人体的危害极大。
及时的检测白色念珠菌，对于患者的治疗十分关键。
白色念珠菌感染的主要治疗方式为药物治疗，主要的药物有：唑类、多烯类、棘白素类、氟胞嘧啶。
但现有的抗真菌药物耐药情况严重，需开发新药物改善现状。
关键字：白色念珠菌；抗真菌药物；检测方法20世纪70年代以来，由于艾滋病大流行和现代医学的一些进步（包括大规模化疗、器官移植、免疫抑制和植入式医疗设备）。
真菌感染大幅度增加，对人类健康造成了很大威胁[1]。
白色念珠菌是一种常见的真菌病原体。
白色念珠菌是一种机会性致病真菌，通常存在于正常人口腔，上呼吸道，肠道及阴道，一般在正常机体中数量少，不引起疾病，当机体免疫功能或一般防御力下降或正常菌群相互制约作用失调，则本菌大量繁殖并改变生长形式（芽生菌丝相）侵入细胞引起疾病[2]。
白色念珠菌病对人体造成不可逆的损害，严重威胁人体健康。
及时的检测到白色念珠菌，在感染早期进行治疗，合理的应用抗真菌药物，积极有效的控制白色念珠菌病。
现将白色念珠菌的检测方法以及抗真菌药物的研究进展展开综述，旨在为临床控制白色念珠菌病提供科学依据。
1.检测方法白色念珠菌病的伤害性大、病死率高。
选择合适的检测方法，及时准确的诊断深部真菌，有效的发出检验报告对临床诊断尤为重要。
白色念珠菌的检测方法有直接镜检、白色念珠菌培养、组织病理学检测、血清学方法、PCR技术、肽核酸荧光原位杂交技术（PNA-FISH）和靶向分子直接检测等[3]。
直接镜检、白色念珠菌鉴定以及组织病理学检测是较为传统的检测方法。
其中白色念珠菌培养鉴定（Vitek-2 Compact型全自动微生物分析仪、基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MS））将培养后的真菌进行检测，可明确病原菌的名称。
是诊断白色念珠菌病的金标准。
但存在培养时间较长这一缺陷，对于临床诊断有一定的影响。
血清学方法主要G试验。
白色念珠菌与抑菌效力检查方法
表
类别
产品分类
药品
1 类 注射剂、其他非肠道制剂，包括乳剂、 注射剂、其他非肠道制剂，包括乳剂、 制剂、 耳用 制剂、无菌鼻用制剂及眼用制剂 2 类 局部给药制剂、非灭菌鼻用制剂及用于 局部给药制剂、 黏膜的乳剂 3类 口服非固体制剂（非抗酸制剂） 口服非固体制剂（非抗酸制剂） 4类 非固体抗酸制剂
抑菌剂效力测定 概述 1、抑菌剂效力检查法系用于测定灭菌、 、抑菌剂效力检查法系用于测定灭菌、 非灭菌制剂中抑菌剂的活性， 非灭菌制剂中抑菌剂的活性，以评价最终 产品的抑菌效力， 产品的抑菌效力，同时也可用于指导生产 企业在制剂研发阶段抑菌剂的确定。 企业在制剂研发阶段抑菌剂的确定。 2、如果药物本身不含有充分的抗菌活性， 、如果药物本身不含有充分的抗菌活性， 那么应根据制剂特性（如水溶液制剂） 那么应根据制剂特性（如水溶液制剂）添 加适宜的抑菌剂， 加适宜的抑菌剂，以防止制剂在正常储存 和使用过程中可能发生微生物污染和大量 繁殖尤其多剂量包装的制剂， 繁殖尤其多剂量包装的制剂，避免因药物 微生物污染及对患者造成伤害。 微生物污染及对患者造成伤害。
2、如平板上生长的菌落与上述菌落形态特 、 征相符或疑似，应挑选2～ 个菌落分别接 征相符或疑似，应挑选 ～3个菌落分别接 种至念珠菌显色培养基平板上，培养24～ 种至念珠菌显色培养基平板上，培养 ～ 48小时（必要时延长至 小时）。若平 小时（ 小时）。 小时 必要时延长至72小时）。若平 板上无绿色或翠绿色的菌落生长， 板上无绿色或翠绿色的菌落生长，判供试 品未检出白色念珠菌。 品未检出白色念珠菌。 3、若平板上生长的菌落为绿色或翠绿色， 、若平板上生长的菌落为绿色或翠绿色， 挑取相符或疑似的菌落接种于1%吐温 吐温80 挑取相符或疑似的菌落接种于 吐温 玉米琼脂培养基上，培养24～ 小时 小时。 玉米琼脂培养基上，培养 ～48小时。 取培养物进行染色，镜检及芽管试验。 取培养物进行染色，镜检及芽管试验。
妇科念珠菌感染3种微生物检验方法的效果观察研究
妇科念珠菌感染3种微生物检验方法的效果观察研究妇科念珠菌感染是女性常见的妇科疾病之一，念珠菌是一种常见的真菌，在女性生殖道中也常见。
念珠菌感染主要表现为白色凝块样分泌物增多、阴道瘙痒、灼热感或排尿疼痛等症状。
为了准确诊断和治疗妇科念珠菌感染，需要进行微生物检验，目前常用的方法有湿片镜检、培养法和PCR技术。
湿片镜检是最常用的念珠菌检测方法之一。
它通过在显微镜下观察样本中的真菌形态和特征，以确诊念珠菌感染。
湿片镜检简便快捷，可以直接观察样品中的真菌形态，对初诊的念珠菌感染有较高的敏感性和特异性。
通过湿片镜检，可以迅速确定感染的念珠菌种类和数量，为进一步治疗提供依据。
培养法是常用的细菌和真菌检测方法之一，它通过将患者样本培养在特定的培养基上，利用真菌的生长特性来确定是否存在念珠菌感染。
培养法具有较高的特异性和准确性，可以检测到低浓度的念珠菌。
但是培养法的缺点是时间较长，一般需要3-7天才能得到结果，给治疗带来了一定的延迟。
PCR技术是一种高灵敏度的念珠菌分子生物学检测方法。
它通过特异性引物和荧光探针来扩增和检测念珠菌的特定基因序列，可在短时间内获得结果。
PCR技术具有高度灵敏度和特异性，可以检测到非常低浓度的念珠菌，对念珠菌感染的早期诊断具有重要意义。
但是PCR技术的操作复杂，设备要求较高，而且相对于湿片镜检和培养法来说，成本较高。
经过观察研究，我们发现湿片镜检、培养法和PCR技术在诊断妇科念珠菌感染方面各有优势。
湿片镜检具有操作简便、结果迅速的优点，适用于临床初诊和快速筛选。
培养法具有较高的特异性和准确性，可以检测到低浓度的念珠菌，对感染的念珠菌种类和数量有更准确的判断。
PCR技术具有高灵敏度和特异性，可以用于早期诊断和监测治疗效果。
在临床实践中，根据患者病情和实验室条件选择合适的检测方法，以提高准确诊断率和治疗效果。
3类产品抑菌效力检查方法
1 检查内容及步骤 1.1 菌种确认1.2 培养基确认确认人及日期：复核人及日期：6.3培养条件确认6.3.1本检查法中细菌、控制菌的培养温度为 ℃，真菌的培养温度为 ℃。
6.3.2培养箱确认确认人及日期： 复核人及日期：6.4样品来源确认确认人及日期：复核人及日期：6.5操作环境确认为的洁净区域以内，局部（操作台）为级并单向流空气。
确认人及日期：复核人及日期：7 培养基的适用性检查7.1抑菌剂效力测定用培养基应进行培养基的适用性检查，包括成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应检查。
7.2菌种试验所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。
铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）〔CMCC(B)10 104〕大肠埃希菌（Escherichia coli）〔CMCC(B) 44 102〕金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）〔CMCC(B)26 003〕白色念珠菌（Candida albicans）〔CMCC(F) 98 001〕黑曲霉（Aspergillus niger）〔CMCC(F) 98 003〕7.3菌液制备7.3.1接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物至胰酪胨大豆肉汤培养基中，30～35℃培养18～24小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中，20～25℃培养24～48小时。
上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为50～100cfu的菌悬液。
接种黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基中，20～25℃培养5～7天，加入3～5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。
然后，采用适宜方法吸出孢子悬液至无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数50～100cfu的孢子悬液。
抑菌剂效力测定
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一、概述
抑菌剂效力检查法系用于测定灭菌、非灭菌制剂中抑菌剂的活性，以 评价最终产品的抑菌效力，同时也可用于指导生产企业在制剂研发阶 段抑菌剂的确定。
如果药物本身不含有充分的抗菌活性，那么应根据制剂特性（如水溶 液制剂）添加适宜的抑菌剂，以防止制剂在正常储存和使用过程中可 能发生微生物污染和大量繁殖尤其多剂量包装的制剂，避免因药物微 生物污染及对患者造成伤害。
抑菌剂效力测定
举例
1、氯化钠注射液、碳酸氢钠注射液不含抑菌剂加入菌从初始到 6h就开始无限增加，不具抑菌力，抗病毒口服液从初始到24 h对 数值无变化，72h后明显降低，具一定的抑菌力。
2、呋麻滴鼻液、硫糖铝混悬液、阿昔洛韦滴眼液、鲸脂滴耳液、 洁尔阴洗液从初始值到7天后计算值大于1.0 lg降低值，从初始值 到14天后计算值大于3.0 lg,具较强的抑菌效力。
取白色念珠菌、黑曲霉孢子各50～100cfu，分别注入无菌平皿中， 立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿， 混匀，凝固，置20～25℃培养72小时，计数；
同时，用对应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。
结果判定
被检培养基的菌落数与对照培养基菌落数相比大于70%，菌落 形态大小应与对照培养基上的菌落一致。判该培养基的适用性 检查符合规定。
菌液的制备同控制菌培养基适用性检查
培养基的适用性检查
适用性检查
取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌各50～100cfu，分 别注入无菌平皿中，立即倾注胰酷胨大豆琼脂培养基，每株试验菌 平行制备2个平皿，混匀，凝固，置30～35℃培养48小时，计数；
抑菌效果的检测方法
抑菌效果的检测方法
另外，我们还可以从化学角度来考虑。
常见的抑菌效果检测方法包括最小抑菌浓度法和扩散法。
最小抑菌浓度法是将不同浓度的待测物溶液与一定数量的细菌接种在琼脂培养基上，培养一段时间后观察最低浓度的待测物能够抑制细菌生长。
扩散法是将待测物溶液加在琼脂培养基上，待其凝固后在琼脂上打孔，然后在孔中加入一定数量的细菌液，培养一段时间后观察抑菌圈的直径来评价抑菌效果。
此外，还可以从临床角度考虑。
在医药领域，抑菌效果的检测方法包括在体外和体内实验。
在体外实验中，可以使用培养皿法或微量稀释法来评价抗菌药物的抑菌效果。
在体内实验中，可以通过动物模型来评价抗菌药物的疗效和抑菌效果。
综上所述，抑菌效果的检测方法涉及微生物学、化学和临床等多个领域，不同的方法各有优劣，选择合适的方法取决于具体的实验要求和研究目的。
希望以上信息能够对你有所帮助。
抑菌剂效力检查法指导原则
抑菌剂效力检查法指导原则抑菌剂效力检查法系用于测定灭菌、非灭菌制剂中抑菌剂的活性，以评价最终产品的抑菌效力，同时也可用于指导生产企业在制剂研发阶段抑菌剂的确定。
如果药物本身不具有充分的抗菌活性，那么应根据制剂特性（如水溶液制剂）添加适宜的抑菌剂，以防止制剂在正常贮藏和使用过程中可能发生的微生物污染和繁殖，尤其是多剂量包装的制剂，避免因药物微生物污染及变质而对患者造成伤害。
在药品生产过程中，抑菌剂不能用于替代药品生产的GMP管理，不能作为非灭菌制剂降低微生物污染的唯一途径，也不能作为控制多剂量包装制剂灭菌前的生物负载的手段。
所有抑菌剂都具有一定的毒性，制剂中抑菌剂的量应为最低有效量。
同时，为保证用药安全，最终包装容器中的抑菌剂有效浓度应低于对人体有害的浓度。
要求具有抗菌活性的制剂（参见制剂通则），不管是添加的抑菌剂，还是药物本身具有抗菌活性，在药物研发阶段，均应确认其抗菌效力。
抑菌剂的抗菌效力在贮存过程中有可能因药物的成分或包装容器等因素影响而提高或降低，因此，应验证最终容器中的抑菌剂效力在效期内不因贮藏条件而降低。
本试验方法和抑菌剂抑菌效力判断标准用于包装未启开的成品制剂。
产品分类需要进行本试验的药品分为四类（见表1），以便标准的制定和执行。
表1 产品分类类别 药品1 类 注射剂、其他非肠道制剂，包括乳剂、耳用制剂、无菌鼻用制剂及眼用制剂2 类 局部给药制剂、非灭菌鼻用制剂及用于黏膜的乳剂3 类 口服制剂（非抗酸制剂）4 类 抗酸制剂培养基培养基的制备1.胰酪胨大豆肉汤培养基酪蛋白胨 17.0g 磷酸二氢钾 2.5g大豆木瓜蛋白酶消化物 3.0 g 氯化钠 5.0g葡萄糖 2.5g 水 1000ml 除葡萄糖外，取上述成分混合，微温溶解，调pH约7.0，煮沸，加入葡萄糖溶解后，摇匀，滤清，调节pH使灭菌后为7.3±0.2，分装，灭菌。
2. 胰酪胨大豆琼脂培养基除上述胰酪胨大豆肉汤培养基的处方和制法，加入14.0g琼脂，调pH使灭菌后为7.3±0.2，分装，灭菌。
白色念珠菌与抑菌效力检查方法-幻灯片(2)
适用性检查
取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞 菌各50～100cfu，分别注入无菌平皿中，立即 倾注胰酷胨大豆琼脂培养基，每株试验菌平行 制备2个平皿，混匀，凝固，置30～35℃培养 48小时，计数；取白色念珠菌、黑曲霉各50～ 100cfu，分别注入无菌平皿中，立即倾注沙氏 葡萄糖琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平 皿，混匀，凝固，置20～25℃培养72小时，计 数；同时，用对应的对照培养基替代被检培养 基进行上述试验。
采用对数值计算简便、结果准确、易于判断。
5、若上述疑似菌为非革兰阳性菌，显 微镜未见厚膜孢子、假菌丝、芽管， 判供试品未检出白色念珠菌。
培养基
1、胰酪胨大豆肉汤培养基 2、胰酪胨大豆肉汤培养基 3、 沙氏葡萄糖肉汤培养基
培养基的适用性检查 菌种
铜绿假单胞菌pseudomonasaeruginosa） 金黄色葡萄球菌（staphycococcus） 白色念球菌（Candida albicans）] 黑曲霉（Aspergillus niger） 大肠埃希菌（Escherichia Coli） 菌液的制备同控制菌培养基适用性检查
存活菌数测定
由于供试品中含有抑菌活性，所以菌数 测定方法应进行验证。根据菌数测定结 果，计算1ml(g)供试品各试验菌所加的 菌数及各间隔时间的菌数，并换算成lg 值。
测定细菌用胰酷胨大豆琼脂培养基，测定真菌 用沙氏葡萄糖琼脂培养基
根据产品类型，在规定的接种时间，分别从上 述每个容器中取供试ml(g)，用pH7.0无菌氯化 钠-蛋白胨缓冲液稀释成1：10、1：102、1： 103等稀释级。
2、呋麻滴洗液从初始值到7天后计算值大于 1.0 lg降低值，从初始值到14天后计算值大于3.0 lg,具较强的抑菌效力。
白色念珠菌的几种快速鉴定方法
白色念珠菌的几种快速鉴定方法白色念珠菌是一种常见的真菌，它可以引起多种疾病，包括皮肤感染、肺部感染和血液感染等。
因此，快速鉴定白色念珠菌对于临床诊断和治疗非常重要。
以下是几种快速鉴定白色念珠菌的方法。
1. MALDI-TOF质谱法MALDI-TOF质谱法是一种快速、准确的微生物鉴定方法。
它可以通过分析微生物的蛋白质质谱图谱来确定微生物的种类。
对于白色念珠菌的鉴定，MALDI-TOF质谱法可以在几分钟内完成，准确率高达99%以上。
因此，它已经成为临床常用的白色念珠菌鉴定方法之一。
2. PCR扩增法PCR扩增法是一种基于DNA序列的鉴定方法。
它可以通过扩增微生物的DNA片段来确定微生物的种类。
对于白色念珠菌的鉴定，PCR扩增法可以在几小时内完成，准确率高达95%以上。
因此，它也是临床常用的白色念珠菌鉴定方法之一。
3. 细胞培养法细胞培养法是一种传统的微生物鉴定方法。
它可以通过将微生物培养在适当的培养基上来确定微生物的种类。
对于白色念珠菌的鉴定，细胞培养法可以在几天到几周的时间内完成，准确率高达90%以上。
虽然它的速度比较慢，但它仍然是临床常用的白色念珠菌鉴定方法之一。
4. 免疫学方法免疫学方法是一种基于抗体或抗原的鉴定方法。
它可以通过检测微生物的特定抗体或抗原来确定微生物的种类。
对于白色念珠菌的鉴定，免疫学方法可以在几小时到几天的时间内完成，准确率高达90%以上。
因此，它也是临床常用的白色念珠菌鉴定方法之一。
综上所述，以上几种方法都是快速鉴定白色念珠菌的有效方法。
在临床实践中，医生可以根据具体情况选择合适的方法进行鉴定。
同时，为了提高鉴定的准确率，医生还应该结合临床症状、病史和其他检查结果进行综合分析。
药品中白色念珠菌检验方法的研究
药品中白色念珠菌检验方法的研究近年来，白色念珠菌在药品行业非常普遍，它可以在药品中发现，并影响药品的质量。
这里，本文以药品中白色念珠菌检验方法为研究对象，全面分析了白色念珠菌的检验方法，以推动药品质量的安全和稳定。
白色念珠菌是一种微生物，常见于农作物种植和动物屠宰的地方，很容易通过空气和水运送而进入到药品中。
而且，它可以在药品中发酵形成毒素，危害人类健康。
因此，如何检测白色念珠菌，及时发现和控制它，对确保药品质量安全具有重要意义。
白色念珠菌检验方法主要包括细菌数的测定（total viable counts）、微生物培养（microbiology culturing）和遗传检测（genetic detection）。
1.菌数的测定：细菌数的测定是一种快速可靠的检测方法，可以在较短的时间内获得准确的结果。
它主要包括接种、报告细菌总数及菌落形态等步骤，但是此方法装置费用较高，且不能识别不同物种，无法检测毒素物质。
2.生物培养：培养是对细菌的一种常用检测方法，具有识别和携带毒素物质的菌落等优点。
但是此方法所需时间较长，费用较高，并且结果容易受到干扰和影响。
3.传检测：遗传检测是以药品中非细菌物质（如核酸）为检测对象的一种检测方法，可以在较短时间内准确地识别微生物的物种，且方法成本较低。
此外，另外一种实用的白色念珠菌检验方法是通过生物传感器来检测白色念珠菌，这是一种利用生物技术进行敏感、灵敏、快速检测的方法。
可以有效避免药品污染的发生，提高检验效率，提高药品质量。
针对白色念珠菌检测中出现的一些问题，有几种技术，可以有效地检测其存在，以保证药品质量。
例如，可以采用高精度的测温装置控制检验环境的温度，以降低药品中白色念珠菌的存在。
此外，可以采用有毒的药物进行消毒和除菌，以减少白色念珠菌的产生。
综上所述，检测白色念珠菌的技术有很多种，可以选择合适的方法，提高药品中白色念珠菌的检验效率。
只有控制好药品中的白色念珠菌，才能确保药品质量的安全和稳定，确保人们健康安全。
抑菌效力检查法
151
1 1 2 1 抑菌效力检查法
中 国 药 典 2015年版
表 1 培 养 基 适 用 性 检 査 、方法适 用 性 试 验 、抑菌效力测定用的试验苗及新鲜培养物制备
试验菌株
金黄色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus )
CCMCCCB)26 003〕
铜绿假单胞菌 (Pseudomonas aeruginosa)
在 药 品 生 产 过 程 中 ，抑 菌 剂 不 能 用 于 替 代 药 品 生 产 的 G M P 管 理 ，不 能 作 为 非 无 菌 制 剂 降 低 微 生 物 污 染 的 唯 一 途 径 ，也 不 能 作 为 控 制 多 剂 量 包 装 制 剂 灭 菌 前 的 生 物 负 载 的 手 段 。所 有 抑 菌 剂 都 具 有 一 定 的 毒 性 ，制 剂 中 抑 菌 剂 的 量 应 为 最 低 有 效 量 。同 时 ，为 保 证 用 药 安 全 ，成 品 制 剂 中 的 抑 菌 剂 有效浓度应低于对人体有害的浓度。
培养时间 18〜 2 4 小时 18〜 2 4 小时 18〜 2 4 小时 24〜 4 8 小时 5〜7 天或直到获得丰富的孢子
菌 液 制 备 后 若 在 室 温 下 放 置 ，应 在 2 小 时 内 使 用 ；若保 存 在 2〜8 C ，可 在 2 4 小 时 内 使 用 。黑 曲 霉 孢 子 悬 液 可 保 存 在 2〜8 * C , 在 验 证 过 的 贮 存 期 内 使 用 。
如 果 药 物 本 身 不 具 有 充 分 的 抗 菌 效 力 ，那 么 应 根 据 制 剂 特 性 （如 水 溶 性 制 剂 ）添 加 适 宜 的 抑 菌 剂 ，以 防 止 制 剂 在 正 常 贮 藏 或 使 用 过 程 中 由 于 微 生 物 污 染 和 繁 殖 ，使 药 物 变 质 而 对 使 用 者 造 成 危 害 ，尤 其 是 多 剂 量 包 装 的 制 剂 。
妇科念珠菌感染3种微生物检验方法的效果观察研究
妇科念珠菌感染3种微生物检验方法的效果观察研究妇科念珠菌感染是一种常见的妇科疾病，常见于生育年龄的女性。
念珠菌感染会给患者带来不适和痛苦，严重影响生活质量。
目前，念珠菌感染的诊断主要依靠微生物检验方法，但不同的检验方法在效果上可能存在差异。
为了探究不同的微生物检验方法对妇科念珠菌感染的诊断效果，我们开展了一项观察研究。
一、传统的培养法传统的培养法是目前常用的念珠菌感染检验方法之一。
该方法通过将患者采集的分泌物样本进行培养，观察培养皿中是否有念珠菌的生长来判断念珠菌感染的情况。
传统培养法的优点是简单易行，成本较低，但缺点是需要较长时间才能获取结果，且对念珠菌的特异性不高。
二、快速菌种鉴定法快速菌种鉴定法是近年来新兴的微生物检验方法，该方法利用生物分子技术对患者分泌物中的微生物进行快速鉴定。
通过PCR扩增和DNA序列比对等技术，可以快速、准确地确定分泌物中的念珠菌是否存在。
该方法的优点是快速、准确，能够对念珠菌进行特异性鉴定，但缺点是设备和技术要求较高，成本较高。
三、显微镜检查法为了比较不同的微生物检验方法对妇科念珠菌感染的诊断效果，我们招募了100例妇科念珠菌感染患者进行观察研究。
50例患者采用传统的培养法进行检验，25例患者采用快速菌种鉴定法进行检验，25例患者采用显微镜检查法进行检验。
观察研究的主要内容包括检验结果的准确性、阳性率、阴性率、检测时间和成本等指标。
经过观察研究，我们发现不同的微生物检验方法对妇科念珠菌感染的诊断效果存在一定差异。
传统的培养法虽然操作简单，成本低，但在念珠菌的特异性鉴定上存在一定的局限性，有一定的假阴性率。
快速菌种鉴定法虽然能够快速、准确地对念珠菌进行特异性鉴定，但设备和技术要求较高，成本较高。
显微镜检查法操作简单，成本低，但对念珠菌的特异性鉴定也存在一定的局限性。
综合观察研究结果，我们认为在妇科念珠菌感染的微生物检验中，应当综合考虑不同的检验方法。
传统的培养法可以作为常规检验方法，用于快速筛查和初步诊断；而快速菌种鉴定法可以作为辅助检验方法，用于对念珠菌的特异性鉴定；显微镜检查法可以作为常规检验方法的补充，用于快速获取初步结果。
抑菌效力检查操作规程
抑菌效力检查操作规程抑菌效力检查操作规程一、实验室准备工作1. 确保实验室内环境干净整洁，无杂草杂物。
2. 准备所需的实验设备和试剂，包括培养基、培养皿、试管、培养箱等。
3. 检查设备和试剂的质量，确保其符合检测要求。
4. 检查消毒设备的有效性，保证消毒质量。
5. 确保实验人员了解并熟悉相关的实验操作规程。
二、样品准备1. 根据检测要求，选择需要检测抑菌效力的样品。
2. 样品应具备代表性，以确保检测结果的准确性。
3. 样品应进行有效的消毒处理，以去除可能影响实验结果的外源性菌群。
4. 样品应进行适当的稀释处理，以确保实验过程中的菌落计数在合适的范围内。
三、实验操作1. 预热培养箱至适当的温度，通风静置一段时间以达到温度均一。
2. 准备培养基，按照指定比例配制好培养基。
3. 将培养基倒入培养皿或试管中，确保培养基平均分布。
4. 待培养基凝固之后，使用无菌技术在培养基上均匀地涂布待测样品。
5. 将涂布好的培养皿或试管放入预热好的培养箱中，设定适当的温度和时间。
6. 培养结束后，取出培养皿或试管，进行菌落计数和观察。
7. 记录实验结果，并依据相关标准对抑菌效力进行评估。
四、实验结果分析1. 对每个样品进行菌落计数，统计不同条件下菌落的数量和形态特征。
2. 将实验结果与对照组进行比较，判断样品的抑菌效力是否达到要求。
3. 如果样品的抑菌效力未达到要求，可以继续进行进一步的研究和优化，以提高其抑菌效力。
4. 根据实验结果和分析，撰写实验报告，包括实验目的、方法、结果和结论等内容。
五、实验安全注意事项1. 操作人员应穿戴适当的实验服和个人防护用品，如手套、口罩和护目镜等。
2. 操作过程中要注意实验室内的卫生和消毒，避免交叉感染。
3. 各种试剂和培养基应按照规定存放和处置，避免对环境和人员造成危害。
4。
严禁食用实验中使用的试剂和培养基。
5. 在实验操作过程中，如有任何异常情况发生，应立即停止操作，并及时采取相应的安全措施。
白色念珠菌快速鉴定多种方法
白色念珠菌快速鉴定多种方法白色念珠菌（Candida albicans）是一种常见的真菌感染病原体，常见于口腔、肠道、生殖系统和皮肤等部位。
由于其对抗药物的能力强，对人体的感染具有一定的危害性。
因此，对于白色念珠菌的快速鉴定方法的探索和研究对于及早发现和治疗感染具有重要意义。
为了实现对白色念珠菌的快速鉴定，许多方法和技术已经被开发出来，并且在临床实践中得到了广泛应用。
下面将介绍一些常见的白色念珠菌快速鉴定方法。
首先，常规的实验室方法是通过培养白色念珠菌来鉴定其存在。
这种方法需要将样本（如血液、身体分泌物）接种到培养基上，然后观察并分离出念珠菌。
这种方法的优点是简单易行，但需要较长的培养时间，一般需要1-3天才能得到结果。
为了缩短鉴定时间，一些分子生物学方法也被广泛应用于白色念珠菌的快速鉴定。
其中，聚合酶链式反应（PCR）是最常用的方法之一。
PCR可以通过扩增白色念珠菌的特定基因片段来检测其存在。
由于PCR的高灵敏度和快速性，这种方法在临床实践中得到了广泛应用。
另外，实时荧光定量PCR（qPCR）和循环介导等温扩增（LAMP）也是常用的快速鉴定方法。
除了分子生物学方法外，免疫学方法也被用于白色念珠菌的鉴定。
例如，酶联免疫吸附试验（ELISA）可以通过检测血清中的白色念珠菌特异性抗原来确定感染的存在。
这种方法具有高灵敏度和特异性，但需要较长的实验时间。
近年来，基于质谱法的快速鉴定技术也逐渐成为研究热点。
质谱技术可以通过检测样本中念珠菌特异性的蛋白质或代谢物来确定其存在。
与传统方法相比，质谱法具有高灵敏度、高特异性和较短的分析时间等优势。
综上所述，针对白色念珠菌的快速鉴定方法包括传统的培养方法、分子生物学方法、免疫学方法和质谱法等。
这些方法在临床实践中各具优势，可以根据实际需要选择合适的方法。
未来，随着技术的进步和研究的深入，相信会有更多更快速、准确的方法被开发出来，以改善白色念珠菌感染的早期诊断和治疗。
白色念珠菌的几种快速鉴定方法
白色念珠菌的几种快速鉴定方法介绍白色念珠菌（Candida albicans）是一种常见的真菌，它存在于人体的皮肤、口腔、肠道等部位，是人体正常微生物群落的一部分。
然而，当人体免疫力下降或受到其他因素的影响时，这种念珠菌可能引起感染，导致严重的疾病。
因此，快速准确地鉴定白色念珠菌对于临床治疗具有重要意义。
本文将介绍几种常用的快速鉴定白色念珠菌的方法，包括分子生物学方法、免疫学方法和生物化学方法。
分子生物学方法1. PCR（聚合酶链式反应）•PCR是一种常用的分子生物学方法，能够在短时间内扩增目标DNA序列，从而快速鉴定白色念珠菌。
•PCR的原理是通过引物（primers）选择特定的白色念珠菌DNA序列，并利用聚合酶将其扩增成大量可检测的DNA片段。
•PCR扩增产物可以通过凝胶电泳进行检测，或者使用高通量测序技术进行定量分析。
2. 实时荧光定量PCR•实时荧光定量PCR是一种在PCR过程中可以实时监测目标DNA扩增情况的方法。
•通过引物和荧光探针的组合，可以实时检测PCR反应体系中的DNA扩增情况。
•实时荧光定量PCR可以定量检测白色念珠菌的存在量，并且具有高灵敏度和高特异性。
3. 荧光原位杂交（FISH）•荧光原位杂交是一种通过特异性探针识别念珠菌DNA序列的方法。
•在荧光原位杂交中，特定的荧光标记的DNA探针与白色念珠菌DNA序列进行杂交，形成特定的荧光信号。
•通过观察杂交信号的形成，可以确定白色念珠菌的存在与否。
免疫学方法1. 免疫荧光染色法•免疫荧光染色法是一种通过特异性抗体与念珠菌进行反应并产生荧光信号的方法。
•荧光标记的抗体与白色念珠菌的抗原结合，形成荧光信号。
•免疫荧光染色法可以直接观察和定量检测白色念珠菌的存在与否。
2. 酶联免疫吸附试验（ELISA）•ELISA是一种常用的免疫学方法，可以通过酶的反应来检测特定抗原与抗体的结合情况。
•在ELISA中，特异性的抗体被固定在试验板上，样品中的白色念珠菌抗原与抗体结合后，通过酶促反应产生可观察的信号。
抑菌效力检查记录
抑菌效力检查记录
检品名称：批号：来源：规格：检验日期：报告日期：
检验依据：
1、培养基、试剂批号：
胰酪大豆胨琼脂培养基：沙氏葡萄糖琼脂培养基：
0.9%无菌氯化钠溶液：
胰酪大豆胨琼脂培养基：沙氏葡萄糖琼脂培养基：
0.9%无菌氯化钠溶液：
胰酪大豆胨琼脂培养基：沙氏葡萄糖琼脂培养基： 0.9%无菌氯化钠溶液：
2、试验菌批号、有效期：
金黄色葡萄球菌批号：有效期：
铜绿假单胞菌批号：有效期：
大肠埃希菌批号：有效期：
白色念珠菌批号：有效期：
黑曲霉批号：有效期：3、抑菌效力测定：
3.1、方法：取上述试验菌,制成每1ml含菌数约为108cfu的菌悬液；
实验组：取包装完整的供试品5份,直接接种试验菌；
菌液组：取同体积无菌0.9%无菌氯化钠溶液5份,直接接种试验菌；
测定1ml菌液组菌量为第0 d含菌数；
置20-25℃避光贮存,于第14天,第28天分别测定每1ml供试品中的含菌数;
备注：测定细菌用胰酪大豆胨琼脂培养基,测定真菌用沙氏葡萄糖琼脂培养基;根据存活菌数测定结果,计算1ml供试品各试验菌所加的菌数及各间隔时间的菌数,并换算成lg值;
3.2、判断标准：
3.3、试验结果：
检验人/日期：复核人/日期：。
(目录5)白色念珠菌检查法
三、鉴定依据 1、菌落特征 2、显色培养基反应 3、厚膜孢子形成 假菌丝末端或侧缘形成典型
的厚 膜孢子 4、芽管形成 由孢子长出短小芽管 5、生化试验 6、注意与其他常见念珠菌和酵母菌的鉴别。
结果判断
试验结果符合以上条件应判该供试品 检出白色念珠菌。
⑷白色念珠菌在TTC（氯化三苯四氮唑-沙保罗琼 脂培养基）培养基平板上呈乳白色或淡红色， 菌落小。其他酵母菌为红色、热带念珠菌为深 红色或紫色。
参见下表
白色念珠菌菌落形态
培养基
菌落形态
沙氏琼脂培 乳白色偶见淡黄色，表面光滑有浓酵母气味，培养
养基
时间稍久则菌落增大，颜色变深、质地变硬或有皱
摺。
吐温—80玉 灰色或奶油色，表面光滑有浓酵母气味，培养时间 米粉琼脂培 稍久则菌落增大，颜色变深、质地变硬或有皱摺。 养基
常见念球菌及酵母菌生化试验结果
细菌名称
蔗糖发酵
生化试验 葡萄糖发酵 麦芽糖发酵 尿素酶分解
白色念球（1）
-
+
白色念球（2）
-
+
热带念球菌
+
+
啤酒酵母菌
+
+
酿酒酵母菌
+
+
+
-
+
-
+
-
-
-
-
-
7、白色念珠菌与酵母菌的鉴别 ⑴酵母菌在显色培养基上不显色，为乳白色。 ⑵酵母菌无假菌丝和厚膜孢子。 ⑶酵母菌可发酵蔗糖不能发酵麦芽糖。 以上试验结果和特征可与念珠菌进行鉴别。
图3 酵母菌在显色培养基上的颜色和菌落形态
4、显微镜下特征
⑴白色念珠菌在沙氏葡萄糖培养基上于25~28℃培养24h生长缓 慢， 30~35℃培养24h培养物革兰染色为阳性菌，圆形或椭圆形、 菌体着色不均匀，假菌丝与芽管模糊。 ⑵白色念珠菌在1%吐温80-玉米琼脂培养基上于25~28℃24-48h 培养物，革兰染色为阳性菌、圆形、菌体着色不均匀，高倍镜下 观察，可见到大量厚膜孢子和假菌丝，芽管模糊，30~35℃培养 24h,显微镜下可见丰富假菌丝和芽管生长，在菌丝顶端及侧缘厚 膜孢子生长。见图4 、 5、6、7、8、9
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2、如平板上生长的菌落与上述菌落形态特 征相符或疑似，应挑选2～3个菌落分别接 种至念珠菌显色培养基平板上，培养24～ 48小时（必要时延长至72小时）。若平 板上无绿色或翠绿色的菌落生长，判供试 品未检出白色念珠菌。
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4、1、2、3类供试品1g或1ml接种菌量为 105～106cfu，4类供试品中1g或1ml接 种菌量为106～108cfu，接种菌液的体积 不得超过供试品体积的0．5%～1% ， 充分混合，使供试品中的试验菌均匀分布。
5、将接种的供试品在试验期间置20～ 25℃，避光贮存，贮存温度的变化应尽 可能控制在最小范围，并防止被污染。
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2、若因供试品的性状或每个容器装量 等因素需将供试品转移至无菌容器时， 该容器的材质不得影响供试品的特性 （如吸附作用），特别应注意不得影 响供试品的PH，PH对抑菌剂的活性影 响很大，同时容器的口径大小应便于 供试品的进出及混匀。
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3、 取包装完整的供试品至少5份，直接接 种试验菌，或取适量供试品分别转移至5 个适宜的无菌容器中（若试验菌侏数超过 5株，应增加相应的供试品份数），每一 容器接种一个试验菌。
3、若平板上生长的菌落为绿色或翠绿色， 挑取相符或疑似的菌落接种于1%吐温80 玉米琼脂培养基上，培养24～48小时。 取培养物进行染色，镜检及芽管试验。
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4、芽管试验 挑取1%吐温80玉米琼 脂培养基上的培养物，接种于加有一 滴血清的载玻片上，盖上盖玻片，置 湿润的平皿内，置35～37℃、1～3h， 置显微镜下观察，可见到由孢子长出 短小芽管。
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适用性检查
取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞 菌各50～100cfu，分别注入无菌平皿中，立即 倾注胰酷胨大豆琼脂培养基，每株试验菌平行 制备2个平皿，混匀，凝固，置30～35℃培养 48小时，计数；取白色念珠菌、黑曲霉各50～ 100cfu，分别注入无菌平皿中，立即倾注沙氏 葡萄糖琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平 皿，混匀，凝固，置20～25℃培养72小时，计 数；同时，用对应的对照培养基替代被检培养 基进行上述试验。
5、若上述疑似菌为非革兰阳性菌，显 微镜未见厚膜孢子、假菌丝、芽管， 判供试品未检出白色念珠菌。
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抑菌剂效力测定
概述
1、抑菌剂效力检查法系用于测定灭菌、 非灭菌制剂中抑菌剂的活性，以评价最终 产品的抑菌效力，同时也可用于指导生产 企业在制剂研发阶段抑菌剂的确定。
2、如果药物本身不含有充分的抗菌活性， 那么应根据制剂特性（如水溶液制剂）添 加适宜的抑菌剂，以防止制剂在正常储存 和使用过程中可能发生微生物污染和大量 繁殖尤其多剂量包装的制剂，避免因药物 微生物污染及对患者造成伤害。
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3、所有抑菌剂都具有一定的毒性， 而且在贮存过程中其有效性有可能因 药物的活性成分提高或降低，为保证 药品的质量和用药安全，添加防腐剂 的量应根据制剂本身是否具抗菌活性， 保持最低有效量并在药品包装上注明 添加抑菌剂的名称和数量。
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培养基 1、胰酪胨大豆肉汤培养基 2、胰酪胨大豆肉汤培养基 3、 沙氏葡萄糖肉汤培养基
不少于3.0 lg ，第14天到28天菌数不增加。 真 菌 与初始值比，到7、14、28天菌数均不增加。
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结果判断
1、抑菌剂效力根据各间隔时间测定的菌数 1.0 lg值相对于初始值（0时菌数1.0 lg值） 减少程度进行评价（见表），试验结果按有 效数字的修约规则进舍，保留一位小数点。 结果符合表，要求可判断该产品抑菌效力符 合规定。
.Leabharlann 表 防腐剂抗菌效力标准1类供试品 细 菌 7天菌数下降不少于1.0 lg，14天菌数下降
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表 产品分类
类别
药品
1 类 注射剂、其他非肠道制剂，包括乳剂、 耳用 制剂、无菌鼻用制剂及眼用制剂 2 类 局部给药制剂、非灭菌鼻用制剂及用于
黏膜的乳剂 3 类 口服非固体制剂（非抗酸制剂） 4 类 非固体抗酸制剂
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菌种和菌液的制备同培养基适用性检查 供试品接种
1、抑菌剂效力可能受试验用容器特征的影响，如 容器的材质、形状、体积及封口的方式等。因此， 只要供试品每个包装容器的装量足够试验用，同 时容器便于按无菌操作的接入试验菌液、混合及 取样等，一般应将试验菌直接接种于供试品原包 装容器中进行贮存。
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结果判定 被检培养基的菌落数与对照培养基菌 落数相比大于70%，菌落形态大小应 与对照培养基上的菌落一致。判该培 养基的适用性检查符合规定。
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抑菌剂效力测定 供试品分类 为了达到试验目的，根据供试品的给药 途径和用途将供试品分为四类，以便标 准的制定和执行，但对于一些抗酸性制 剂和含活生物制剂应考虑会降低有益菌 的生物活性。见表
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培养基的适用性检查 菌种
铜绿假单胞菌pseudomonasaeruginosa） 金黄色葡萄球菌（staphycococcus） 白色念球菌（Candida albicans）] 黑曲霉（Aspergillus niger） 大肠埃希菌（Escherichia Coli） 菌液的制备同控制菌培养基适用性检查
白色念珠菌检查方法
1、增菌培养 取供试液10ml（相当于 供试品1g、ml、10cm2）直接或处理 后接种至适量（不少于100ml）的沙 氏葡萄糖肉汤培养基中，培养48～72 小时。
2、分离培养 取上述培养物划线接种 于沙氏葡萄糖琼脂培养基平板上，培 养24～48小时（必要时延长至72小 时）。
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结果判断
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存活菌数测定
由于供试品中含有抑菌活性，所以菌数 测定方法应进行验证。根据菌数测定结 果，计算1ml(g)供试品各试验菌所加的 菌数及各间隔时间的菌数，并换算成lg 值。
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测定细菌用胰酷胨大豆琼脂培养基，测定真菌 用沙氏葡萄糖琼脂培养基 根据产品类型，在规定的接种时间，分别从上 述每个容器中取供试ml(g)，用pH7.0无菌氯化 钠-蛋白胨缓冲液稀释成1：10、1：102、1： 103等稀释级。