柱色谱分离中的应用

柱色谱分离中的应用

摘要：本文主要简述柱色谱的基本知识，了解柱色谱的简要操作以及分类。简介柱色谱的广泛应用等。

关键词：柱色谱分离吸附剂

一、概念

1、柱色谱

柱色谱是在一根玻璃管或金属管中迸行的色谱技术，将吸附剂填充到管中而使之成为柱状，这样的管状柱称为吸附色谱柱。使用吸附色谱柱分离混合物的方法，称为吸附柱色谱。这种方法可以用来分离大多数有机化合物，尤其适合于复杂的天然产物的分离。分离容量从几毫克到百毫克级，所以，适用于分离和精制较大量的样品

2、吸附剂

吸附剂是能有效地从气体或液体中吸附其中某些成分的固体物质。吸附剂一般有以下特点：大的比表面、适宜的孔结构及表面结构；对吸附质有强烈的吸附能力；一般不与吸附质和介质发生化学反应；制造方便，容易再生；有良好的机械强度等。吸附剂可按孔径大小、颗粒形状、化学成分、表面极性等分类，如粗孔和细孔吸附剂，粉状、粒状、条状吸附剂，碳质和氧化物吸附剂，极性和非极性吸附剂等。

吸附剂要求

一种合适的吸附剂，一般应满足下列几个基本要求:

⑴对样品组分和洗脱剂都不会发生任何化学反应，在洗脱剂中也不会溶解。

⑵对待分离组分能够进行可逆的吸附，同时具有足够的吸附力，使组分在固定相与流动相之间能最快地达到平衡。

⑶颗粒形状均匀，大小适当，以保证洗脱剂能够以一定的流速（一般为1.5 mL·min-1）通过色谱柱。

⑷材料易得，价格便宜而且是无色的，以便于观察。可用于吸附剂的物质有氧化铝、硅胶、聚酰胺、硅酸镁、滑石粉、氧化钙（镁）、淀粉、纤维素、蔗糖和活性炭等。其中有些对几类物质分离效果较好，而对其它大多数化合物不适用。

二、柱色谱分类：

1.吸附柱色谱

色谱管为内径均匀、下端缩口的硬质玻璃管,下端用棉花或玻璃纤维塞住,管内装入

吸附剂。吸附剂的颗粒应尽可能保持大小均匀,以保证良好的分离效果。除另有规定外,

通常多采用直径为0.07～0.15mm的颗粒。色谱柱的大小,吸附剂的品种和用量,以及洗脱

时的流速，均按各品种项下的规定。

(1) 吸附剂的填装①干法将吸附剂一次加入色谱柱，振动管壁使其均匀下沉，

然后沿管壁缓缓加入洗脱剂；或在色谱柱下端出口处连接活塞，加入适量的洗脱剂，旋

开活塞使洗脱剂缓缓滴出，然后自管顶缓缓加入吸附剂，使其均匀地润湿下沉，在管内

形成松紧适度的吸附层。操作过程中应保持有充分的洗脱剂留在吸附层的上面。

②湿法将吸附剂与洗脱剂混合，搅拌除去空气泡，徐徐倾入色谱柱中，然后加入

洗脱剂将附着管壁的吸附剂洗下，使色谱柱面平整。

俟填装吸附剂所用洗脱剂从色谱柱自然流下，液面和柱表面相平时，即加供试品溶

液。

(2) 供试品的加入除另有规定外，将供试品溶于开始洗脱时使用的洗脱剂中，再

沿色谱管壁缓缓加入，注意勿使吸附剂翻起。或将供试品溶于适当的溶剂中，与少量吸

附剂混匀，再使溶剂挥发去尽使呈松散状，加在已制备好的色谱柱上面。如供试品在常

用溶剂中不溶，可将供试品与适量的吸附剂在乳钵中研磨混

匀后加入。

(3) 洗脱除另有规定外，通常按洗脱剂洗脱能力大小递增变换洗脱剂的品种和比

例，分别分部收集流出液，至流出液中所含成分显著减少或不再含有时，再改变洗脱剂

的品种和比例。操作过程中应保持有充分的洗脱剂留在吸附层的上面。

2.分配柱色谱

方法和吸附柱色谱基本一致。装柱前，先将载体和固定液混合，然后分次移入色谱

柱中并用带有平面的玻棒压紧；供试品可溶于固定液，混以少量载体，加在预制好的色

谱柱上端。

洗脱剂需先加固定液混合使之饱和，以避免洗脱过程中两相分配的改变。

实验关键步骤：

1、装柱要紧密，要求无断层、无缝隙。

2、在装柱、洗脱过程中，始终保持有溶剂覆盖吸附剂。一个色带与另一色带的洗脱液的接受不要交叉

三、柱色谱的分离应用

1、天然胡萝卜素的提取及分离

【摘要】采用浸取法从胡萝卜中提取胡萝卜素,研究了不同提取剂对胡萝卜素提取效果的影响。使用薄层色谱(TLC)、柱色谱对提取液进行分离纯化,采用紫外可见分光光度计测定胡萝

卜素含量。研究结果表明:用丙酮—石油醚(3:7,V/V)混合液提取效果较好,提取的胡萝卜素含量可达995μg?g;薄层色谱分离中展开剂选用石油醚和乙醚的混合液,两者比例为9∶1时

分离效果最好;柱色谱的洗脱速度和效果与溶剂极性相关,洗脱剂为石油醚和乙醚的混合液

时色带分离明显

2、紫杉醇生产新工艺研究

【摘要】从红豆杉茎皮提取紫杉醇，采用１％柠檬酸渗漉、柱色谱分离、溴加成后柱色谱分离的新工艺，可以获得比较满意的结果。

3、硅胶柱色谱分离纯化生物发酵液中叶酸的研究

【摘要】采用硅胶柱色谱分离纯化生物发酵液中的叶酸 ,实验研究了色谱方法 ,确定了适的谱条件。

4、柱色谱分离提纯叔戊基蒽醌

【摘要】叔戊基蒽醌作为一种有机中间体,被广泛的运用在合成、催化等各领域,其作为过氧化氢的催化剂不仅催化效率高,且催化剂不易中毒。本文就叔戊基蒽醌的分离做了初步研究,主要利用了薄层色谱定性,柱色谱分离的方法,使叔戊基蒽醌得到了分离提纯,经高效液相色谱内标法测定,纯度达到了90%左右。

5、切割硅胶柱色谱法分离丹参中的丹参酮ⅡA

【摘要】采用加热回流提取丹参中主要化学成分丹参酮ⅡA,采用切割硅胶柱色谱法分离丹参中的脂溶性成分丹参酮ⅡA,结合红外图谱对比进行鉴定。结果表明,该方法具有简便、快速、结果可靠等优点,用此方法分离的产物为丹参酮ⅡA且纯度较好。

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