食品中糖精钠的测定

测定【注解3】
• 取处理液和标准使用液各10 µL(或相同体积) 注入高效液相色谱仪进行分离，以其标准 溶液峰的保留时间为依据进行定性，以其 峰面积求出样液中被测物质的含量，供计 算。
注
• 干扰情况：
• 本方法不受蔗糖、柠檬酸和合成色素的影响，并 可同时测定抗坏血酸，其相对保留时间为1.86 min(流速2 mL/min)。
注
• 溶液的pH对测定和色谱柱寿命有影响，pH 小于2或大于8对相对保留时间有影响，并 且对柱有侵蚀作用。以中性为宜
高效液相色谱参考条件【注解2]
• 柱：YWG-C18 4.6 mm×250 mm 10 µm不 锈钢柱。
• 流动相：甲醇：乙酸铵溶液(0.02 mol/L) (5+95)。
• 流速：1 mL/min。 • 检测器：紫外检测器，230 nm波长，
• 1 适用范围 • 本方法适用于食品中糖精钠的测定
• 原理及方法提要 • 在酸性条件下，试样中的糖精钠用乙
醚提取、浓缩、薄层色谱分离、显色后与 标准比较，进行定性和半定量测定。
主要试剂和材料
• 乙醚：不含过氧化物。 • 无水硫酸钠。 • 无水乙醇及乙醇(95%)。 • 聚酰胺粉：200目。 • 盐酸(1＋1)：取100mL盐酸，加水稀释至200mL。 • 展开剂：①正丁醇＋氨水＋无水乙醇(7＋1＋2)；②异丙醇＋氨水＋无
0.2AUFS。
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注
• 1．波长的选择：有时实验要求同时测定苯甲酸、山梨 酸和糖精钠，山梨酸的灵敏测定波长为254 nm，但在此 波长下糖精钠和苯甲酸的灵敏度降低，为了照顾三者的 灵敏度，本方法采用测定波长为230 nm。
• 2．流动相和色谱柱的选择：测定糖精钠也可采用氨 基柱，流动相也可采用甲醇、水。本方法采用的柱子和 流动相系统均和测定合成色素的条件一致，更便于同时 测定糖精钠和合成色素。
80℃下干燥1h。置于干燥器中保存。
•
2）点样：在薄层板下端2cm处，用微量注射器点
10µL和20μL的样液二个点，同时点3.0，5.0，7.0，
10.0μL糖精钠标准溶液，各点间距1.5cm。
• 3）展开与显色：将点好的薄层板放入盛有展开剂的展 开槽中，展开剂液层约0.5cm，并预先已达到饱和状态。 展开至10cm，取出薄层板，挥干，喷显色剂，斑点显黄 色，根椐样品点和标准点的比移值进行定性，根据斑点 颜色深浅进行半定量测定
食品中糖精钠的测定
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一、概述
• 糖精钠(saccharin sodium dihydrate)是一种合成的甜 味剂。1879年Fahlberg等在邻氨磺酰苯甲酸的制造 中，发现其无水品有很强的甜味，将其命名为糖精， 含2个结晶水的邻氨磺酰苯甲酸的钠盐为糖精钠。 其甜度约为蔗糖的500倍，即使将其稀释10000倍， 其稀释后的水溶液还具有甜味。
分析wenku.baidu.com骤
• 试样提取
• 1）饮料、冰棍、汽水：取10.0mL均匀试样(如 试样中含有二氧化碳，先加热除去。如试样中 含有酒精，加4%氢氧化钠溶液使其呈碱性， 在沸水浴中加热除去)，置于100mL分液漏斗 中，加2mL盐酸(1+1)，用30，20，20mL乙醚 提取三次，合并乙醚提取液，用5mL盐酸酸化 的水洗涤一次，弃去水层。乙醚层通过无水硫 酸钠脱水后，挥发乙醚，加2.0mL乙醇溶解残 留物，密塞保存，备用
• 糖精钠水溶液呈微碱性。易溶于水，不溶于乙醚、三氯 甲烷等有机溶剂。在pH3.8以下的酸性溶液中不稳定， 尤其在加热时分解，生成氨磺酰苯甲酸后丧失甜味。在 中性溶液中稳定，但长久加热时，也会丧失甜味。在碱 性溶液中比较稳定，但长久煮沸时，一部分可分解成氨 磺酰苯甲酸。在通常的加工条件下其甜度不会降低。由 于其具有以上特性，因而不适合于一般酸性强的食品加 热，将其与其他甜味剂合并使用时，可使其甜味成倍增 加。
注
• 4．对于豆粉、奶粉、月饼等高蛋白高油脂样品， 可先加适量蒸馏水，再加入一定量的1 mol/L的氢氧 化钠，再用10%的亚铁氰化钾、20%的乙酸溶液沉 淀蛋白，振荡混匀后用稀氨水或稀乙酸调pH至 7.0～8.0，用蒸馏水定容至刻度，混匀静置，沉淀 蛋白后用滤纸过滤，滤液经0.45 µm的微孔滤膜后于 样品瓶中保存待测。经过去蛋白、调节酸碱度、过 膜等处理后的样品，结果准确、干扰少、峰形好， 还可以减少色谱柱的污染，减低柱压，延长使用寿 命。由于现在食品的基体越来越复杂，在工作中要 不断摸索，根据具体的食品成分选择有效的前处理 方法，消除干扰，从而保证结果的准确性和可靠性。
• 糖精钠化学式为C7H4NNaO3S．2H2O，相对分子 质量为241.19，化学名称为邻-磺酞苯甲酞亚胺钠， CA编号为128-44-9，结构式如下
• 糖精钠一般为具有2分子结晶水的斜方晶系片状结 晶，在空气中可逐渐风化失掉结晶水而成为白色粉 末。其化学结构被推断为内酰胺型(1)和内酰亚胺型 (2)，根据重氮甲烷甲基化作用的研究结果认为本品 的结晶体为(1)型，而溶液中的一部分属(2)型，结构 式如下
0.15 以糖精计
0.15 以糖精计
0.15 以糖精计，固体饮料按冲 调倍数增加使用量
0.15 以糖精计
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二、 (GB/T 5009.28-2003)食品中糖 精钠的测定
• 1 范围 • 本标准规定了食品中糖精钠的测定方法。 • 本标准适用于食品中糖精钠的测定。 • 本方法检出限：高效液相色谱法为取样
醇溶解，移入100mL容量瓶中，加乙醇(95%)稀释至刻度。此溶液每 毫升相当于1mg糖精钠(C6H4CONNaSO2·2H2O)
注
• 乙醚中过氧化物检查方法：取乙醚10 mL， 加新煮沸放冷的蒸馏水20 mL，振摇3 min， 静置分层，分取水层，加15%碘化钾溶液和 0.5%淀粉溶液各数滴，振摇后应不显蓝色
注
• 这些食品不能直接提取，用透析法可去除 大部分蛋白质、淀粉、脂肪等的干扰，使 分子质量较小的糖精钠渗透到溶液中
分析步骤
• （2） 薄层测定
•
1）薄层板的制备：称取1.6g聚酰胺粉，加0.4g可溶
性淀粉，加约7.0mL水，研磨3～5min，立即涂成0.25～
0.30mm厚的10cm×20cm的薄层板，室温干燥后，在
分析步骤
• 1试样处理 • 汽水：称取5.00 g～10. 00 g，放入小烧杯中，
微温搅拌除去二氧化碳，用氨水(1+1)调pH约7 【注解1】。加水定容至适当的体积，经0.45 µm滤膜过滤。 • 果汁类：称取5.00 g-10.00 g，用氨水(1+1)调 pH约7，加水定容至适当的体积，离心沉淀， 上清液经0.45 µm滤膜过滤。 • 配制酒类：称取10.00 g，放小烧杯中，水浴加 热除去乙醇，用氨水(1+1)调pH约7，加水定容 至20 mL，经0.45 µm滤膜过滤。
•
3）固体果汁粉等：称取20.0g磨碎的均匀试样，
置于200mL容量瓶中，加100mL水，加温使溶解、
放冷。以下按②自“加20mL硫酸铜溶液(100g/L)”起
依法操作。
分析步骤
• 试样提取
• 4）糕点、饼干等蛋白、脂肪、淀粉多的食品：称 取25.0g均匀试样，置于透析用玻璃纸中，放入大小 适当的烧杯内，加50mL氢氧化钠溶液(0.8g/L)，调 成糊状，将玻璃纸口扎紧，放入盛有200mL氢氧化 钠溶液(0.8g/L)的烧杯中，盖上表面皿，透析过夜。 量取125mL透析液(相当12.5g试样)，加约0.4mL盐酸 (1＋1)使成中性，加20mL硫酸铜溶液(100g/L)，混 匀，再加4.4mL氢氧化钠溶液(40g/L)，混匀，静置 30min，过滤。取120mL(相当10g样品)，置于 250mL分液漏斗中，以下按1）自“加2mL盐酸(1＋1)” 起依法操作
• 糖精钠作为甜味剂添加在食品中已有很多年了，至今 尚未发现由其引起的中毒事件，但各国都严格控制其适 用范围和使用量。虽然在1977年加拿大的动物实验和美 国的流行病学调查报告中对使用糖精钠提出了警告，但 其对人体的益处和危害的评价目前尚无定论。 FAO/WHO的评价是将其列入A(2)类，其ADI值暂定为每 天5 mg/kg体重。
1000 mL溶解，经0.45 µm滤膜过滤。 • 3.4糖精钠标准储备溶液：准确称取0. 0851 g经120℃烘
干4h后的糖精钠(C6H4CONNaSO2·2H2O)，加水溶解定 容至100 mL。糖精钠含量1.0mg/ mL，作为储备溶液。 • 3.5糖精钠标准使用溶液：吸取糖精钠标准储备液10 mL 放入100 mL容量瓶中，加水至刻度，经0.45 µm滤膜过 滤，该溶液每毫升相当于0.10 mg的糖精钠 • 4仪器 • 高效液相色谱仪，紫外检测器
水乙醇(7＋1＋2)。 • 溴甲酚紫溶液(0.4g/L)：称取0.04g溴甲酚紫，用乙醇(50%)溶解，加氢
氧化钠溶液(4g/L)1.1mL调节pH为8，定容至100mL。 • 硫至酸10铜0m溶L。液(100g/L)：称取10g硫酸铜(CuSO4·5H2O)，用水溶解并稀释 • 氢氧化钠溶液(40g/L)。 • 糖精钠标准溶液：准确称取0.0851g经120℃干燥4h后的糖精钠，加乙
我国食品中糖精钠的使用范围及最 大使用量
食品名称／分类
熟制豆类（五香豆、炒豆） 带壳烘焙／炒制坚果与籽类 脱壳烘焙／炒制坚果与籽类 面包 糕点 饼干 复合调味料 饮料类（包装饮用水类除外）
配制酒
最大使 备 注
用量
/(g/kg)
1.0
以糖精计
1.2
以糖精计
1.0
以糖精计
0.15 以糖精计
0.15 以糖精计
量为10 g，进样量为10 µL时检出量为1.5 ng。
第一法 高效液相色谱法
• 2原理 • 试样加温除去二氧化碳和乙醇，调pH至
近中性，过滤后进高效液相色谱仪，经反 相色谱分离后，根据保留时间和峰面积进 行定性的定量。
试剂和仪器
• 3.1 甲醇：经0.5 um滤膜过滤。 • 3.2氨水(1+1)：氨水加等体积水混合。 • 3.3乙酸铵溶液(0.02 mol/L)：称取1.54 g乙酸铵，加水至
• 3．在酸性溶液中以糖精的形式存在，出峰较早；在 碱性溶液中以糖精钠的形式存在，出峰较晚。因此加入 少量氨水使其缓冲液的pH在7.5左右，这样出峰顺序为 苯甲酸、山梨酸、糖精钠，分离效果好。值得注意的是， 一般色谱柱的最高允许pH为8，所以加入氨水的量不宜 太多，以免损坏柱子。根据不同的柱子和柱子在不同的 使用时期选择不同的比例，调节缓冲液的pH非常重要。
我国食品中糖精钠的使用范围及最大使用量
食品名称／分类
最大使用量/(g/kg) 备 注
冷冻饮品（食用冰除外）
0.15
水果干类（仅限芒果干、无花 5.0 果干）
蜜饯凉果
1.0
凉果类
5.0
话化类（甘草制品）
5.0
果丹（饼）类
5.0
酱渍的蔬菜
0.15
盐渍的蔬菜
0.15
以糖精计 以糖精计 以糖精计 以糖精计 以糖精计 以糖精计
注
• 使含糖精钠1 mg～2 mg。 • 糖精钠在酸性条件下生成糖精，易溶于乙
醚中，使提取完全。 • 盐酸酸化水洗的目的，是除去水溶性杂质，
并防止糖精损失
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分析步骤
• 试样提取
• 2）酱油、果汁、果酱等：称取20.0g或吸取20.0mL 均匀试样，置于100mL容量瓶中，加水至约60mL， 加20mL硫酸铜溶液(100g/L)，混匀，再加4.4mL氢 氧化钠溶液(40g/L)，加水至刻度，混匀，静置 30min，过滤，取50mL滤液置于150mL分液漏斗中， 以下按1）自“加2mL盐酸(1＋1)”起依法操作。
苯甲酸、山梨酸和糖精钠色谱图
精密度【注解4】
• 在重复性条件下获得的两次独立测定结果 的绝对差值不得超过算术平均值的10%
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注
• 方法的技术取样量为10 g，进样量为10 µL 时，最低检出量为1.5 ng。在重复性条件下 获得的两次独立测定结果的绝对差值不超 过10%
食品中糖精钠的测定 薄层色谱法 （GB/T 5009.28-2003）
• 有实验表明，酒中糠醇的吸收峰与糖精钠的吸收 峰出现叠加现象，在国家标准方法的分离条件下， 无法分开。定量的结果，叠加后的糠醇与糖精钠量 正好等于两种物质量之和。即在现有条件下，糠醇 的存在对糖精钠的测定会产生影响。在该研究中， 提出可以利用蒸馏过程将低沸点、易挥发的成分蒸 出，而糖精钠属盐类化合物，熔点很高，难于挥发。