血培养

临床微生物实验室血培养操作标准

1 范围

本标准规定了血培养标本临床微生物检验的技术要求。

本标准适用于开展血培养的临床微生物实验室。

2 术语

一套血培养：从同一穿刺点同时采集的血液标本，分别注入需氧和厌氧培养瓶；

静脉输液缸：一种植入皮下，可长期留置在体内的静脉输液装置；

HACEK菌群：嗜沫嗜血杆菌、人心杆菌、啮蚀艾肯菌和金氏金菌；

血培养污染率：一般由凝固酶阴性葡萄球菌、革兰阳性棒状杆菌、座疮丙酸

杆菌和微球菌等污染引起的阳性瓶占总送检瓶数的比例。

3 导言

人体血液中有很多物质，包括溶菌酶、白细胞、免疫球蛋白、补体等，可在几分钟内将入侵血流的微生物清除。当微生物感染超出人体免疫系统的防御能力时，人体将不能将微生物局限于原始感染的部位，或在治疗中不能通过切除、引流等措施清除感染源，那这些微生物将侵入血液迅速繁殖形成菌血症或真菌血症。一过性菌血症常发生于对感染病灶的外科处理、黏膜的创伤操作和易污染的外科手术，亦可发生于感染性心内膜炎等血管内膜感染以及伤寒和波浪热的最初几周。菌血症是临床急症，应尽快采集血液进行培养。血培养是对入住急诊科、ICU患者、移植患者以及静脉插管患者的败血症进行早期诊断的一种方法，并根据阳性血培养病原菌的药物敏感性试验，可为临床医生提供最佳的抗菌药物治疗方案，对降低病死率有很大的帮助，血培养对于临床诊断和预后评估也有重要的意义。

4 血样采集和培养瓶接种

4.1 采血指征

可疑感染患者出现以下一种或几种特征时，可考虑采集血培养：发热（≥38℃）或低温（≤36℃）寒战，白细胞计数增多（计数>10.0×109/L，特别有“核左移”时）或减少（计数<3.0×109/L）,皮肤黏膜出血，昏迷，多器官衰竭，血压降低，C反应蛋白、降钙素原（PCT）、1，3－β－D－葡萄糖（G试验）升高及突然发生的急性呼吸、体温和生命体征改变。

4.2采血时间及套数

4.2.1 采血时间

推荐在寒战或高热高峰前后采集，用抗菌药物之前采集。

4.2.2 血培养套数

应同时采集2~3套培养瓶，2~5天内无需重复采集血培养。只有在怀疑感染性心内膜炎或其它血管内感染（如导管相关性感染）时，才能必要间隔多次采集血培养。对于新生儿，采集一瓶儿童需氧瓶，建议同时做尿液和脑脊液培养。

4.3 采血量

成人每瓶采血量8~10ml，儿童1~15ml，但不应超过患儿总血量的1％。血液和肉汤之比为1：5~1：10。新生儿0.5ml。

4.4需氧瓶和厌氧瓶间的血液分配

4.4.1 采血量充足的患者

推荐配套采集需氧瓶和厌氧瓶，将血液先注入厌氧瓶，后注入需氧瓶。

4.4.2 采血量不足的患者

应将足量血标本先注入需氧瓶，再将剩余血液注入厌氧瓶。有利于分离出真菌、铜绿假单胞菌和嗜麦芽窄食单胞菌。

4.5血培养采集程序

4.5.1 采集血培养标本之前首先做好手卫生。静脉穿刺点选定后，去除血培养的朔料瓶帽，切勿打开金属封口环和胶塞，使用70％异丙醇或75％乙醇消毒，自然干燥60s；

4.5.2 在穿刺前或穿刺期间，防止静脉滑动，可戴无菌乳胶手套固定静脉；

4.5.3 穿刺点皮肤消毒；

4.5.3.1 三步法

1）75％酒精擦拭静脉穿刺部位，待干30s以上；

2）1％~2％碘酊作用30s或10％碘伏60s，从穿刺点向外画圈消毒至消毒区域直径达3cm以上；

3）75％酒精脱碘：对碘过敏的患者，用75％酒精消毒60s,待酒精挥发干燥后

采血。穿刺点消毒后不可再接触。

4.5.3.2 一步法：0.5％葡萄糖酸洗必泰作用30s（不适用于2个月以内的新生儿），或70％异丙醇消毒后自然干燥。

4.5.4 用注射器无菌穿刺取血后，勿换针头（如果行第二次穿刺，换针头），直接注入血培养瓶，不可将抗凝血注入商品化培养瓶。

4.5.5 血液接种到培养瓶后，轻轻颠倒混匀以防血液凝固。

4.5.6完成工作后洗手。

5血培养瓶运送

血培养瓶应尽快送至实验室孵育或上机，如果运送延迟，应在血液接种后尽快35~37℃孵育，切勿冷藏或冷冻。如果病房没有孵箱，血培养瓶应置于室温，而非冷藏或冷冻。

6 血培养标本的接受收与拒收标准

6.1 实验室工作人员在收到标本之后应观察血培养瓶生长指示信号，如果指示有细菌生长，则应进行涂片镜检。

6.2血培养瓶一般不予拒收，如发现以下情况：血培养瓶标识错误或没有标识，

破碎，损坏，渗漏，凝血等情况，应及时与临床联系。

7实验室操作方法及流程

7.1 影响检出率的关键因素

7.1.1 培养基

胰酶消化的大豆肉汤（TSB）是应用最广泛的基础培养基，脑心浸液、哥伦比亚布鲁氏、硫醇基乙酸盐和添加蛋白胨肉汤也是较常见的用于需氧菌和厌氧菌的培养基。Middlebrook肉汤可增强分枝杆菌的复苏能力。

7.1.2 添加剂

抗凝剂茴香脑磺酸钠（SPS），能中和溶菌酶，抑制吞噬作用，使部分氨基糖苷类失活，抑制部分补体串联。浓度为0.025~0.05％，有些浓度低到0.006％。

SPS会抑制部分细菌生长，包括奈瑟菌属、厌氧消化链球菌、卡他莫拉菌和阴道加德纳菌。除了营养肉汤可稀释血液以及SPS可降低血中抗生素对细菌的抑制作用外，某些血培养瓶中加入了抗生素中和或吸附剂，如树脂。抗凝剂肝素、EDTA 和柠檬酸盐对微生物有毒性，不能用于培养瓶中。

7.1.3 孵育条件

7.1.3.1 温度：35~37℃孵育。

7.1.3.2 气体：出厂的血培养瓶中的气压低于大气压以保证能注入足量血液。有些手动系统，培养瓶必须用针制造一个需氧的气体环境。厌氧瓶顶端的气体中含有二氧化碳和氮气。

7.1.3.3 自动化血培养系统每间隔一定时间检测需氧和厌氧瓶中微生物生长信号。当有阳性信号时进行处理（详见9：血培养阳性结果处理和报告程序）。对于已经培养5d的阴性瓶不需要常规盲传或终点转种。

7.2 血培养方法

7.2.1 手工血培养

7.2.1.1 传统肉汤培养

需氧培养基：脑心浸液肉汤、哥伦比亚肉汤或胰酶消化大豆肉汤；微需氧或厌氧培养基：硫醇或硫基乙酸盐。苛氧菌培养需添加溶血素、维生素k1，L型半胱氨酸。抗凝剂采用0.025~0.05％的SPS。推荐添加树脂中和抗菌药物。肉汤的体积为18~100ml。

7.2.1.2 双相培养基

同时含有琼脂和肉汤的血培养瓶，可用于成人或儿童患者的需氧菌、厌氧菌和分枝杆菌培养。培养瓶需要垂直孵育，同时观察肉汤和琼脂表面有无微生物生长。

7.2.1.3 溶血离心法

溶血离心法是将微生物从溶解的血液中释放出来后，通过离心将其与血液成分分离，因浓度不同而聚集在收集管底层的一种血培养方法。从溶血离心管底层沉淀物转移至固体培养基进行孵育。

7.2.1.4 孵育时间：手工法推荐35～37℃孵育7d，一些缓慢生长的苛氧病原菌（巴尔通体、李斯特菌属、布氏杆菌属和奴卡氏菌属）和双相真菌可能需要更长的孵育时间。手工法需要每天观察培养状态，如无生长迹象后摇动再孵育。