解脲脲原体之微生物学检验

解脲脲原体之微生物学检验
微生物学检验
(一)检验程序
解脲脲原体检验程序见图20-5。

(二)标本采集
用无菌试管或无菌瓶收集非淋菌性尿道炎患者的中段尿、慢性前列腺炎患者按摩后的前列腺液、原因不明的不育症患者的精液、阴道炎与宫颈炎患者的炎性分泌物等。

(三)标本直接检查
1．核酸检测以部分尿素酶基因的核苷酸序列为模板合成相应引物，进行体外扩增，解脲脲原体16个血清型均见460bp的DNA片段。

通过对PCR产物的核酸杂交和序列分析町将各种支原体鉴别分类，该法敏感性高。

DNA探针技术是直
接用缺口转移法制各P标记的DNA探针，测定时将标本粗提DNA 100μl点样到硝酸纤维膜上，与放射性探针杂交。

此法敏感，可检测50～100pg的DNA。

2．免疫斑点试验(IDT)检测抗原提取物，敏感、特异、快速，不需特殊仪器，易于推广。

可作为临床Uu感染者病原检查的特异诊断方法，此法也可检测Uu培养物。

(四)分离培养和鉴定
1．分离培养将标本接种于含尿素、精氨酸和酚红指示剂的液体培养基中，标本中若有解脲脲原体存在，则37℃培养24~48小时，解脲脲原体分解尿素或精氨酸产氨，培养基pH上升至7 6～8．6，液体培养基颜色由橙黄色转变成红色，即为阳性。

解脲脲原体在液体培养基中不出现菌膜、浑浊及沉淀生长现象。

如培养基出现浑浊则表明有杂菌污染，不能报告解脲脲原体阳性。

液体培养阳性
者应及时转种相应琼脂平板，置于5％CO
2、95％N
2
环境中做次代培养，Uu在A8
琼脂平板中1～3天出现圆形、棕色菌落。

以放大镜或低倍镜观察菌落形态，需注意支原体菌落与水泡、水、脂质滴物及其他杂质的区分。

2．鉴定取培养物分别作吉姆萨染色、革兰染色和细胞壁染色，观察菌体形态。

Uu分解尿素产氨，不分解葡萄糖和精氨酸，氯化三苯四氮唑还原阴性。

进一步鉴定需用特异性抗血清做GIT与MIT。

泌尿生殖道感染支原体的血清学检查临床意义不大。