病毒的分离与鉴定(一)
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（1）鸡胚尿囊腔接种法 ） （2）病毒的动物接种法－小白鼠脑内接种 ）病毒的动物接种法－ 目的： 目的：熟悉人工培养病毒的常用方法及其操 作技术。 作技术。
鸡胚尿囊腔接种法
实验材料： 实验材料： (1)来亨鸡受精卵、卵架、检卵灯。 来亨鸡受精卵、 来亨鸡受精卵 卵架、检卵灯。 (2)碘酒、酒精消毒棉球。 碘酒、 碘酒 酒精消毒棉球。 (3)灭菌的手术刀、镊子、剪刀。 灭菌的手术刀、 灭菌的手术刀 镊子、剪刀。 (4)1ml注射器及针头。 注射器及针头。 注射器及针头 (5)病毒液 流感病毒、新城鸡瘟病毒。 病毒液:流感病毒 病毒液 流感病毒、新城鸡瘟病毒。 (6)无菌胶布。 无菌胶布。 无菌胶布
病毒的动物接种法－小白鼠脑内接种
(3)以1ml的注射器抽提病毒悬液 以右手持注射器 以 的注射器抽提病毒悬液,以右手持注射器 的注射器抽提病毒悬液 以右手持注射器, 将针头向眼外与耳根连线中点略偏向耳的方向刺 入颅腔,约进针 约进针2~3mm,注入量 注入量0.02~0.03ml. 入颅腔 约进针 注入量 (4)注射完毕 将用过之物煮沸消毒 注射完毕,将用过之物煮沸消毒 注射完毕 将用过之物煮沸消毒. 实验结果: 实验结果 接种后每日观察动物2次 动物一般在接种后 动物一般在接种后3-4d后 接种后每日观察动物 次.动物一般在接种后 后 开始发病,食欲减退 活动迟缓,耸毛 震颤、卷曲、 食欲减退,活动迟缓 耸毛、 开始发病 食欲减退 活动迟缓 耸毛、震颤、卷曲、 尾强直,逐渐导致麻痹 瘫痪而死亡. 逐渐导致麻痹、 尾强直 逐渐导致麻痹、瘫痪而死亡
实验方法：
(3)用灭菌注射器吸取流感病毒液 用灭菌注射器吸取流感病毒液 0.2ml,由小孔刺入 由小孔刺入0.5cm后,进行注射 进行注射. 由小孔刺入 后 进行注射 (4)注射后 用无菌胶布 注射后,用无菌胶布 注射后 封孔,置35度温箱孵育 封孔 置 度温箱孵育. 度温箱孵育 (5)每日在灯下检视鸡 每日在灯下检视鸡 胚情况(若鸡胚在接种 胚情况 若鸡胚在接种 后24h内死亡为非特异 内死亡为非特异 性死亡,应弃之 性死亡 应弃之). 应弃之
病毒的动物接种法－小白鼠脑内接种
实验材料 (1)脑炎病毒悬液 脑炎病毒悬液. 脑炎病毒悬液 (2)小白鼠 小白鼠(3W龄). 小白鼠 龄 (3)1ml的注射器、针头 的注射器、 的注射器 针头. (4)碘酒、酒精棉球 碘酒、 碘酒 酒精棉球. 实验方法: 实验方法 (1)以左手将小白鼠头部和体部固定于台面 以左手将小白鼠头部和体部固定于台面. 以左手将小白鼠头部和体部固定于台面 (2)用碘酒、酒精棉球消毒头部右侧眼、耳间部位 用碘酒、 用碘酒 酒精棉球消毒头部右侧眼、
(1)取孵育 取孵育10~12d鸡胚 鸡胚, 取孵育 鸡ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ 在检卵灯下画出气室 界线,于胚胎附近无大 界线,于胚胎附近无大 血管处画出标记作为 注射入口. 注射入口 (2)将卵置于卵架上 消 将卵置于卵架上,消 将卵置于卵架上 毒标记处,用无菌剪刀 毒标记处 用无菌剪刀 尖在标记处打一小孔. 尖在标记处打一小孔
实 验 九
病毒的分离与鉴定（ 病毒的分离与鉴定（一）
1、病毒的培养与鉴定 、 2、病毒的 、病毒的CPE过程 过程 3、病毒的电镜照片观察 、 4、流感病毒的分离鉴定（一） 、流感病毒的分离鉴定（ （1）鸡胚尿囊腔接种法 ） （2）病毒的动物接种法－小白鼠脑内 ）病毒的动物接种法－ 接种
流感病毒的分离鉴定
分离鉴定程序 病人急性期咽喉含漱液 (经双抗处理 经双抗处理) 经双抗处理 鸡胚培养(羊水囊或尿囊腔 羊水囊或尿囊腔) 鸡胚培养 羊水囊或尿囊腔 35℃ ，72h ℃ 收获： 收获：取羊水或尿囊液作血凝试验 (+) (—) 盲传鸡胚两代， 作血凝抑制试验 盲传鸡胚两代，仍为 阴性时报告阴性
实验方法：
鸡胚尿囊腔接种法
实验材料： 实验材料： (1)来亨鸡受精卵、卵架、检卵灯。 来亨鸡受精卵、 来亨鸡受精卵 卵架、检卵灯。 (2)碘酒、酒精消毒棉球。 碘酒、 碘酒 酒精消毒棉球。 (3)灭菌的手术刀、镊子、剪刀。 灭菌的手术刀、 灭菌的手术刀 镊子、剪刀。 (4)1ml注射器及针头。 注射器及针头。 注射器及针头 (5)病毒液 流感病毒、新城鸡瘟病毒。 病毒液:流感病毒 病毒液 流感病毒、新城鸡瘟病毒。 (6)无菌胶布。 无菌胶布。 无菌胶布
病毒的动物接种法－小白鼠脑内接种
(3)以1ml的注射器抽提病毒悬液 以右手持注射器 以 的注射器抽提病毒悬液,以右手持注射器 的注射器抽提病毒悬液 以右手持注射器, 将针头向眼外与耳根连线中点略偏向耳的方向刺 入颅腔,约进针 约进针2~3mm,注入量 注入量0.02~0.03ml. 入颅腔 约进针 注入量 (4)注射完毕 将用过之物煮沸消毒 注射完毕,将用过之物煮沸消毒 注射完毕 将用过之物煮沸消毒. 实验结果: 实验结果 接种后每日观察动物2次 动物一般在接种后 动物一般在接种后3-4d后 接种后每日观察动物 次.动物一般在接种后 后 开始发病,食欲减退 活动迟缓,耸毛 震颤、卷曲、 食欲减退,活动迟缓 耸毛、 开始发病 食欲减退 活动迟缓 耸毛、震颤、卷曲、 尾强直,逐渐导致麻痹 瘫痪而死亡. 逐渐导致麻痹、 尾强直 逐渐导致麻痹、瘫痪而死亡
实验方法：
(3)用灭菌注射器吸取流感病毒液 用灭菌注射器吸取流感病毒液 0.2ml,由小孔刺入 由小孔刺入0.5cm后,进行注射 进行注射. 由小孔刺入 后 进行注射 (4)注射后 用无菌胶布 注射后,用无菌胶布 注射后 封孔,置35度温箱孵育 封孔 置 度温箱孵育. 度温箱孵育 (5)每日在灯下检视鸡 每日在灯下检视鸡 胚情况(若鸡胚在接种 胚情况 若鸡胚在接种 后24h内死亡为非特异 内死亡为非特异 性死亡,应弃之 性死亡 应弃之). 应弃之
病毒的动物接种法－小白鼠脑内接种
实验材料 (1)脑炎病毒悬液 脑炎病毒悬液. 脑炎病毒悬液 (2)小白鼠 小白鼠(3W龄). 小白鼠 龄 (3)1ml的注射器、针头 的注射器、 的注射器 针头. (4)碘酒、酒精棉球 碘酒、 碘酒 酒精棉球. 实验方法: 实验方法 (1)以左手将小白鼠头部和体部固定于台面 以左手将小白鼠头部和体部固定于台面. 以左手将小白鼠头部和体部固定于台面 (2)用碘酒、酒精棉球消毒头部右侧眼、耳间部位 用碘酒、 用碘酒 酒精棉球消毒头部右侧眼、
(1)取孵育 取孵育10~12d鸡胚 鸡胚, 取孵育 鸡ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ 在检卵灯下画出气室 界线,于胚胎附近无大 界线,于胚胎附近无大 血管处画出标记作为 注射入口. 注射入口 (2)将卵置于卵架上 消 将卵置于卵架上,消 将卵置于卵架上 毒标记处,用无菌剪刀 毒标记处 用无菌剪刀 尖在标记处打一小孔. 尖在标记处打一小孔
实 验 九
病毒的分离与鉴定（ 病毒的分离与鉴定（一）
1、病毒的培养与鉴定 、 2、病毒的 、病毒的CPE过程 过程 3、病毒的电镜照片观察 、 4、流感病毒的分离鉴定（一） 、流感病毒的分离鉴定（ （1）鸡胚尿囊腔接种法 ） （2）病毒的动物接种法－小白鼠脑内 ）病毒的动物接种法－ 接种
流感病毒的分离鉴定
分离鉴定程序 病人急性期咽喉含漱液 (经双抗处理 经双抗处理) 经双抗处理 鸡胚培养(羊水囊或尿囊腔 羊水囊或尿囊腔) 鸡胚培养 羊水囊或尿囊腔 35℃ ，72h ℃ 收获： 收获：取羊水或尿囊液作血凝试验 (+) (—) 盲传鸡胚两代， 作血凝抑制试验 盲传鸡胚两代，仍为 阴性时报告阴性
实验方法：