产量突变株的筛选

(二)诱变育种
利用各种诱变剂处理微生物细胞，提高基因 的随机突变频率，通过一定的筛选方法获得所 需要的高产优质力株。 一般通过营养缺陷型突变株、抗阻遏和抗反 馈突变型、抗性突变型（抗生素抗性突变株、 条件抗性突变株）来筛选。
理化诱变剂—处理均匀、分散的微生物群体--提高突变率—巧妙筛选
补充培养基（SM）[A]：在MM中有针对性地加入一 或几种营养成分以满足相应营养缺陷型菌株生 长的合成培养基。
营养缺陷型诱变筛选步骤及方法
诱变处理
营养缺陷型的浓缩
营养缺陷型的检出
营养缺陷型的鉴定
缺陷型的浓缩 ①抗生素法
原理：青霉素、制 霉菌素等抗生素作 用于正常生长着的 野生型微生物细胞， 而对处于休止态的 营养缺陷型细胞无 作用。 方法：将菌培养在 含抗生素的MM基中
如：lys
+
;
bio
+
;
原养型 ：指营养缺陷型突变菌株回复突变或重组后产 生的菌株，与野生型的表型相同。
与筛选营养缺陷型突变株有关的三类培养基 基本培养基（MM）[-]：凡是能满足野生型菌株营养 要求的最低成分的合成培养基。 完全培养基（CM）[+]：满足一切营养缺陷型菌株生 长的天然或半合成培养基。
②菌丝过滤法
适用于：丝状（放线 菌、霉菌） 原理：基本培养基上 只有野生型孢子发育 成菌丝；auxo孢子可 通过滤膜，野生型菌 丝不能通过。
缺陷型的检出
①逐个检出法
②影印平板培养法
③夹层培养法
缺陷型的鉴定 生长谱法：是指在混有供试菌的平板 表面点加微量营养物，视某营养物的周 围有否长菌来确定该供试菌的营养要求 的一种快速、直观的方法。
产量突变株的筛选
琼 脂 块 培 养 法
抗药性突变株的筛选
方法：梯度平板法（gradient plate）
用梯度平板法筛选抗代谢拮抗物突变朱
作为菌株的遗传标记 作为生产菌种（结构类似物抗性变异Leabharlann Baidu）
营养缺陷型(auxotroph)的筛选
与营养缺陷突变有关的三类遗传型个体： 营养缺陷型：经诱变产生的一些合成能力出现缺陷， 而必须在培养基内加入相应有机养分才能正常生长 的变异菌株。如：lys -， bio野生型：自然界分离到的任何微生物，在其发生营养 缺陷突变前的原始菌株，为该微生物的野生型。
诱变：随机过程 筛选：定向过程
诱变育种的实践意义
工业与实验室：代谢产物的高产突变株 生产角度：提高代谢产物的产量，减少杂质，扩大品种， 改进产品质量，简化生产工艺 方法：简便易行，工作速度快，收效显著。
1 .诱变育种基本环节(菌种筛选)
以选育高产突变株为例
2.诱变育种的步骤
出发菌株
纯化，同步培养
挑变异菌于斜面培养基上
培养液
离心收集细胞、洗涤，制 菌 悬液，玻璃珠打散，过 滤
初筛
性能粗测
单个细胞或孢子悬液
活菌计数，诱变预备试验
复筛
性能精测
诱变剂处理
存活细胞计数，计算致死 率 变异率计算
菌种保藏及扩大试验
平板分离
菌种用于生产，并进行保藏
3. 三类突变株的筛选
（1）产量突变株的筛选 （2）抗药性突变株的筛选 （3）营养缺陷型突变株的筛选
二 诱变育种
(一)自发突变与育种 生产中选育：生产中菌自发突变—及时选育出所 需 性状正突变株。 定向培育：用某特定环境长期处理某微生物群体， 同时不断对其移种传代，以达到累积并选择合 适的自发突变体的育种方法。
卡介苗： 牛型结核杆菌 –牛胆汁、甘油、马铃薯培养基—移种230代（13年） 显著减毒结核杆菌(即卡介苗)