传统方法：土壤微生物量碳测定

土壤微生物量碳的测定方法

1.试剂配制：

(1)0.5M K2SO4溶液：称取K2SO487.165g溶解于蒸馏水中，搅拌溶解，（可加热）

定容至1L。

(2)去乙醇氯仿的配制：在通风柜中，量取100毫升氯仿至500毫升的分液漏斗

中，加入200毫升的蒸馏水，加塞，上下振荡10下，打开塞子放气，而后加塞再振荡10下，反复3次，将分液漏斗置于铁架台上，静止溶液分层，打开分液漏斗下端的阀，将下层溶液（氯仿）放入200毫升的烧杯中，将剩余的溶液倒入水槽，用自来水冲洗。再将烧杯中的氯仿倒入分液漏斗中，反复3次。将精制后的氯仿倒入棕色瓶中，加入无水分析纯的CaCl2 10g，置于暗处保存。

(3)0.8000mol.L-11/6K2Cr2O7 标准溶液：称取39.2245g重铬酸钾（K2Cr2O7 分析纯）

加400ml蒸馏水加热溶解，冷却定容1L

(4)0.2mol.L-1FeSO4溶液：56.0g硫酸亚铁（FeSO4.7H2O）溶解蒸馏水中，加15ml浓硫酸，

用蒸馏水定容至1L

(5)邻啡罗啉指示剂：1.485g邻啡罗啉（C2H8N2.H2O）及0.695g硫酸亚铁（FeSO4.7H2O）

溶于100ml蒸馏水，形成红棕色络合物[（FeC12H8.N2）82+],贮存于棕色瓶中。

2.试验步骤：。

（1）制样：称取新鲜土壤（30.0g）于放置烧杯中，加约等于田间持水量60%水在25℃下培养7~15d。取15.0g土于烧杯，置于真空干燥器中，同时内放一装有用100ml精制氯仿的小烧杯，密封真空干燥器，密封好的真空干燥器连到真空泵上，抽真空至氯仿沸腾5分钟，静置5分钟，再抽滤5分钟，同样操作三次。干燥器放入25℃培养箱中24小时后，抽真空15-30分钟以除尽土壤吸附的氯仿。按照土：0.5M K2SO4=1:4(烘干土算，一般就是湿土：0.5M K2SO4=1：2)，加入0.5M K2SO4溶液（空白直接称取15.0g土，加同样比例0.5M K2SO4溶液）震荡30分钟，过滤。M

（2）消煮：滤液要是不及时测定，需立即在-15℃以下保存，此滤液可用于微生物碳氮的测定。微生物碳测定只吸取2ml，加入2ml 0.8000mol/L的1/6K2Cr2O7标准溶液，然后用注射器注人2ml浓硫酸，旋转摇匀，在消煮管上加一小漏斗。将盛土样的消煮放人铁丝笼架中，放入已预热至185 -190ºC的油浴锅中（豆油）加热。此时应控制锅内温度在170-180ºC，沸腾开始，准确加热5min，取出冷却，如溶液呈绿色，表示重铬酸钾用量不足，应再取较少的样品（或适当增加重铬酸钾的量）重做。

（3）滴定：冷却后的溶液呈橙黄色或黄绿色，用洗瓶将消煮管中的溶液洗人250ml三角瓶中，使三角瓶内溶液体积在60-80ml左右，加邻啡啰啉指示剂3—4滴，用0.2mol／L FeSO4滴定，溶液的颜色变化为：橙黄—→蓝绿—→棕红色，记录硫酸亚铁用量（V）。

每批分析样，应做2—3个空白；空白标定用直接用2ml K 2SO 4代替滤液，其它步骤与测定滤液时完全相同，记录硫酸亚铁用量（V 0）。

1. 计算方法

(1)有机碳计算

有机碳（g/kg ）=ts K m V V V ⨯⨯⨯⨯⨯-⨯⨯10001.1003.0)(0.58000.02

100 有机质（g/kg ）=有机碳（g/kg ）×1.724

式中：0.8000——1/6 K 2Cr 2O 7标准溶液的浓度（mol/L ）；

5.0——1/6 K 2Cr 2O 7标准溶液的体积（ml ）；

V 0——空白标定用去硫酸亚铁溶液体积（ml ）；

V ——滴定土样用去硫酸亚铁溶液体积（ml ）；

0.003——1/4碳原子的摩尔质量(g/m mol)；

1.1——氧化校正系数；

1.724——将有机碳换算成有机质的系数；

m 1——风干土样质量（g ）；

K 2——将风干土换算成烘干土系数。

Ts 为分取倍数，，滤液为30ml ，试验测定用了10ml ，因此处ts 为3

（2）微生物碳计算

B(C) =EC ／KEC

式中 B(C)——微生物量碳（BC ）质量分数，mg.kg-1；

EC ——熏蒸土样浸提的有机碳与未熏蒸土样之间的差值，mg.kg-1；（取上述（1）计算的熏蒸和未熏蒸有机碳的差值）

KEC —代表被氯仿熏蒸杀死的土壤微生物生物量碳在培养期间矿化为CO 2-C 的比例一般常取 0.45（Jenkinson.1981,Ladd,1981;Wu et al,1996）

注：所有的滤液测定参考的方法为：陈立新《土壤实验实习教程》，步骤和熏蒸前期处理参考：吴金水《土壤微生物生物量测定方法及其应用》