斑马鱼HAS2基因的克隆、抗体制备及分析

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ｍｕｉｅＷｈｉａｂｔｒｇｎｔｎＮｅＺｅｌｎｏｏｙｌｎｌａｔｓｒｍｒｄｃｉｎ．ｎｚｔｒｂｉｓｏｉｉａｅｉｗａａｄｆｒｐｌｃｏａｎｉｅｕｐｏｕｔｏｅｅｓｃｆｃｔｆｐｅａｅｎｉｐｅｉｉｏｒｐｒｄａｔｉｙ —
ＣｌｎｎｎｏｙｌｎｌｔｏｙＰｒｐｒｔｎｏｏｉｇａｄＰｌｃｏａＡｎｉｄｅａａｉｆＨＡｂｏ
ＹＮｉｎｈａＹＮＧＱ，删－ａ，ＡＧＪａ —ｕ，Ａｓｈｈ
ＧｎｎＺｅｒｆｈｅｅｉｂａｉｓ
斑马鱼ＨＡ２基因的克隆、体制备及分析Ｓ抗
杨建华，杨青，吴秀山，袁婺洲，王跃群，李永青，莫小阳，万永奇
（湖南师范大学蛋白质化学及鱼类发育生物学教育部重点实验室，心脏发育研究中心，中国长沙
摘要
４０８）１０１
ｃｍｂｎｄｐａｍｉａｒｎｆｒｄｉｔＬｆｃｌｎｘｒｓｉｎｏｅｆｓｎｐｏｅｎｗｓｉｄｃｄｗｔＧ．ｏｉｅｌｓｄｗｓｔｓｍｅｎｏＢ２ｌｏｉａｏＥ．）ａｄｅｐｅｓｆｈｉｒｔｉａｎｕｅｉＩｏｔｕｏｈ
ＴｅＧＴｈＳ —ＨＡＳｕｉｎｐｏｅｎｗａｕｉｃｔｄｕｉｇＵＲＡ．ｓａｅｙＳＳＰＥｓｐｒｔｎａｄｔｅｓｄｔｍ— ２ｆｓｏｒｔｉｓｐｒｉａｅｓｎＥｆａｓｙｄｂＤ — ＡＧｅａａｉｎｎｕｅｉｏｈｏ
白；通过尿素洗涤沉淀蛋白并切胶回收纯化融合蛋白，免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体，并用Ｗｅｔｌ检测抗体活ｓｒｂｔｅｏｎ性．生物信息学分析结果表明：斑马鱼ＨＳ基因的开放阅读框含有１５ｐ编码５２个氨基酸；Ｄ —ＡＥ电泳分析显Ａ２８ｂ，６５ＳＳＰＧ
ＹＡＷｕｚｏＵＮ —ｈｕ，ＷＮＧＹｅｑｎ，ＩＹｎ — ｉｇ，ＭＯａ－ａｇ，ＷＮｏｇｑＡｕ－ｕＬｏｇｑｎＸｉｏｙｎＡＹｎ・ｉ
（ｈｅｔｒＨａｅｅｏｍｎ，ＫｙＬｂｏＥｆｒｅｅｐｅｔｉｌｙａｄＰｏｅｈｍｓｙＴｅＣｎｅｆｅｒＤｖｌｐｅｔｅａｆｒｏｔＭＯｖｌｍｎｏｇｎｒｔｎＣｅｉｒ，ｏＤｏＢｏｉｔ
示，Ｔ诱导表达的融合蛋白ＩＧＰ相对分子质量约为４ ×０；ｅｅｏｎ分析表明，．１４ｓｒｂｔｇ５Ｗｔｌｔｎｉ制备的抗体具有良好的特异性．
关键词ＨＳ；Ａ２斑马鱼；核表达；原多克隆抗体
Ｑ１８２文献标识码Ａ文章编号１０－３（０００－０３０００２７２１）３０７－５５中图分类号
ｃｏｅｙｂｏｎｏｍａｉｓｃｍｂｎｄｗｉＴ．ＣｅｈｉｕｎｈｎｉｓｒｄｉｔＧＥ４ｌｖｃｏ．Ｔｉｎｗｒ．ｌｎｄｂｉｉｆｒｔｏｉｅｔＲＰＲｔｃｎｑｅａｄｔｅｅｔｎｏｐＸ－Ｔ— ｅｔｒｈｓｅｅｃｈｎｅ
ＨｕａｏｍａＵｉｒｔ，Ｃａｇｈ１０１ｈｎ）ｎｎＮｒｌｎｅｓｙｈｎｓａ０８，Ｃｉａｖｉ４
ＡｂｓｒｃＨＡ．ｉｍｐｏｅｓａｍｏｅｕａｒｅｆｈａｔｄｖｌｐｎ．ＩｒｒｔｕｔｅｎｅｔａｅｔｅｔａｔｓｅｌｙｄａｌｃｌｒｍａｋｒｏｅｒｅｅｏｍｅｔｎｏｄｅｏｆｒｈｒｉｖｓｉｔｈｇｆｎｃｉｎｏｈｅＨＡＳｎｔｅｅｏｉｇｈａｔｕｉｅｒｆｓｓａｍｏｅ．ａｆａｍｅｔｏｕｔｏｆｔ２ｉｈｅｄｖｌｐｎｅｒｓｎｇｚｂａｈａｄ１ｒｇｎｆｉＳｅｎｚｂａｓｓ２ｇｎｅｉｅｒｆｈｗａｉ
２１００年９月第３３卷第３期
湖南师范大学自然科学学报。
ＪｕｎｌｏｔｒｌＳｉｎｅｏｎｎＮｏｍａｉｅｓｔｏｒａｆＮａｕａｃｅｃｆＨｕａｒｌＵｎｖｒｉｙ
Ｖｏ．３Ｎｏ３１３．
Ｓｐ．，０ｅ２０１
ＨＳＡ２是斑马鱼心脏发育的一个标志基因，了利用斑马鱼动物模型进一步研究ＨＳ为Ａ２基因在心脏发
育中的功能，采用生物信息学结合Ｒ－ＣＴＰＲ的方法获得了斑马ຫໍສະໝຸດ Baidu ＨＳ基因的片段．Ａ２将所得的片段插人原核表达载体ｐＥ－Ｔｌ中，将重组质粒（Ｇｘ一一Ａ２转化大肠杆菌（ｃｌ）Ｌ１ＩＴＧＸ４－并ｐＥ４Ｔ１ＨＳ）ＥｉＢ２，Ｇ诱导表达ＧＴＨＳｏＰＳ－Ａ２融合蛋