枸杞多糖的提取与含量测定
枸杞中多糖成分的分离和提取技术
枸杞的功效十分强大，《神农本草经》中记载，枸杞能补气益血，清肝明目。
在1981—2010年，一系列与枸杞和枸杞多糖相关的中成药和制剂也是层出不穷，据统计已经达到876种。
对于天然产物的分析检测而言，得率和纯度至关重要，因此在多糖成分的分离和提取技术研究中必须在优化条件的同时，确保多糖的生物活性不会因提取工艺受到影响。
现阶段，碱溶液、酸溶液、水溶液都常被用于多糖的提取。
其中，热水凭借着易于获取、溶解度强等显著优势成为了提取多糖时首选的溶剂。
然而，多糖中含有醛基等官能团，所以碱性溶液也常被用于多糖的提取。
随着科学技术的不断进步，超声波技术、超临界萃取等技术也被广泛用于枸杞中多糖成分的分离[1]。
1 枸杞多糖的结构和理化性质随着科技的进步，人们发现枸杞中的生物活性成分较为复杂，既包括氨基酸、生物碱、脂肪酸、色素类物质，也含有离子盐等无机元素。
其中，枸杞多糖因为抗癌、抗氧化、免疫调节等作用受到广泛关注。
然而，枸杞多糖多与蛋白质相结合，这给枸杞中多糖成分的提取和分离带来了一定的难度。
研究表明，枸杞多糖成分较为复杂，多由葡萄糖、甘露糖、木糖、鼠李糖、阿拉伯糖等己碳糖组成侧链（简单结构见图1），并与由氨基酸组成的多肽链紧密结合。
图1 简单多糖结构示意图2 多糖的提取分离方法2.1 多糖的提取方法枸杞中的多糖以不同形式存在，对于每种形式的多糖都需要采用针对性的预处理方法。
现阶段，在天然产物分离与提纯中常用的分析检测方法包括脱色处理、粉碎成末、清洗脱脂等。
其中，粉碎是为了促进枸杞中物质的溶解，最大限度的获取枸杞中的有效物质。
脱色处理主要是为了除去枸杞中的显色物质，避免对后续处理工艺的干扰。
脱脂是避免多余的脂质对后续结果的影响。
2.1.1 溶剂浸提法因为多糖在水溶液中的溶解度较高，故而可以用水、酸、碱等极性溶剂或者甲醇、乙醇等质子型溶剂溶解。
其中，热水因成本低、来源广等优势常用作溶媒介质。
虽然多糖在酸、碱性溶液中也存在一定的溶解度，但是酸碱会影响多糖成分的活性，例如，溶解糖苷键，破坏多糖的三维立体结构等，故而此类方法常被用于对生物活性要求不高的成分的提取。
枸杞多糖的提取与含量测定
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实验试剂仪器
实验试剂
干燥枸杞子、葡萄糖标准溶液、蒽酮、浓硫酸、95% 乙醇、无水乙醇、三氯甲烷‐正丁醇（4:1）。
实验仪器
分析天平、托盘天平、离心机（大）、离心机（小）、 水浴锅、电炉、漩涡震荡仪、真空烘箱、分光光度计、 800ml烧杯、100ml烧杯、离心管、分液漏斗、50ml容量瓶、 玻璃棒、量筒、加盖试管若干。
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实验数据记录与处理
标准曲线的绘制
以下表格是不同浓度的标准葡萄糖溶液吸光度的实验数据。
即可得到如下标准曲线。
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实验数据记录与处理
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实验数据记录与处理
枸杞多糖的含量测定
根据标准曲线可以查得枸杞多糖样液吸光度的数值。
样液1含0.02367mg枸杞多糖， 样液2含0.04735mg枸杞多糖。
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实验内容
标准曲线的绘制
取干燥试管6 支，按下表数据配置一系列不同浓度的葡萄糖溶液 。
在620nm波长下以第一管为空白试验，迅速测量吸光值，以葡 萄糖含量（mg）为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘出标准曲线。
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实验内容
枸杞多糖的含量测定
精密称定20mg 多糖粗品，溶于50ml 蒸馏水中，制成样品液。 分别吸取0.5ml，1ml 多糖溶液至试管中，加蒸馏水至总体积为 1ml。冰浴中冷却，再加入4ml 蒽酮试剂，沸水浴中煮沸10min ，取出后自来水冷却，620nm 比色，其他条件与作标准曲线同 。测得吸光度值由标准曲线查出样品液的糖含量。
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实验内容
枸杞子多糖含量的测定实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除枸杞子多糖含量的测定实验报告篇一：实验三多糖含量的测定实验三多糖含量的测定一、实验目的1、分光光度法测多糖的原理和方法2、用officeexcel作标准曲线二、仪器与试剂1、仪器：7200分光光度计、水浴锅、电子天平2、试剂：1水葡萄糖、5%苯酚溶液、浓h2so4、dh2o3、器皿：50ml容量瓶、10ml量筒、玻棒、洗耳球、烧杯、试管三、步骤1、标准曲线的绘制①取1水葡萄糖0.551g于50ml容量瓶，加入蒸馏水溶解并小心稀释至刻度，再取5ml于50ml容量瓶，加蒸馏水稀释,即1.0mg/ml。
②分别量取0.25ml,0.5ml,1.0ml,1.5ml,2.0ml,2.5ml分别置于已编号的50ml容量瓶，加蒸馏水定容。
③分别吸取上述溶液各2.0ml,再加入5%苯酚1ml,摇匀后迅速加入5ml浓h2so4，摇匀后，室温5min，90oc水浴15min，冷却至室温。
空白对照：2ml蒸馏水+1ml5%苯酚+5ml浓硫酸吸光度A得浓度c与吸光度的线性方程y=ax+b④准确量取多糖溶液（待测）2.0ml于50ml容量瓶中，加蒸馏水定容，方法同上述。
四结果①计算浓度（待测液）本组所测得多糖溶液（待测）的吸光度为的0.385，代入根据吸光度A得浓度c与吸光度的线性方程y=14.255x+0.0309，可得待测液的浓度为0.025*25=0.625mg/ml.。
②实验主要步骤（记录）步骤记录：Ⅰ首先配制浓度分别为0.005mg/ml、0.01mg/ml、0.02mg/ml、0.03mg/ml、0.04mg/ml、0.05mg/ml的葡萄糖溶液；然后取配好的溶液各2.0ml,再加入5%苯酚1ml,摇匀后迅速加入5ml浓h2so4，；不断震荡，溶液逐渐变为褐色，放出热量，且随着葡萄糖浓度的增加，溶液的颜色也不断变深；室温5min，90oc水浴15min，反应更为充分，溶液颜色有稍微加深，冷却至室温；最后用7200分光光度计一一测量其吸光度，得到的的数据是0.098、0.19、0.337、0.412、0.584、0.774。
枸杞中枸杞多糖含量的测定
枸杞中枸杞多糖含量的测定一、实验内容用分光光度法测定枸杞中枸杞多糖的含量。
二、实验目的与要求(1)掌握用分光光度法测定枸杞中枸杞多糖含量的原理及方法。
(2)熟练掌握分光光度计的原理及使用方法。
三、实验原理用80%乙醇溶液提取以除去单糖、低聚糖、苷类及生物碱等干扰性成分，然后用水提取其中所含的多糖类成分。
多糖类成分在硫酸作用下，先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后和苯酚缩合成有色化合物，用分光光度法于适当波长处测定其多糖含量。
四、试剂80%乙醇溶液：用95%乙醇或无水乙醇加适量蒸馈水配制。
硫酸。
苯酚液：取苯酚100g，加铝片O.lg与碳酸氢钠0.05g，蒸馏收集1721馏分，称取此馏分10g，加水150mL，置于棕色瓶中即得。
葡萄糖标准溶液：精密称取105T：干燥至恒重的标准葡萄糖O.lOOOg，加水溶解并定容至lOOOmL即得。
五、仪器)实验室用样品粉碎机、分光光度计、电热恒温水浴。
六、操作步骤1-样品处理精密称取样品粉末0.4g (精确到0.000lg)置于圆底烧瓶中，加80%乙醇溶液 200ml回流提取lh，趁热过滤，残渣用80%热乙醇溶液洗涤（约10mL x 10次），残渣连同滤纸置于烧瓶中，加蒸馏水l00ml，加热提取1h，趁热过滤，残渣用热蒸馏水充分洗涤（约lOmLxl0次），洗液并入滤液，冷却后移入250mL容量瓶中，用水定容，待Ho2•标准曲线的绘制 %精密吸取葡萄糖标准溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1-OmL 中，各加蒸馏水使体积为2. OmL，再各加苯酚液l.OmL，摇匀，迅速滴加硫酸5.0mL,摇匀后放置5min，置沸水浴中加热15min，取出冷却至室温;另以蒸馏水 2mL，加苯酚和硫酸，同上操作为空白对照。
于490nm处测定吸光度，绘制标淮曲线。
3.试样的测定准确吸取待测液一定量（视待测液含量而定），加蒸馏水至2niL,以下操作按标准曲线绘制下的方法测定吸光度，根据标准曲线查出显色液中葡萄糖含量。
枸杞多糖的超声法提取法
枸杞多糖的超声法提取法及抗氧化性研究1、枸杞多糖的含量测定1）、标准曲线的绘制精密称取于105％干燥至恒重的无水葡萄糖对照品100 mg，加入100 ml容量瓶中，用纯化水溶解至刻度。
分别精密移取对照品储备液0．5，1．0，2．0，3．0，4．0，5．0 ml于100 ml量瓶中，加水稀释至刻度，然后各取1．0 ml于10 ml比色管中，分别加入5％的苯酚溶液1．0 ml，摇匀后加入5．0 ml浓硫酸，立即摇匀，在沸水浴中加热15 min，冷却至室温。
以纯化为空白对照，在487 nm处测吸光度值A。
以吸光度值为横坐标，浓度为纵坐标，绘制标准曲线。
2）、样品含量的测定取干燥的枸杞多糖供试品，按实际实验结果将其稀释至合适浓度。
精密吸取待测液1．0 ml，置于10 ml比色管中，按“2．1．1”方法显色，测定A值，按公式计算多糖含量。
按下式计算多糖含量(% ) = 3. 17C ×D /W×100％,式中C为样品溶液的葡萄糖质量浓度(mg／m1)，D为样品溶液的稀释倍数，f为换算因子(f=3．17) ，w为样品质量(mg)2、正交试验考察提取工艺（单因素试验）1）、料液比的影响称取枸杞样品4份，均为5g，分别加入lO、20、30、40倍水量，在50℃，pH=7，超声提取30 min，浓缩至20 ml左右，加5倍95％乙醇沉淀，沉淀再溶解，测定吸光度，从而比较多糖含量的提取率。
2）、时间的影响称取枸杞样品4份，均为5 g，加入10倍水量，在50~C，pH=7，分别超声提取10 min、20 min、30 min、40min，浓缩至20 ml左右，加5倍95％乙醇沉淀，沉淀再溶解，测定吸光度，从而比较多糖含量的提取率。
3）、温度的影响称取枸杞样品4份，均为5 g，加入10倍水量，分别在40℃、50℃、60℃、70℃，pH=7，超声提取从而比较多糖含量的提取率。
4)、pH值的影响称取枸杞样品4份，均为5 g，分别加入10倍水量，分别在pH=7、8、9、10，50℃，超声提取30 min，浓缩至20 ml左右，加5倍95％乙醇沉淀，沉淀再溶解，测定吸光度，从而比较多糖含量的提取率。
紫外分光光度法测定枸杞中多糖含量
紫外分光光度法测定枸杞中多糖含量摘要:目的：提供一种测定枸杞制品中功效成分多糖的方法，同时合理筛选枸杞品种。
方法：运用苯酚-硫酸紫外分光光度法测定3种枸杞品种中多糖的含量。
结果：宁夏枸杞中的多糖含量为4.01%，新疆枸杞中的多糖含量为3.85%，青海枸杞中的多糖含量为4.01%；同时发现使用紫外分光光度法测定精密度好、重复性好、方法简便。
结论：宁夏枸杞中多糖含量明显高于新疆枸杞和青海枸杞，差异达到显著水平；紫外分光光度法是一种测定枸杞多糖质量分数的理想方法，亦可为其它类多糖质量分数的测定提供依据。
关键词：苯酚-硫酸；紫外分光光度法；枸杞；多糖枸杞(Lycium Barbrum L.)属茄科枸杞，为落叶灌木植物干燥成熟果实。
近年的医学研究表明，枸杞含有多种营养成分和微量元素，其有效成分枸杞多糖(LBP)具有广泛的药理学作用，可促进造血、降血脂、保肝及治疗神经衰弱等。
枸杞多糖(LBP)是由多个单糖或衍生物聚合而成的大分子活性化合物，是枸杞生物学作用的主要有效成分之一，其结构按LBP-Ⅰ、LBP-Ⅱ、LBP-Ⅲ、LBP-Ⅳ的顺序水溶性依次递减，不溶于乙醇、丙酮等有机溶剂。
枸杞多糖对机体具有非特异性免疫调解功能，可调节机体免疫力、抑制肿瘤生长和细胞突变、延缓衰老、提高适应能力，并具有抗疲劳和加速消除疲劳的作用，已成为保健食品中的一种重要功能性添加剂，显示出良好的应用前景。
为了进一步开发新疆黑枸杞的药用价值，本文采用紫外分光光度法测定了几种枸杞叶中的多糖含量。
1 材料与方法1.1 原理多糖在80%乙醇溶液中沉淀，与单糖和低聚糖及甙类物质分离。
沉淀用水溶解后，再用碱性二阶铜试剂选择性地从其它高分子物质中沉淀出具有葡聚糖结构的多糖。
苯酚-硫酸可与其中的多糖起显色反应，生成橙黄色化合物，可于485nm 处比色，定量。
1.2 材料与仪器TU-1901型紫外-可见分光光度计(北京普析通用)、岛津CS-9301PC薄层扫描仪、定量毛细管(美国Dummond)、手动点样仪(CAMAGIII型)、硅胶G(青岛海洋化工集团公司)自制板；D-无水葡萄糖对照品(中国药品生物制品检定所生产，批号110833200302)；试剂：所用试剂均为分析纯。
枸杞多糖组成及含量测定方法的改进
枸杞多糖组成及含量测定方法的改进1. 方法原理该研究旨在改进枸杞多糖组成及含量的测定方法。
将枸杞多糖进行水解衍生化处理，然后利用气相色谱法（GC）和高效液相色谱法（HPLC）测定单糖组成。
通过分析单糖组成结果，可以判断枸杞多糖的真伪。
在此基础上，根据各单糖组成物质的量比，配制单糖混合溶液，并使用苯酚硫酸比色法绘制标准曲线，从而建立枸杞多糖含量的测定方法。
通过该方法测定的枸杞多糖含量为30，而仅以葡萄糖作为标准溶液，使用硫酸苯酚法绘制标准曲线时，枸杞多糖含量仅为14。
这种改进的方法可以更准确地测定枸杞多糖的含量，并区分真伪枸杞多糖。
2. 实验材料和仪器枸杞样本：选用宁夏枸杞（Lycium barbarum L.）为实验材料，购买自当地市场，经鉴定为优质品种。
试剂：包括但不限于葡萄糖、硫酸、苯酚、盐酸、乙醇等，均为分析纯。
高效液相色谱仪（HPLC）：配备示差折光检测器，用于枸杞多糖的定性和定量分析。
多糖纯化：通过Sevage法去除蛋白质，然后用透析法去除小分子杂质。
多糖含量测定：采用改进的苯酚硫酸法，通过紫外可见分光光度计测定多糖含量。
这个段落详细列出了实验所需的材料和仪器，并简要介绍了实验方法，为后续实验结果的准确性和可靠性提供了基础。
3. 实验步骤本实验选用宁夏枸杞（Lycium barbarum L.）为原料。
将枸杞样品在40下烘干至恒重，粉碎后过80目筛。
准确称取0g枸杞粉末，置于圆底烧瓶中。
采用改进的超声波辅助水提法提取枸杞多糖。
将枸杞粉末加入100mL去离子水中，在功率为200W、频率为40kHz的超声波辅助下提取30分钟。
提取完成后，离心（4000 rpm, 10 min）取上清液，残渣重复提取两次，合并上清液。
在上清液中加入Sevage试剂（三氯甲烷正丁醇 51，vv），剧烈振荡后静置分层，重复此步骤至无蛋白层出现，收集上清液。
将上清液减压浓缩至原体积的15，加入4倍体积的无水乙醇，置于4冰箱中醇沉过夜。
不同提取方法对枸杞多糖提取率及糖含量的影响
Vol.6 No.6Dec. 2020生物化工Biological Chemical Engineering第 6 卷 第 6 期2020 年 12 月不同提取方法对枸杞多糖提取率及糖含量的影响李玲梅，张娟娟（洛阳师范学院 食品与药品学院，河南洛阳 471934）摘 要：枸杞多糖是枸杞子的主要有效成分,是评价枸杞子质量的重要标准。
采用热水浸提法、碱提取法、超声提取法、微波提取法4种方法提取枸杞多糖，4种提取方法固定料液比1∶20（g ∶mL），提取温度90 ℃，浸提2次，比较不同提取方法对枸杞多糖提取率及多糖含量的影响。
结果表明，微波提取法提取率最高，然后依次是超声提取法、碱提取法、热水浸提法；超声提取法多糖含量最高，然后依次是微波提取法、碱提取法、热水浸提法。
通过研究不同提取方法对枸杞多糖提取率及多糖含量的影响，为枸杞多糖的质量研究奠定了基础。
关键词：枸杞多糖；提取率；多糖含量中图分类号：R284.2 文献标识码：AEffects of Different Extraction Methods on the Extraction Rate and Sugar Content of Lycium Barbarum PolysaccharideLI Lingmei, ZHANG Juanjuan(College of Food and Drug, Luoyang Normal University, Henan Luoyang 471934)Abstract: Lycium barbarum polysaccharide is the main effective component, which is the standard to evaluate the quality of Lycium barbarum. Therefore, four extraction methods, hot water extraction, alkali extraction, ultrasonicextraction and microwave extraction, were used to measure the quality of Lycium barbarum by comparing its polysaccharide and sugar content. Four extraction methods were fixed ratio of material to liquid 1∶20(g ∶mL), extraction temperature 90 ℃, and extraction twice. The effects of different extraction methods on the extraction rate and sugar content of Lycium barbarum polysaccharide were compared. The results showed thatmicrowave extraction had the highest extraction rate, followed byultrasonic extraction, alkali extraction, hot water extraction; the ultrasonic extraction method had the highest sugar content, followed by microwave extraction, alkali extraction, hot water extraction. Through The effects of different extraction methods on the extraction rate and sugar content of Lycium barbarum polysaccharide, it can lay foundation for the quality of Lycium barbarum polysaccharide.Keywords: lycium barbarum polysaccharides; extraction rate; sugar content目前,评价枸杞质量的指标通常是枸杞多糖（Lycium Barbarium Polysaccharides，LBP）、甜菜碱、总糖的含量，尤其以枸杞多糖为主[1]。
枸杞多糖提取方法及两种不同产地枸杞中多糖含量的比较研究
枸杞多糖提取方法及两种不同产地枸杞中多糖含量的比较研究阿依姑丽・艾合麦提,王颖,杨晓君,韩海霞,包晓玮,朱金芳,于娜娜(新疆农业大学药学院,乌鲁木齐 830052)摘 要:采用传统提取方法和超声提取法提取来自两种不同产地的枸杞(即宁夏枸杞和新疆精河枸杞)中的有效成分枸杞多糖,对其得率和含量进行分析比较。
结果表明,以传统法提取宁夏枸杞多糖得率为7.87%,新疆精河枸杞的多糖得率为9.41%;而以超声提取法提取宁夏枸杞多糖得率为8.61%,精河枸杞的多糖得率为13.77%。
证明超声提取法提取枸杞多糖具有快速、高效、节能、不破坏提取物性状等特点,与传统提取法相比能够提高药材有效成分的利用率。
同时还表明,采用同种提取方法提取出的新疆精河枸杞的多糖得率高于宁夏枸杞。
关键词:枸杞多糖;传统提取法;超声提取法;得率中图分类号:S5671099 文献标识码:A 文章编号:1001-4330(2007)05-0724-05Study on Extraction Method and Assay of Polysaccharidesof Lycium barbarum L.from Tw o Different SourceAyiguli ・Aihemeiti ,W ANG Y ing ,Y ANG X iao -jun ,H AN Hai -xia ,BAO X iao -wei ,ZH U Jin -fang ,Y U Na -na(College o f Pharmacology ,Xinjiang Agricultural Univer sity ,Urumqi ,Xinjiang 830052,China )Abstract :The Lycium barbarum polysaccharides (LBP )were extracted by the traditional extraction method and method of ultras onic extraction and the contents and yield of the polysaccharides extracted with those tw o kinds of methods were analyzed.The result showed that ,the yield of LBP from Ningxia lyceum extracted with traditional method was 7.87%,and 9.41%from Jinghe ,X injiang Lyceum ;but the yield of LBP from Ningxia Lyceum extracted with ultras onic method was 8.61%and 13.77%from Jinghe Lyceum.The results als o showed that extraction efficiency of ultras onic extraction was higher than that of traditional extraction.The utilization ratio of active constituent of medicinal materials can be increased in com paris on with the traditional method.Also the yield of Lycium polysaccharide from Jinghe extracted with the same method w as higher than that of NingxiaLycium.K ey w ords :Lycium polysaccharide ;LBP traditional extraction method ;ultras onic extraction method ;yield枸杞属植物枸杞(Lycium barbarum L.)为多棘刺落叶小灌木,抗旱能力很强,其浆果枸杞子在《神农本草经》中引为上品,是我国传统名贵中药材,素有“红宝”美称[1],其甘寒无毒,治五内不足,味甘、淡,具有清肝、润肺、滋肾明目、益气生精,祛虚痨、强筋骨、抗癌等功效,它既含有碳水化合物、蛋白质、脂肪、胡萝卜素、核黄素、钙、磷、铁、锌,还含有多种维生素及玉蜀黍黄素[2],因而一直受到中外医学与食疗专家的高度重视。
枸杞多糖的提取与鉴定
枸杞多糖的提取与鉴定1242818杨立君实验原理强酸可以使糖类脱水生成糠醛。
生成的糠醛或羟甲基糠醛与蒽酮脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色。
颜色的深浅可以作为定量的标准。
这一方法具有很高的灵敏度，糖含量在30μg左右就能进行测定，所以可以作为微量测糖之用。
一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适]1[。
实验试剂1.标准葡萄糖试剂：将葡萄糖105℃烘干至恒重（2h），准确称取50mg,无离子水定容至500mL,终浓度为0.1mg/mL.2.蒽酮-浓硫酸试剂：称取0.1997g蒽酮，溶于100mL浓硫酸，现用现配。
3.葡萄糖，阿拉伯糖，甘露糖]3[],2[4.硫代硫酸钠溶液，活性炭，正丁醇，无水乙醇，丙酮。
三氯甲烷，甲苯胺乙醇溶液实验器材分光光度计，超速离心机，电炉，烧杯，试管，干燥器，滤纸，层析缸以及其他相关玻璃仪器实验流程(一) 提取枸杞干果粉碎，氯仿- 甲醇（2∶1）回流脱脂8~10 h 近无色，挥干溶剂以后将脱脂后的枸杞样品放入烧杯中，分3次加15、12、10 倍量的蒸馏水于90 ℃水浴提取，每次2 h；收集3 次的滤液减压浓缩至约200 mL，转移到大烧杯中，加4 倍量的95%乙醇，沉淀12 h 后抽滤，并依次用无水乙醇、丙酮、无水乙醚洗涤，干燥后便得到枸杞多糖的粗制品。
]4[（二）纯化多糖粗品加水溶解，4 000 r/min 离心10 min 后取上清液，加30%双氧水适量，40 ℃保温4～6 h 后，加三氯甲烷-正丁醇（4∶1，Sevag 法）溶液沉淀蛋白，取上清液；此步骤反复多次，直到无白色絮状沉淀出现。
将除去蛋白的多糖溶液浓缩后，转移到分子排阻为8 000～10 000 Da 的透析袋中，流水透析24 h 后，蒸馏水透析过夜，溶液颜色变淡，浓缩后真空干燥得枸杞多糖精制品。
]4[(三) 理化性质分析将枸杞多糖精品分别加入水、乙醇、丙酮、乙酸乙酯和正丁醇中，观察其溶解性。
另在浓硫酸存在下观察枸杞多糖与α-萘酚的作用，于界面处观察颜色变化。
枸杞多糖含量的准确检测
申请科研资助项目申报书项目或课题名称：枸杞多糖含量的准确检测申请单位：宁夏瑞碧枸杞产业有限公司联系者姓名：联系者电话：宁夏瑞碧枸杞产业有限公司二00八年二月一、申请单位的基本情况：宁夏瑞碧枸杞产业有限公司是由陕西方舟健康产业集团投资，以枸杞汁﹑枸杞干果﹑枸杞冻干粉﹑枸杞提取物等枸杞系列产品为主的专业供应商。
目前，公司在宁夏枸杞原汁产业中属龙头企业。
公司注册资本1800万，员工63人，与南梁农场等通过有机认证的基地建立了稳定的鲜果原料供应关系，并建成目前国内最大的枸杞原汁加工线，每榨季产量可达2000吨以上。
公司严抓质量管理，已通过ISO 认证﹑HACCP认证及Kosher认证。
为加强公司技术力量，我们先后与中国科学院上海有机化学研究所、陕西师范大学生命科学院﹑北京食品研究所、西北大学生命科学学院、西安理工大学理学院、第四军医大学等建立了密切的合作关系，在科研开发上不断精进，以增强公司核心竞争力。
二、课题研究的目的及意义：国内一些大专院校科研单位的科技工作者近几年来从事宁夏枸杞有效成份分析，认为枸杞多糖是宁夏枸杞最主要的生物活性物质。
科学试验证明，枸杞里的一种特有成份能使P—24抗体测值增加，促进T淋巴细胞增高。
所谓的一种特有成份就是指枸杞多糖(LBP)。
研究表明，枸杞多糖是由阿拉伯糖、鼠李糖、术糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖及半乳糖醛酸组成的酸性杂多糖的糖链与蛋白质的肽链以共价键的形式结合的含肽链多糖，分子量均大于1万。
北京医科大学、华中农业大学和中科院上海有机化学研究所等单位对枸杞多糖进行了分离纯化，并且对分子量、结构、基本性质进行了深入的研究工作，但在枸杞多糖的准确测量方面研究很少，这为我们的市场开拓带来了很多困惑。
当客户要我们提供枸杞的活性成分以及检测方法时，我们并不能拿出令客户信服的数据，这在重视科学数据而又对枸杞知之甚少的欧美市场尤为明显，严重影响了我们扩大欧美市场。
因此本课题力图回答这些问题：得到枸杞多糖样品，用药理学实验证明我们所分离的枸杞多糖的活性，在此基础上建立枸杞多糖的准确检测方法。
枸杞多糖测定实验报告
一、实验目的1. 掌握枸杞多糖提取的基本原理和方法；2. 学习使用苯酚-硫酸法测定枸杞多糖含量的操作步骤；3. 分析实验数据，评估枸杞多糖的含量。
二、实验原理枸杞多糖是一种生物活性物质，具有多种生物功能，如抗衰老、抗氧化、抗肿瘤等。
本实验采用苯酚-硫酸法测定枸杞多糖含量，其原理是：在酸性条件下，多糖与苯酚反应生成蓝色化合物，该化合物的吸光度与多糖含量成正比。
三、实验材料1. 材料与试剂：枸杞子、苯酚、硫酸、葡萄糖标准品、蒸馏水等。
2. 仪器：电子天平、电热恒温水浴锅、分光光度计、离心机、研钵等。
四、实验方法1. 枸杞多糖提取（1）将枸杞子洗净，晾干，研磨成粉末；（2）称取一定量的枸杞子粉末，加入适量蒸馏水，煮沸提取；（3）提取液过滤，取滤液备用。
2. 标准曲线制备（1）精密称取一定量的葡萄糖标准品，配制成不同浓度的溶液；（2）按照苯酚-硫酸法测定吸光度，以葡萄糖浓度（mg/mL）为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
3. 枸杞多糖含量测定（1）取一定量的枸杞多糖提取液，按照苯酚-硫酸法测定吸光度；（2）根据标准曲线，计算枸杞多糖的含量。
五、实验结果1. 标准曲线制备根据实验数据，绘制标准曲线，得出回归方程为：y = 0.0018x + 0.0016，相关系数R² = 0.9988。
2. 枸杞多糖含量测定取一定量的枸杞多糖提取液，测定吸光度为0.521，根据标准曲线计算枸杞多糖含量为1.24mg/mL。
六、实验讨论1. 本实验采用苯酚-硫酸法测定枸杞多糖含量，操作简便，结果准确可靠。
2. 在实验过程中，要注意控制提取条件，以确保提取液的纯度和含量。
3. 标准曲线的绘制是本实验的关键环节，应严格控制实验条件，保证标准曲线的准确性和可靠性。
4. 本实验结果初步表明，枸杞中含有较高的多糖含量，具有一定的生物活性。
七、实验结论本实验成功提取了枸杞多糖，并采用苯酚-硫酸法测定了枸杞多糖含量。
实验结果表明，枸杞中含有较高的多糖含量，具有潜在的开发价值。
枸杞多糖
1 前言2 实验目的3 实验原理3.1枸杞多糖提取原理萃取是有机化学实验室中用来提取和纯化化合物的手段之一。
通过萃取，能从固体或液体混合物提取出所需的化合物。
它的基本原理是利用化合物在两种不相溶（或微溶）的溶剂中溶解度或分配系数的不同，使化合物从一种溶剂内转移到另一种溶剂中。
经过反复的多次萃取，将绝大部分的化合物提取出来。
萃取常见的有液-液萃取和液-固萃取。
在本次实验中，是利用水溶液从枸杞子粉末中提取出多糖类化合物，属于液-固萃取。
多糖类化合物的溶剂提取，溶剂的选择是根据原料中被提成分，即多糖类化合物的极性、共存杂质的理化特性，遵循相似相溶的原则，使有效成分从原料固体表面或组织内部向溶剂中转移的传质过程。
一般而言，分子的极性依据活性基团的种类和数目、分子的缔合程度大小进行判断，分子中含有羟基或羧基基团越多，极性就越大，亲水性就越强；反之极性就越小，亲脂性越强。
要把存在于植物细胞中各种水溶性多糖完全地提取出来,一般要求将试样尽可能地粉碎。
根据枸杞果实细胞的特点及其含有大量的还原糖(40%～50%)不宜粉碎等情况,采用了机械成浆或剪碎成细粒后再行提取。
3.2脱蛋白常用的去除多糖中蛋白质的方法有：Sevage法、三氟三氯乙烷法、三氯醋酸法，这些方法的原理是使多糖不沉淀而使蛋白质沉淀。
从资料知，枸杞子水溶性蛋白质为1.54%，这些蛋白质无论是游离态或以糖肽结合态进入热水中，在沉淀多糖的浓乙醇溶液中均被沉淀下来。
为了除去能与多糖一起沉淀的游离蛋白质，许多人在提取分离流程中采用了Sevage法脱蛋白质手续。
Sevage方法脱蛋白效果较好，它是用氯仿：戊醇或丁醇，以4：1比例混合，加到样品中振摇，使样品中的蛋白质变性成不溶状态，用离心法除去。
Sevage法：利用蛋白质在三氯乙烷等有机溶剂中变性的特点，将提取液与Sevage试剂[氯仿：正丁醇=5：1（V/V）]5：1 混合，振荡，离心，变性后的蛋白质介于提取液与Sevage 试剂交界处。
枸杞多糖
精密量取对照品溶液0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml，分别置具塞试
管中，分别加水补至2.0ml，各精密加入5%苯酚溶液1m1，摇匀，迅速精 标准曲线 的制备 密加入硫酸5ml，摇匀，放置10分钟，置40℃水浴中保温15分钟，取出， 迅速冷却至室温，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法(中国药典 2010年版Ⅰ部 附录V A)，在490nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐
匀，精密量取1ml，置具塞试管中，加水1.0ml，照标准曲线的制备项下的
方法，自“各精密加入5%苯酚溶液1m1”起，依法测定吸光度，从标准曲 线上读出供试品溶液中含葡萄糖的重量(mg)，计算，即得。
枸杞多糖的作用探究实验
实验方法与结果
枸杞子多糖与环磷酰 胺合用的抑瘤作用
小鼠皮下接种S180 细胞后2天皮下注射Cy25mg/kg，抑瘤率为31%，同时腹 腔注射LBP 10m/（kg.天）×7天，则抑瘤率提高到47%，但无显著差异 （P>0.05）。当Cy皮下注射l2.5mg/kg时抑瘤率为14%，其瘤重与肿瘤对照 组相比无显著差异，如同时合用LBP10mg/（kg.天）×7天，腹腔注射则抑瘤 率增至54%， 在诱导小鼠脾细胞白细胞介素-2（IL-2）的培养液（脾细胞5×l0/ml和 ConA4ug/ml）中加入LBP，所制备的含IL-2上清液使成年小鼠胸腺细胞在体 外增殖活性（[3H]TdR参入法）升高。老年小鼠IL-2促进淋巴细胞增殖水平显 著低于成年。LBP可使老年小鼠IL-2的这种作用显著提高，达到成年小鼠水 平。实验表明LBP对IL-2的活性有增强作用并使老年小鼠IL-2活性得到恢复。 老年小鼠脾溶血空斑形成细胞（PFC）数明显低于正常成年小鼠水平，下降 51%。给于LBP20mg/（kg.天），腹腔注射，7天，可明显提高老年小鼠脾 PFC值到正常成年水平。老年小鼠对ConA 诱导下3H一TdR掺入胸腺细胞值 也明显降低。给于LBP后掺入值显著提高，在给予LBP 5mg/kg 时可使3H一 TdR掺入胸腺细胞值也明显降低。给于LBP后掺入值显著提高，在给予LBP 5mg/kg时可使3H一TdR掺入值提高大约10倍。 LBP在5.20mg/（kg.天）×7天可显著增高脾PFC数，5mg/kg剂量可使PFC数 达正常免疫对照组的1.4倍。而25.50mg/kg时，则见PFC数明显降低，其中 25mg/kg组PFC数为正常对照组的43%。
枸杞子水提物中多糖含量的测定
312 讨 论
酚法显色测出多糖相当于葡萄糖的含量 ,这样可避免
(1) 苯酚2硫酸比色法测定枸杞多糖的原理是枸 直接用葡萄糖作为标准引起的系统误差 ,结果更准
杞多糖成分在浓 H2 SO4 的作用下 ,水解成单糖 ,并迅 速脱水生成糠醛衍生物 ,与苯酚缩合成有色化合物 , 再用分光光度法测定其枸杞多糖含量 。本法操作简
3 结果与讨论
311 精制枸杞多糖的得率
250 g 干燥的枸杞子按 211 方法制得的精制枸杞
多糖 5153 g ,得率 2121 % ( n = 3) 。
31112 换算因子
f = 3126 ( n = 5) 。
31113 枸杞子水提物的得率
50 g 枸杞子制得红色枸杞子水提物 34126 g ,得
吸光度 ,计算多糖的含量 。 216 稳定性试验
精密 吸 取 按 21411 方 法 制 备 的 样 品 溶 液 110 mL ,补水至 210 mL ,每隔 30 min 测定 1 次吸光度 ,连 续 4 h 考察其稳定性 。 217 回收率测定
精密称取精制的枸杞多糖 10 mg , 加水定容至 100 mL ,摇匀 ,得 100 μg/ mL 的多糖精品溶液 ,精密 吸取 6 份该溶液 015 mL ,并分别加入 21211 中配制 的葡萄糖贮备液 011 、012 、013 、014 、015 、016 mL ,补 水至 210 mL ,按照 21213 方法测定吸光度 ,计算加样 回收率 。
1 罗 琼 ,李瑾玮 ,张声华. 枸杞多糖 - X 组分对糖尿病家兔 降血糖的效果[J ] . 营养学报 ,1997 ,19 (2) :173～177
2 罗 琼 ,阎 俊 ,李瑾玮等. 枸杞及其枸杞多糖对家兔血脂 的影响[J ] . 营养学报 ,1997 ,19 (4) :415～417
枸杞子多糖提取
枸杞子多糖提取枸杞子为茄科植物枸杞LyciumchinenseMill的成熟果实，是我国传统的滋补中药材。
《本草纲目》中记载枸杞子具有坚筋骨、补精气诸不足、明目安神、令人长寿等功效［1］。
近年来的研究发现，植物多糖具有抗肿瘤、增强机体免疫力等功效，已是当前国内外研究的热点［2～5］。
目前人们对枸杞子多糖进行了较广泛的研究，发现枸杞多糖具有增强机体免疫力、抗肿瘤、抗衰老、降血脂、降血糖、抗疲劳、护肝、防辐射、抗缺氧等功效［6～8］，同时对多糖的分离与纯化进行了一些研究［9，10］，但对提取的工艺条件研究较少。
本文对影响枸杞子多糖提取因素进行了正交实验，优选出最佳的枸杞子多糖提取的工艺参数，同时进行了枸杞子多糖的体外抗氧化活性研究，以期为研究开发枸杞子多糖新的药物功能及保健食品提供基础数据。
1材料与方法仪器与试剂上海尤尼柯仪器有限公司产WFJ2100型分光光度计；上海安亭精密仪器厂产TDL80-28台式离心机；所用试剂均为分析纯试剂。
药材枸杞子，原产宁夏，购于大连开发区。
枸杞子多糖的提取枸杞子多糖提取的工艺流程及方法在参考已有其它种类多糖提取方法［11］的基础上，利用水提的方法，采用正交实验对枸杞子多糖的提取条件进行优化，以确立最佳工艺条件。
枸杞子多糖提取的工艺流程见图1。
图1枸杞子提取工艺流程示意图准确称取已于70℃烘干并粉碎的枸杞子2g于三角瓶中，按设计好的正交实验条件在恒温水浴中进行提取，然后将其以4000r/min离心18min，得上清液，经浓缩，再加入5倍体积的乙醇，摇匀后，在4℃冰箱中放置过夜，以4000r/min离心20min。
沉淀经干燥后得到粗多糖。
采用硫酸－苯酚法［11］测定所提取的枸杞子多糖中多糖含量，然后根据所用枸杞子的质量计算出枸杞子中多糖得率。
正交实验选用L9正交实验，确定提取枸杞子多糖的最佳工艺参数，水平因素见表1。
表1正交水平多糖含量测定采用硫酸-苯酚法测定提取的枸杞子多糖含量［11］，葡萄糖标准曲线的相关系数为，线性方程为Y=。
枸杞中枸杞多糖的提取及其含量测定
枸杞中枸杞多糖的提取及其含量测定枸杞多糖的提取与含量测定2011级药学班A6组丁艺兰，冯霞枸杞中枸杞多糖的提取及其含量测定一、实验目的：1、解中药品种品质研究的思路和方法2、熟悉枸杞多糖的了化学性质和提取方法3、掌握查阅文献和数据处理的方法二、实验原理:枸杞为茄科植物枸杞的成熟果实，它既可以作为药材，又可以作为保健食品。
经研究发现其主要活性成分之一就是枸杞多糖。
枸杞多糖是一种水溶性糖系蛋白多糖，主要由阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖、甘露糖、木糖、鼠李糖6种单糖成分组成。
现代医学研究证明：它具有抗氧化、抗肿瘤、调节免疫力、降血脂等作用，能改善老年人易疲劳、食欲缺乏和视力模糊等症状。
萃取是有机化学实验室中用来提取和纯化化合物的手段之一。
通过萃取，能从固体或液体混合物提取出所需的化合物。
它的基本原理是利用化合物在两种不相溶（或微溶）的溶剂中溶解度或分配系数的不同，使化合物从一种溶剂内转移到另一种溶剂中。
经过反复的多次萃取，将绝大部分的化合物提取出来。
萃取常见的有液-液萃取和液-固萃取。
在本次实验中，是利用水溶液从枸杞子粉末中提取出多糖类化合物，属于液-固萃取。
本实验使用水提醇沉法提取宁夏枸杞的枸杞多糖。
三、实验步骤1、枸杞多糖的提取称取干燥的枸杞80g，用研钵研成粉末状，放入烧杯内，加入一定料液比(1：8、1：10、1：12)的水溶液，放入微波搅拌器中放置30min，温度70-100摄氏度之间，功率300w，过滤，得滤渣，再加入一定料液比(1：8、1：10、1：12)的水溶液，放入微波搅拌器中放置30min，温度70-100摄氏度之间，功率300w，合并滤液，采用旋转蒸发器真空浓缩，得到的浓缩物用乙醇(乙醇终浓度大于80%)沉淀，滤布过滤，得滤渣用丙酮。
石油醚混合液(体积比1：1)于50～60℃回流0.5h，滤布过滤，得沉淀，烘干，得到枸杞粗多糖。
2、Sevage法脱蛋白取一定量的粗多糖，加蒸馏水完全溶解，使其浓度约为100mg/m L，用Sevage法脱蛋白，按枸杞多糖水溶液体积的20%加入三氯甲烷，再加入三氯甲烷体积的20%的正丁醇，剧烈振摇20min，使其充分混匀，1000r/min离心，倾出上清液，除去中间变性蛋白和下层三氯甲烷，重复以上操作直至中间层无变性蛋白，得到脱蛋白多糖。
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注意事项
■ 在Sevag法中，可以通过配合蛋白质酶消化法达到更好的提纯效 果。
在进行枸杞多糖的定量测量的时候，一定要注意葡萄糖标准溶液 以及样品的用量，否则会造成较大误差，标准曲线的绘制中要用线 性回归进行拟合。
或羟甲基糠醛后，与蒽酮（C14H100）脱水缩合，形成 糠醛的衍生物，成蓝绿色。该物质在620nm处有最大吸 收，在150ug/ml范围内，其颜色深浅可与可溶性糖含量 成正比。这一方法有很高的灵敏度，糖含量30ug左右 就可进行测定，所以可作为微量测糖含量只用。一般样 品少的情况下，采用这一方法比较合适。
枸杞多糖的含量计算
根据已经查得的数值，可以进行一下计算
c（样品1）= （0.02367 mg / 0.5 ml）* 50 ml / 21.4 mg * 100% = 11.06%
c（样品2）= （0.04735 mg / 1.0 ml）* 50 ml / 21.4 mg * 100% = 11.06%
实验原理
多糖的提取液一般浓度较低，需在提取后对提取液进 行浓缩。浓缩的方法可根据性质确定，如对热比较稳定的 多糖，可用加热蒸发或减压蒸出水分法；对于相对分子质 量大的多糖可用超滤法。向多糖溶液中加入一定量的与水 混溶的有机溶剂（如乙醇）可得到粗多糖的沉淀物。
Sevag法 Sevag法是自多糖中去除蛋白质的最缓和的方法，原
实验内容
提取
粗略称取20g 枸杞于，粉碎后放入800ml 烧杯中，加500ml 蒸馏水， 热水提取2h。过滤，加入1/4 体积的三氯甲烷‐正丁醇（4:1），剧 烈振摇15min，3000rpm 离心25min，弃去中间变性蛋白和氯仿层，留 用上清液。上清液于80℃水浴搅拌浓缩至50ml。在搅拌状态，将浓缩 液加入3 倍体积95%乙醇中，室温静置1h 左右，3000rpm 离心10min， 固形物用95% 乙醇洗涤，3000rpm离心10min,然后用无水乙醇洗涤， 3000rpm离心10min, 真空干燥, 得LBP 粗品。
实验内容
标准曲线的绘制
取干燥试管6 支，按下表数据配置一ห้องสมุดไป่ตู้列不同浓度的葡萄糖溶液。
在620nm波长下以第一管为空白试验，迅速测量吸光值，以葡 萄糖含量（mg）为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘出标准曲线。
实验内容
枸杞多糖的含量测定
精密称定20mg 多糖粗品，溶于50ml 蒸馏水中，制成样品液。 分别吸取0.5ml，1ml 多糖溶液至试管中，加蒸馏水至总体积为 1ml。冰浴中冷却，再加入4ml 蒽酮试剂，沸水浴中煮沸10min， 取出后自来水冷却，620nm 比色，其他条件与作标准曲线同。 测得吸光度值由标准曲线查出样品液的糖含量。
实验数据记录与处理
标准曲线的绘制
以下表格是不同浓度的标准葡萄糖溶液吸光度的实验数据。
即可得到如下标准曲线。
实验数据记录与处理
实验数据记录与处理
枸杞多糖的含量测定
根据标准曲线可以查得枸杞多糖样液吸光度的数值。
样液1含0.02367mg枸杞多糖， 样液2含0.04735mg枸杞多糖。
实验数据记录与处理
实验试剂仪器
实验试剂
干燥枸杞子、葡萄糖标准溶液、蒽酮、浓硫酸、95% 乙醇、无水乙醇、三氯甲烷‐正丁醇（4:1）。
实验仪器
分析天平、托盘天平、离心机（大）、离心机（小）、 水浴锅、电炉、漩涡震荡仪、真空烘箱、分光光度计、 800ml烧杯、100ml烧杯、离心管、分液漏斗、50ml容量瓶、 玻璃棒、量筒、加盖试管若干。
注意事项
蒽酮-浓硫酸比色法的注意事项：该法的特点是几乎可以测定所 有的碳水化合物，所以蒽酮法测出的碳水化合物的含量，实际上 是溶液中可溶性碳水化合物的总量。不同的糖类和蒽酮试剂显色 的深度不同，果糖最深，葡萄糖、半乳糖、甘露糖和五碳糖依次 降低，因此测定糖的混合物的时候，常常因不同糖类的比例不同 造成误差，但是测定单一糖类则可以避免此类误差。
理是利用蛋白质变性沉淀而多糖不沉淀出去蛋白质。将样 品提取液与Sevag试剂按照5:1的比例混合，剧烈震荡后离 心除去变性的蛋白质，反复多次至蛋白质除尽为止。该方 法较为温和，配合蛋白质水解酶消化法使用效果更佳。
实验原理
蒽酮-硫酸比色法进行多糖的含量测定 糖类在较高温度下可被硫酸作用而脱水生成糠醛
枸杞多糖的提取与含量测定
实验目的
1、掌握提取多糖的原理和方法； 2、掌握多糖的纯化原理及方法； 3、掌握多糖含量测定的原理及方法。
实验原理
多糖的提取方法 生物活性多糖主要有真菌多糖、植物多糖、动物多
糖等等3大类。多糖的提取首先要根据多糖的存在形式 及提取部位，决定在提取之前是否要做预处理。动物多 糖和微生物多糖多有脂质包围，一般提取时需要加入丙 酮、乙醚、乙醇或是乙酸乙酯的混合液进行回流脱脂， 释放多糖。植物多糖提取时应该注意一些含脂较高的根、 茎、叶、花、果及种子类，在提取前应先用低极性的有 机溶剂对原料进行脱脂预处理，目前多糖的提取方法主 要有溶剂提取法、生物提取法、强化提取法等等。
实验原理
易溶于水的多糖的提取 水提取多糖中的多糖大多是中性多糖。用水作溶剂来
提取多糖时，可以用热水浸煮提取，也可以用冷水浸提。
结合多糖的提取 结合多糖主要指黏多糖。以新鲜组织或丙酮脱水的组
织为原料，可用水或盐溶液提取部分多糖。但是，以为大 多数的黏多糖是与蛋白质结合的，需要用酶降解蛋白质部 分或用碱使多糖和蛋白质之间的糖肽键断裂，以促进黏多 糖在提取时的溶解。在碱性提取的同时用蛋白酶处理组织， 可将提取过程简化。提取液中存在的蛋白质可用普通蛋白 质沉淀剂沉淀，也可用其他方法进行多糖的提纯。
在进行620nm波长的吸光度测量时，一定要进行比色池的校准， 否则将会带来较大的误差，比色池的校准，直接用标准曲线绘制时 第一组试剂进行校准即可，且必须在实验开始前进行校准，及时交 换吸光度不同的比色池，用吸光度小的比色池做100%吸光度的校准 池。
谢谢！
所有实验报告内容。