第九章章_细菌类疫苗
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40
2.细菌外毒素的特性 1）毒性强 2）亲组织性 3）抗原性 4）双组分结构蛋白质
41
3.类毒素的生产 1）产毒 人工培养产毒细菌获得毒素 ①菌种 产毒力强、稳定 ②产毒培养基
42
培养基应符合下面几个方面的要求 （1）能提供产毒必要的成分 （2）能调节影响产毒诸因素的平衡 （3）能缓解对产毒有害物质的作用 （4）能保护已经产生的毒素 （5）不能含有对人有害或引起过敏反应的物 质
25
②培养及收获 生产用培养基采用牛肉汁琼脂或其他批准培养 基 ③半成品配置及分装 用灭菌的50%甘油将原液稀释成每ml含菌数 4×109 ④成品检定 鉴别试验、外观、纯菌试验、特异性毒性试验 活菌数测定、浓度测定、效力测定
26
⑤疫苗规格及有效期 安瓿瓶装，10人份含菌2×109， 2~8℃避光 保存运输，有效期两年。 （3）目前人用炭疽疫苗的缺点 ①毒力不稳定 ②采用划痕接种，免疫效果不均一 ③副反应较大 ④免疫保护力持续时间比较短
4
2.生产方法 （1）固体培养法 （2）液体通气培养法（大规模生产用） 3.细菌采集 （1）固体培养法采集时逐瓶检查，污染杂菌 者废弃。 （2）液体培养法采集时应做纯菌试验，确定 无杂菌生长。
5
4.杀菌/脱毒 终浓度不超过1%的甲醛37℃或者2~8℃处理 一定时间杀菌，之后还要进行杀菌检查，接种 于合适培养基培养，应无本菌生长。 5.原液检定及保存 （1）浓度测定（2）镜检（3）凝集试验 （4）无菌试验（5）免疫力试验（6）保存
6
6.配合稀释及分装 按要求稀释，或与其他疫苗成分按比例混合 后加入吸附剂。 7.成品检定 按规程进行
7
常用灭活细菌疫苗 1.霍乱疫苗 （1）霍乱简介
由霍乱弧菌引起的烈性肠道传染病，霍乱弧菌在小肠分泌 霍乱毒素（cholera toxin），引起腹泻及其他症状。
（2）抗原
鞭毛抗原：不耐热，无分型意义，有免疫保护作用。 菌体抗原：主要成分为LPS，耐热，根据其抗原决定基 可分为 200多钟血清型，O1和O139为流行血清型。
50
2.破伤风类毒素 1）概述 破伤风梭菌兼性厌氧，营养型菌抵抗力不强， 芽孢具有强大的抵抗力，产生溶血素和神经 毒素两种毒素，最毒的生物毒素之一，每mg 可杀死2亿只小白鼠
51
2）破伤风类毒素的生产 （1）菌株 毒力高、抗原性好、稳定 （2）培养基 厌氧培养基，含有丰富的营养和刺激产毒成分 （3）深层静止培养法培养 （4）甲醛脱毒 （5）精制 （6） Al（OH）3佐剂吸附
52
第五节 细菌多糖疫苗
引起人类疾病并带有荚膜多糖的细菌主要有： ①b型流感嗜血杆菌（Hib） ②肺炎球菌 ③流行性脑膜炎双球菌（流脑） ④伤寒杆菌
53
荚膜多糖是细菌细胞壁的主要成分，是一 种强毒力因子。其致病力来自于荚膜多糖 的抗吞噬作用。 根据荚膜多糖的化学结构和免疫学特性可 将细菌分为不同的血清型。
37
（3）鼠疫疫苗的生产工艺与检定
①菌种：采用鼠疫杆菌弱毒菌株EV株 ②培养及收获：培养基：厚金格尔琼脂培养基（pH6.8~7.2）
肉眼检查及纯菌试验合格方可收获。
③半成品配制及冻干
细菌比浊标准调整原液浓度，加冻干保护剂，分装。
④成品检定：鉴别试验、理化实验、纯菌试验、特异性毒性试验、
活菌数测定、浓度测定、菌形检查、效力测定
用法：i.d., s.c., d.s., i.m., p.o.
3
第二节 细菌灭活疫苗
灭活疫苗的生产工艺与检定 1. 菌种检定与制备 1）菌种检定：包括 培养特性、血清学特性、毒 力试验、抗原性试验、免疫力试验 2）菌种制备 菌种启开：接种于适宜的培养基上，37±1°C 一代培养； 扩量转种：一代菌种的扩量接种，于37±1°C 二代培养。
23
③抗原 菌体抗原：多糖组分，耐热性强。 荚膜抗原：由质粒决定，可以抵抗细胞的吞噬 作用，引起感染，对动物没有免疫保护力，不 能作为疫苗。 毒素抗原：水肿因子（EF）；致死因子（LF） ；保护性抗原（PA）；单独组分无毒性，成对 结合才能获得毒素活性。
24
3）炭疽疫苗 （1）目前人用炭疽疫苗 ①减毒活疫苗 ②铝胶培养上清液疫苗 （2）炭疽疫苗的生产工艺与检定 ①生产用菌株 人、兽用的炭疽活疫苗生产均采用无荚膜具毒 素（cap-tox+）菌株，我国采用的的A16R菌 种均由药品生物制品检定所分发。
27
2、结核疫苗
病原菌为结核杆菌，能引起人畜共患结核病 （1）流行概况
全世界约1/3人口感染； 每年约1600万人患病， 其中300多万人死于结核病。 中国治疗难题： ①发现率低； ②无法接受正规治疗或没钱治疗； ③耐药性
28
（2）传染与传播方式
主要由呼吸道传染， 少数由消化道和皮肤粘膜的损伤处侵入。 传播方式：①飞沫传染 ②痰液传染 ③食物传染 ④接触传染
33
③半成品配置及冻干 用特定的保护剂稀释成半成品，无菌分装到安 瓿瓶内 ④成品检定 鉴别试验、外观、溶解时间、水分、纯菌试验 、无有毒分枝杆菌试验、活菌计数、效力测定 ⑤疫苗规格及有效期 10人份含卡介菌0.4~0.6mg， 2~8℃避光 保存运输，有效期一年。
34
（4）新型结核疫苗的研究方向
第九章 细菌类疫苗
第一节 概述
1
细菌类疫苗
定义：用细菌、支原体、螺旋体或其衍生物 制成，进入人体后使机体产生抵抗相应细菌 能力的生物制品——细菌类疫苗 种类： （1）减毒活疫苗 （2）灭活疫苗 （3）亚单位疫苗或成分疫苗
2
附表：目前用于人群的细菌性疫苗
卡介苗 百日咳疫苗 脑膜炎球菌疫苗 伤寒疫苗 精制破伤风疫苗（类毒素） 霍乱弧菌疫苗 痢疾疫苗
29
（3）结核杆菌的潜伏和复燃 结核杆菌类脂质等成分能对抗溶酶体中酶的破坏 作用，使细菌在巨噬细胞内繁殖，导致巨噬细胞 裂解死亡，病状扩散至邻近淋巴结，形成原发感 染灶，当机体抗感染力较强时，淋巴结病灶逐渐 纤维化和钙化，此时病灶内的结核杆菌处于休眠 期，并潜伏下来，几年或十几年后，结合杆菌可 以重新复燃，引起成年人肺结核。
12
（3）伤寒Vi多糖疫苗 早期乙酸处理Vi多糖，抗原性明显降低，经溴化-16烷基-3-甲基氨处理Vi多糖，得到的非变性多糖可显示 较好的免疫原性，但是对2岁以下儿童无效，且多糖是 T淋巴细胞非依赖性抗原，不具有加强免疫记忆的作用 ，蛋白质-Vi多糖结合疫苗正在研制当中。
13
（4）伤寒Ty21a口服减毒活疫苗 德国学者将野生型菌株Ty2经化学突变剂亚硝 基胍处理而获得的突变株，在提供较高免疫保 力的同时具有很高的安全性。
21
1、炭疽疫苗 1）概述：
定义：由炭疽杆菌引起的人畜共患的一种急性传染病。 特点：潜伏期3-5d。临床表现为皮肤、肺部、脑膜和肠
道等处的急性感染。
临床分型： ①体表感染型
②消化道感染型 ③呼吸道感染型
22
2）炭疽菌的病原学 ①革兰氏阳性，个体最大的杆菌之一，呈竹节 状，无鞭毛，在机体内或特殊培养条件下能形 成荚膜。 ②营养要求不严，需氧，最适温度34~37℃ 炭疽杆菌的营养细胞抵抗力不强，芽孢抵抗力 强，过氧乙酸、高锰酸钾、和甲醛对芽孢的杀 灭力较强。
3）白喉类毒素的生产工艺与检定 （1）生产工艺 ①菌株：PW8或由其筛选得到 ②产毒培养基：氮源、能源、生长因子、无机 离子 ③培养：严格控制杂菌污染 ④精制：硫酸铵、活性炭分段盐析法或其他适 宜方法 ⑤脱毒：甲醛脱毒后进行脱毒检查 ⑥吸附精制白喉类毒素：以Al（OH）3吸附剂 为免疫佐剂
49
（2）白喉类毒素的检定 ①鉴别试验 ②外观 ③化学检定 ④安全试验 ⑤保护力试验
14
3.百日咳疫苗 1）概述 由百日咳杆菌引起的急性呼吸道传染病，主要 侵犯婴幼儿，全病程较长，可持续几个月，故 名百日咳。百日咳菌可分四种相变：Ⅰ相菌毒 力最强，有免疫原性；Ⅳ相毒力消失，无免疫 原性；Ⅱ、Ⅲ相菌介于Ⅰ、 Ⅳ之间。
15
2）百日咳死疫苗的生产工艺与检定 ①菌种 生产用菌种采用百日咳Ⅰ相含1型、2型、和3 型凝集原的菌株。 ②培养方法 固体培养采用半综合碳琼脂培养基，也可发酵 生产。
30
（4）结合杆菌抗药性 伴随着结核病回升的另外一个问题是抗药性的 产生，多重抗药性的发生率也越来越高，研制 和开发有效的结合新疫苗势在必行。
Βιβλιοθήκη Baidu
31
2）结核杆菌的病原学 ①革兰氏阳性，含分枝酸，具有抗酸性，胞壁 含大量脂质，有较强的抵抗力 ②灭菌方法 ③具有免疫佐剂活性
32
3）结核疫苗——卡介苗的生产工艺与检定 卡介苗（BCG）是牛型结合杆菌经培养后，收 集菌体，加入稳定剂冻干后制成的，用于预防 结核病 ①菌种 卡介菌D2PB302菌株 ②培养和收集 生产用培养基采用苏通马铃薯培养基、胆汁马铃薯培 样基或液体苏通培养基，搜集菌膜压干，低温研磨， 加入稳定剂，制成原液。
17
③原液检定 浓度测定、镜检、血清学试验、无菌试验、特 异性毒性试验、效价测定。 ④原液保存 2~8℃，有效期3年 ⑤配合稀释及分装 按原液中具有1、2和3型菌株的配比混合，也 可制成百白破三联疫苗（百日咳、白喉、破伤风）
18
第三节 细菌减毒活疫苗
一、生产工艺与检定
19
20
二、常用细菌减毒活疫苗 炭疽疫苗 结核疫苗 鼠疫疫苗
8
（3）目前最常用的霍乱疫苗 口服霍乱灭活全菌体+重组霍乱毒素B亚单位 重组霍乱毒素B亚单位（sBS）具有黏膜免疫 佐剂特性，该疫苗安全有效且无明显不良反 应，保护力持久。
9
2.伤寒疫苗 （1）概述 由伤寒沙门杆菌引起的急性全身感染，患者出 现高热，胃肠炎，败血症等。含有三类抗原: LPS，荚膜多糖，鞭毛抗原，耐药性比较严重。 （2）生产工艺与检定 全菌体死疫苗分三种，按杀菌剂不同可分为丙 酮灭活苗，加温加酚灭活苗，甲醛灭活苗。
10
①菌株 我国现用两个菌株生产疫苗： 国际通用Ty2株 国内代表株 ②培养基及培养方法 采用马丁琼脂、肉汤琼脂或其他经批准的培养 基，主要采用固体培养法，也可进行发酵生产 接种后35~37℃培养18~24h。
11
③成品检定 鉴别试验、外观、化学检定、无菌试验、异常 毒性试验、菌形及纯度检查 ④疫苗规格及有效期 每安瓿瓶5ml，每人用剂量含伤寒菌6×107~ 3×108，2~8℃避光保存和运输，有效期1.5 年。
①以BCG为载体的基因工程结核疫苗 ②营养缺陷型结核减毒活疫苗（牛型/人型） ③结核亚单位疫苗 ④结核DNA疫苗
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3、鼠疫疫苗 （1）概述：
鼠疫是由鼠疫杆菌引起的自然疫源性烈性传染病。 主要以“鼠→蚤→人”为主要传播方式。
36
（2）鼠疫杆菌的病原学
①鼠疫杆菌属肠杆菌科，耶尔森氏菌属。 革兰染色阴性短小杆菌。有荚膜，无鞭毛，无芽胞。 ②抗原和免疫原性
⑤疫苗规格及效期 10人份含菌8×109， 2~8℃避光保存运输，有效期一年。
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第四节 类毒素疫苗
一、概述
类毒素是一种主动免疫制剂，用于细菌毒素性 疾病的预防。
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1.有关毒素的几个概念 ①细菌毒素：致病细菌产生的特异性毒性物质 ②外毒素：细菌在生长过程中产生，可扩散或 自溶后释放到菌体外 ③内毒素：菌体细胞壁的结构成分，生存时不 释放，死亡后释放至外界 ④类毒素：外毒素经处理后去除毒性但仍保留 免疫原性
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2）白喉杆菌的病原学 （1）形态及生活习性：革兰氏阳性棒状杆菌 ，需氧或兼性厌氧，抵抗力较弱 （2）分型：重型、中间型、轻型，流行中的 多为轻型，引起的症状最轻 （3）白喉毒素（Diphtheria toxin ）的分子 结构及致病机制
47
Diphtheria toxin: mode of action and structure.Collier RJ. Bacteriol Rev. 1975 March; 39(1): 54–85.
43
③培养方法 根据菌种的特性与具体的实验来决定 2）脱毒 影响因素：温度、pH、甲醛浓度、毒素 3）精制 适用于规模化生产，条件温和，避免对抗原的 损伤
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4.毒性逆转及其相关因素 毒素类毒化后仍有毒性逆转的可能，与毒性逆 转有关的因素有： ①稀释 ②脱毒条件 ③小分子物质的影响
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二、常用细菌类毒素疫苗 1.白喉类毒素 1）概述 由白喉杆菌引起的急性呼吸道传染病，产生外 毒素引起局部炎症及组织坏死
2.细菌外毒素的特性 1）毒性强 2）亲组织性 3）抗原性 4）双组分结构蛋白质
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3.类毒素的生产 1）产毒 人工培养产毒细菌获得毒素 ①菌种 产毒力强、稳定 ②产毒培养基
42
培养基应符合下面几个方面的要求 （1）能提供产毒必要的成分 （2）能调节影响产毒诸因素的平衡 （3）能缓解对产毒有害物质的作用 （4）能保护已经产生的毒素 （5）不能含有对人有害或引起过敏反应的物 质
25
②培养及收获 生产用培养基采用牛肉汁琼脂或其他批准培养 基 ③半成品配置及分装 用灭菌的50%甘油将原液稀释成每ml含菌数 4×109 ④成品检定 鉴别试验、外观、纯菌试验、特异性毒性试验 活菌数测定、浓度测定、效力测定
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⑤疫苗规格及有效期 安瓿瓶装，10人份含菌2×109， 2~8℃避光 保存运输，有效期两年。 （3）目前人用炭疽疫苗的缺点 ①毒力不稳定 ②采用划痕接种，免疫效果不均一 ③副反应较大 ④免疫保护力持续时间比较短
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2.生产方法 （1）固体培养法 （2）液体通气培养法（大规模生产用） 3.细菌采集 （1）固体培养法采集时逐瓶检查，污染杂菌 者废弃。 （2）液体培养法采集时应做纯菌试验，确定 无杂菌生长。
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4.杀菌/脱毒 终浓度不超过1%的甲醛37℃或者2~8℃处理 一定时间杀菌，之后还要进行杀菌检查，接种 于合适培养基培养，应无本菌生长。 5.原液检定及保存 （1）浓度测定（2）镜检（3）凝集试验 （4）无菌试验（5）免疫力试验（6）保存
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6.配合稀释及分装 按要求稀释，或与其他疫苗成分按比例混合 后加入吸附剂。 7.成品检定 按规程进行
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常用灭活细菌疫苗 1.霍乱疫苗 （1）霍乱简介
由霍乱弧菌引起的烈性肠道传染病，霍乱弧菌在小肠分泌 霍乱毒素（cholera toxin），引起腹泻及其他症状。
（2）抗原
鞭毛抗原：不耐热，无分型意义，有免疫保护作用。 菌体抗原：主要成分为LPS，耐热，根据其抗原决定基 可分为 200多钟血清型，O1和O139为流行血清型。
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2.破伤风类毒素 1）概述 破伤风梭菌兼性厌氧，营养型菌抵抗力不强， 芽孢具有强大的抵抗力，产生溶血素和神经 毒素两种毒素，最毒的生物毒素之一，每mg 可杀死2亿只小白鼠
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2）破伤风类毒素的生产 （1）菌株 毒力高、抗原性好、稳定 （2）培养基 厌氧培养基，含有丰富的营养和刺激产毒成分 （3）深层静止培养法培养 （4）甲醛脱毒 （5）精制 （6） Al（OH）3佐剂吸附
52
第五节 细菌多糖疫苗
引起人类疾病并带有荚膜多糖的细菌主要有： ①b型流感嗜血杆菌（Hib） ②肺炎球菌 ③流行性脑膜炎双球菌（流脑） ④伤寒杆菌
53
荚膜多糖是细菌细胞壁的主要成分，是一 种强毒力因子。其致病力来自于荚膜多糖 的抗吞噬作用。 根据荚膜多糖的化学结构和免疫学特性可 将细菌分为不同的血清型。
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（3）鼠疫疫苗的生产工艺与检定
①菌种：采用鼠疫杆菌弱毒菌株EV株 ②培养及收获：培养基：厚金格尔琼脂培养基（pH6.8~7.2）
肉眼检查及纯菌试验合格方可收获。
③半成品配制及冻干
细菌比浊标准调整原液浓度，加冻干保护剂，分装。
④成品检定：鉴别试验、理化实验、纯菌试验、特异性毒性试验、
活菌数测定、浓度测定、菌形检查、效力测定
用法：i.d., s.c., d.s., i.m., p.o.
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第二节 细菌灭活疫苗
灭活疫苗的生产工艺与检定 1. 菌种检定与制备 1）菌种检定：包括 培养特性、血清学特性、毒 力试验、抗原性试验、免疫力试验 2）菌种制备 菌种启开：接种于适宜的培养基上，37±1°C 一代培养； 扩量转种：一代菌种的扩量接种，于37±1°C 二代培养。
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③抗原 菌体抗原：多糖组分，耐热性强。 荚膜抗原：由质粒决定，可以抵抗细胞的吞噬 作用，引起感染，对动物没有免疫保护力，不 能作为疫苗。 毒素抗原：水肿因子（EF）；致死因子（LF） ；保护性抗原（PA）；单独组分无毒性，成对 结合才能获得毒素活性。
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3）炭疽疫苗 （1）目前人用炭疽疫苗 ①减毒活疫苗 ②铝胶培养上清液疫苗 （2）炭疽疫苗的生产工艺与检定 ①生产用菌株 人、兽用的炭疽活疫苗生产均采用无荚膜具毒 素（cap-tox+）菌株，我国采用的的A16R菌 种均由药品生物制品检定所分发。
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2、结核疫苗
病原菌为结核杆菌，能引起人畜共患结核病 （1）流行概况
全世界约1/3人口感染； 每年约1600万人患病， 其中300多万人死于结核病。 中国治疗难题： ①发现率低； ②无法接受正规治疗或没钱治疗； ③耐药性
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（2）传染与传播方式
主要由呼吸道传染， 少数由消化道和皮肤粘膜的损伤处侵入。 传播方式：①飞沫传染 ②痰液传染 ③食物传染 ④接触传染
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③半成品配置及冻干 用特定的保护剂稀释成半成品，无菌分装到安 瓿瓶内 ④成品检定 鉴别试验、外观、溶解时间、水分、纯菌试验 、无有毒分枝杆菌试验、活菌计数、效力测定 ⑤疫苗规格及有效期 10人份含卡介菌0.4~0.6mg， 2~8℃避光 保存运输，有效期一年。
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（4）新型结核疫苗的研究方向
第九章 细菌类疫苗
第一节 概述
1
细菌类疫苗
定义：用细菌、支原体、螺旋体或其衍生物 制成，进入人体后使机体产生抵抗相应细菌 能力的生物制品——细菌类疫苗 种类： （1）减毒活疫苗 （2）灭活疫苗 （3）亚单位疫苗或成分疫苗
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附表：目前用于人群的细菌性疫苗
卡介苗 百日咳疫苗 脑膜炎球菌疫苗 伤寒疫苗 精制破伤风疫苗（类毒素） 霍乱弧菌疫苗 痢疾疫苗
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（3）结核杆菌的潜伏和复燃 结核杆菌类脂质等成分能对抗溶酶体中酶的破坏 作用，使细菌在巨噬细胞内繁殖，导致巨噬细胞 裂解死亡，病状扩散至邻近淋巴结，形成原发感 染灶，当机体抗感染力较强时，淋巴结病灶逐渐 纤维化和钙化，此时病灶内的结核杆菌处于休眠 期，并潜伏下来，几年或十几年后，结合杆菌可 以重新复燃，引起成年人肺结核。
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（3）伤寒Vi多糖疫苗 早期乙酸处理Vi多糖，抗原性明显降低，经溴化-16烷基-3-甲基氨处理Vi多糖，得到的非变性多糖可显示 较好的免疫原性，但是对2岁以下儿童无效，且多糖是 T淋巴细胞非依赖性抗原，不具有加强免疫记忆的作用 ，蛋白质-Vi多糖结合疫苗正在研制当中。
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（4）伤寒Ty21a口服减毒活疫苗 德国学者将野生型菌株Ty2经化学突变剂亚硝 基胍处理而获得的突变株，在提供较高免疫保 力的同时具有很高的安全性。
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1、炭疽疫苗 1）概述：
定义：由炭疽杆菌引起的人畜共患的一种急性传染病。 特点：潜伏期3-5d。临床表现为皮肤、肺部、脑膜和肠
道等处的急性感染。
临床分型： ①体表感染型
②消化道感染型 ③呼吸道感染型
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2）炭疽菌的病原学 ①革兰氏阳性，个体最大的杆菌之一，呈竹节 状，无鞭毛，在机体内或特殊培养条件下能形 成荚膜。 ②营养要求不严，需氧，最适温度34~37℃ 炭疽杆菌的营养细胞抵抗力不强，芽孢抵抗力 强，过氧乙酸、高锰酸钾、和甲醛对芽孢的杀 灭力较强。
3）白喉类毒素的生产工艺与检定 （1）生产工艺 ①菌株：PW8或由其筛选得到 ②产毒培养基：氮源、能源、生长因子、无机 离子 ③培养：严格控制杂菌污染 ④精制：硫酸铵、活性炭分段盐析法或其他适 宜方法 ⑤脱毒：甲醛脱毒后进行脱毒检查 ⑥吸附精制白喉类毒素：以Al（OH）3吸附剂 为免疫佐剂
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（2）白喉类毒素的检定 ①鉴别试验 ②外观 ③化学检定 ④安全试验 ⑤保护力试验
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3.百日咳疫苗 1）概述 由百日咳杆菌引起的急性呼吸道传染病，主要 侵犯婴幼儿，全病程较长，可持续几个月，故 名百日咳。百日咳菌可分四种相变：Ⅰ相菌毒 力最强，有免疫原性；Ⅳ相毒力消失，无免疫 原性；Ⅱ、Ⅲ相菌介于Ⅰ、 Ⅳ之间。
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2）百日咳死疫苗的生产工艺与检定 ①菌种 生产用菌种采用百日咳Ⅰ相含1型、2型、和3 型凝集原的菌株。 ②培养方法 固体培养采用半综合碳琼脂培养基，也可发酵 生产。
30
（4）结合杆菌抗药性 伴随着结核病回升的另外一个问题是抗药性的 产生，多重抗药性的发生率也越来越高，研制 和开发有效的结合新疫苗势在必行。
Βιβλιοθήκη Baidu
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2）结核杆菌的病原学 ①革兰氏阳性，含分枝酸，具有抗酸性，胞壁 含大量脂质，有较强的抵抗力 ②灭菌方法 ③具有免疫佐剂活性
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3）结核疫苗——卡介苗的生产工艺与检定 卡介苗（BCG）是牛型结合杆菌经培养后，收 集菌体，加入稳定剂冻干后制成的，用于预防 结核病 ①菌种 卡介菌D2PB302菌株 ②培养和收集 生产用培养基采用苏通马铃薯培养基、胆汁马铃薯培 样基或液体苏通培养基，搜集菌膜压干，低温研磨， 加入稳定剂，制成原液。
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③原液检定 浓度测定、镜检、血清学试验、无菌试验、特 异性毒性试验、效价测定。 ④原液保存 2~8℃，有效期3年 ⑤配合稀释及分装 按原液中具有1、2和3型菌株的配比混合，也 可制成百白破三联疫苗（百日咳、白喉、破伤风）
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第三节 细菌减毒活疫苗
一、生产工艺与检定
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二、常用细菌减毒活疫苗 炭疽疫苗 结核疫苗 鼠疫疫苗
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（3）目前最常用的霍乱疫苗 口服霍乱灭活全菌体+重组霍乱毒素B亚单位 重组霍乱毒素B亚单位（sBS）具有黏膜免疫 佐剂特性，该疫苗安全有效且无明显不良反 应，保护力持久。
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2.伤寒疫苗 （1）概述 由伤寒沙门杆菌引起的急性全身感染，患者出 现高热，胃肠炎，败血症等。含有三类抗原: LPS，荚膜多糖，鞭毛抗原，耐药性比较严重。 （2）生产工艺与检定 全菌体死疫苗分三种，按杀菌剂不同可分为丙 酮灭活苗，加温加酚灭活苗，甲醛灭活苗。
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①菌株 我国现用两个菌株生产疫苗： 国际通用Ty2株 国内代表株 ②培养基及培养方法 采用马丁琼脂、肉汤琼脂或其他经批准的培养 基，主要采用固体培养法，也可进行发酵生产 接种后35~37℃培养18~24h。
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③成品检定 鉴别试验、外观、化学检定、无菌试验、异常 毒性试验、菌形及纯度检查 ④疫苗规格及有效期 每安瓿瓶5ml，每人用剂量含伤寒菌6×107~ 3×108，2~8℃避光保存和运输，有效期1.5 年。
①以BCG为载体的基因工程结核疫苗 ②营养缺陷型结核减毒活疫苗（牛型/人型） ③结核亚单位疫苗 ④结核DNA疫苗
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3、鼠疫疫苗 （1）概述：
鼠疫是由鼠疫杆菌引起的自然疫源性烈性传染病。 主要以“鼠→蚤→人”为主要传播方式。
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（2）鼠疫杆菌的病原学
①鼠疫杆菌属肠杆菌科，耶尔森氏菌属。 革兰染色阴性短小杆菌。有荚膜，无鞭毛，无芽胞。 ②抗原和免疫原性
⑤疫苗规格及效期 10人份含菌8×109， 2~8℃避光保存运输，有效期一年。
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第四节 类毒素疫苗
一、概述
类毒素是一种主动免疫制剂，用于细菌毒素性 疾病的预防。
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1.有关毒素的几个概念 ①细菌毒素：致病细菌产生的特异性毒性物质 ②外毒素：细菌在生长过程中产生，可扩散或 自溶后释放到菌体外 ③内毒素：菌体细胞壁的结构成分，生存时不 释放，死亡后释放至外界 ④类毒素：外毒素经处理后去除毒性但仍保留 免疫原性
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2）白喉杆菌的病原学 （1）形态及生活习性：革兰氏阳性棒状杆菌 ，需氧或兼性厌氧，抵抗力较弱 （2）分型：重型、中间型、轻型，流行中的 多为轻型，引起的症状最轻 （3）白喉毒素（Diphtheria toxin ）的分子 结构及致病机制
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Diphtheria toxin: mode of action and structure.Collier RJ. Bacteriol Rev. 1975 March; 39(1): 54–85.
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③培养方法 根据菌种的特性与具体的实验来决定 2）脱毒 影响因素：温度、pH、甲醛浓度、毒素 3）精制 适用于规模化生产，条件温和，避免对抗原的 损伤
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4.毒性逆转及其相关因素 毒素类毒化后仍有毒性逆转的可能，与毒性逆 转有关的因素有： ①稀释 ②脱毒条件 ③小分子物质的影响
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二、常用细菌类毒素疫苗 1.白喉类毒素 1）概述 由白喉杆菌引起的急性呼吸道传染病，产生外 毒素引起局部炎症及组织坏死