菌种制作及保藏

第三章 菌种制作及保藏
第一节 概述 第二节 菌种生产的基本设备 第三节 菌种的分级与种型 第四节 生产流程与日程安排 第五节 培养基 第六节 消毒与灭菌 第七节 纯种分离 第八节 菌种的培养、检验及保藏 第九节 菌种的衰退及复壮
第一节 概述
一、概念
菌种(Spawn )：经人工培养 并进行扩大繁殖， 可用于生产的纯菌丝体。
5．颗粒种 指以木屑、秸秆、堆肥等适宜材料用人工 工艺制成颗粒型基质后生产的菌种。近些年来颗粒种的 生产工艺正日益完善，虽然目前尚未成为—种主要的种 型，但具有较广阔的发展前景。
第四节 生产流程与日程安排
一、试管种的制作流程
PDA配方 分装
加棉塞
灭菌(121℃ 30min)
冷却至60℃
摆斜面
接种
培养
(二)、按营养物质的成分；可分为天然培养基、 半合成培养基和合成培养基 (三)、根据培养基的主料，可分为马铃薯培养基、 玉米粉培养基、胡萝卜培养基、果汁培养基、棉 籽壳培养基、麦粒培养基、木屑培养基、木块培 养基、粪草培养基等。
(四)、根据使用目的，可分为基础培养基(如PDA)、加富
培养基(如PDA+VB1)、选择培养基(如PDA+青霉素)和鉴
别培养基。
白腐 由于某些担子菌的活动，木材纤维素、
木质素因酶均被降解，导致木材的白
鉴别培养基
色海绵状外貌，如松栓菌导致白腐。
褐腐 由于某些担子菌的活动，纤维素被 降解,而褐色木质素保留，木材易粉 碎。如香菇、茯苓导致褐腐
麦芽提取物25g
牛肉膏5g
25℃、21天每7天查一次，退色的
琼脂20g
为白腐不退色的褐腐
第三节 菌种的分级与种型
一、分级 1、母种：经过组织分离、孢子分离、基内菌丝
分离所获得纯培养，通常为试管种，用来保藏或 繁殖二级种看图
2、原种：由母种繁殖而成，通常用塑料袋、玻 璃瓶作容器，用来繁殖三级种
3、栽培种：由母种移植到固体或液体培养基上， 经扩大繁殖并可用于生产的菌丝体。 看图
二、固体种与液体种 1、常见的固体种有：粪草种、麦粒种、木屑种、
一、配置原则 (一)、因培养对象的不同需求配置 (二)、保持适宜的PH范围
一般：6.5-7 猴头：? 草菇：10-12 (三)、各培养基组分保持一定的配比
eg: 双孢菇 C/N=33：1 (四)、根据培养目的选用相应的培养基
二、培养基的类型及应用
(一)、按培养基的物理状态分液体培养基、固化 培养基和固体培养基
袋料
香菇 木耳 银耳 金针菇 侧耳类 猴头菇 双孢菇 草菇
2-4月 3-4月 3-4月
8-9月 2-3月(春) 8-9月(秋) 3-4月(春) 9-10月(秋) 11-1月 2-4月(春) 8-10月(秋) 3-4月(春) 8-9月(秋) 9-10月 6-8月 (华中) 4-10月(华南)
第五节 培养基
二、菌种制作技术的发展简史
1、双孢菇菌种 1894年（法国），纯种问世 1902年，组织分离法获得纯种 美国人制得瓶式菌种
1932年，发明麦粒种 2、香菇菌种
1935年,日本人(森喜 作)开始研制香菇木屑种 1942年，获得成功
三、菌种制作与食用菌栽培的关系
1、栽培需要菌种，从而促进制种技术的发展。
质检
保藏
二、 二(三)级种的制作流程
木屑(78%) 麸皮(20%) 蔗糖(1%) 石膏(1%) 水适量(55%-65%)
装瓶(袋)
加棉塞
灭菌 冷却 接种
三、 各级菌种的培养时间 1、试管种 7-10天 2、二级种 30-60天 3、三级种 30-60天
培养
质检
四、全年菌种生产时间安排
时间 名称
段木
纯净水1000mL
（白腐菌、褐腐菌鉴别培养基）
加入0.007%龙胆紫
• 三、常用培养基配方及配制方法
• （一）母种培养基：试管培养基；常用 的物质有马铃薯、葡萄糖、磷酸二氢钾、 硫酸镁、琼脂和维生素B1。
• （二）原种和栽培种培养基
• 1、培养基配方
• （1）木屑培养基：阔叶树木屑（竹屑） 78%、麸皮或米糠20%、糖1%、石膏粉 1%。适用于木腐菌的原种、栽培种的培 养，如香菇、平菇、木耳、金针菇、猴 头、灵芝生产。
电热高压蒸汽灭菌锅
高压蒸汽灭菌锅
利用周转筐装载菌种瓶（袋）灭菌
三、常用药品
1、HgCl2 2、C2H5OH（60%—70%） 3、KMnO4 4、CH3COOOH（过氧乙酸） 5、HCHO(38%) 6、C6H4CH3OH（来苏尔） 7、C6H5OH 8、C21H38NB（新洁尔灭） 9、气雾消毒盒
超净工作台
接种室与接种箱
• （四）接种工具
• 有接种针、接种环、接种钩、接种锄、 接种铲、接种耙、接种刀、镊子、接种 器等。
• （五）酒精灯 • （六）培养设备：培养室、培养箱 • 三、灭菌设备
蒸汽灭菌设备
蒸汽灭菌设备是利用其产生的湿热蒸汽进行灭菌的 设备。根据所产生的蒸汽压力及工作性能可分为如 下两类： 1、高压蒸汽灭菌锅 高压蒸汽灭菌锅 是利用锅内高压 高温蒸汽进行灭菌 的设备。 2、常压蒸汽灭菌锅
柿籽壳种、木块种、枝条种 2、常见的液体种有：我国目前液体培养的食用菌
菌种有香菇、平菇、银耳、黑木耳、猴头菇、草菇、 灰树花、蜜环菌茯苓、滑菇、裂褶菌等。
液体菌种的培养方法常见的有摇瓶振荡培养和深
层发酵培养两种，近年来，根据我国的国情研究成 功了多种简易发酵培养法。由于液体菌种生产一次 性投资大(尤以发酵罐培养)，保存、运输较为困难， 百度文库此目前应用还不多。
2、菌种技术的每一项革新都促进栽培的改进和提 高。
3、提高EM育种水平和制种质量，强化菌种生产 与流通管理，向更高、更新的目标迈进。
第二节 菌种生产的基本设备
• 一、接种设备 • 用于分离和扩大培养各级菌种的专业设
备和工具。 • （一）接种室：4～8㎡ • （二）接种箱：长143㎝、宽86㎝、高
159㎝ • （三）超净工作台
三 菌种的种型
1．木屑种 指以含木质素、纤维素较多的木屑为主要 原料制作的菌种
2．粪草种 指以发酵或不发酵的粪草为主要原料生产 的苗种。
3．谷粒种 指用大麦、小麦和黑麦等谷类作物籽粒作 培养基生产的菌种。
4．木块种 指用圆形、锲形等形状的小木块为培养基 制作的菌种，这种种型的菌种通常仅用于香菇、木耳等 木腐菌的段木栽培。