过敏原特异性抗体IgEELISA检测试剂盒说明书

过敏原特异性抗体IgE ELISA 检测试剂盒说明书

【用途】

定性和定量检测过敏原特异性人IgE。过敏反应是一种特殊的病理性免疫反应，是人体对一种或多种原本无害的物质产生不正常的反应。其主要原因是患者吸入或食入含有过敏性物体刺激机体，触发细胞大量分泌药理活性物质，引起一系列过敏症状，例如过敏性哮喘，过敏性鼻炎，湿疹、发痒、流泪、皮炎以及肠胃道过敏症等。同时产生相当量的E型免疫球蛋白（Immunoglobulin E 即Ig E），引起人类过敏反应的过敏原种类繁多，如能从中查到引起机体过敏的物质，就能很好地预防和治疗过敏反应。

本检测盒是一种用酶联免疫法（ELISA）快速、精确测定体内引起过敏反应的特异E型免疫球蛋白的体外诊断工具。它可定性和定量地测定人体抗特种过敏原的E型免疫球蛋白在血清中的水平，从而帮助医生正确地诊断引起病人过敏反应的过敏原。本过敏原检测盒适合于广泛的过敏原检测，特别适用于少儿患者，同时也非常适用于湿疹以及其他皮肤病患者和对皮试过敏的患者。

【检测原理】

本试剂盒采用酶免ELISA法。当具有过敏抗原固化于表面的载体与病人血清培养在一起后，血清中特异性IgE（一抗）就会特异地结合到抗原上，此特异结合的抗体可被酶联的二抗所识别，加入显色剂后，二抗所联的酶使显色剂呈蓝色，加终止液后呈黄色。显色的深度与血清中特异性IgE成正比；能定性/半定量地检测血清中特异性IgE的浓度。

【检测盒组成】

过敏原包被微孔酶标板(Coated Wells) 96wells HRP酶联二抗12 ml

浓缩洗涤液(15X)(Washing Conc.) 40ml×1 TMB单组分显色液12 ml

硫酸终止液(Stop Solution) 12ml 样本稀释液(Sample Diluent) 12 ml

【检测动态范围】

0.35 ～100 IU/ml (0.84ng ~ 240 ng/ml)。

【重现性】

CV 10%～15%

【重现性】

0.30IU/ml (0.72ng/ml)

【注意事项】

1.严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温

20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。

2.洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入HRP或底物前确保尽量吸干孔内液体。操作过程中

也不要让微孔完全干燥。

3.消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。

4.底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。

5.避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。

6.在储存和温育时避免强光直接照射。

7.平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。

8.任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中

反应试剂的生物活性。

9.不能使用过期产品。

10.如果可能传播疾病，所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。

11.每一份样本，在塑料框架上安置一条过敏原包被微孔酶标板条，并用病人姓名或标识号码作为相

应的标记。每条酶标板的第一个孔为空白孔。

12.如果病人血清的所有孔的OD值>0.2，应将该病人血清标本用样品稀释液适当稀释后重新测定。

【保存】

贮藏于2-8︒C。

【准备工作】

洗涤缓冲液：检测开始前，根据需求量，将浓洗涤缓冲液（15X）稀释15倍，即取一份（一体积的浓洗涤缓冲液（15X）加入14份蒸馏水中，混匀后，装入一挤压式洗瓶备用。

【检测步骤】

1、将所有试剂平衡至室温（20-25℃）。

2、在总IgE孔和特异性过敏原孔中分别加入100ul血清，轻轻混匀10秒，37︒C温育45分钟。

3、洗板：倒尽板内液体，每孔加入250µl稀清洗液洗涤酶标板，然后倒尽液体，再加入250µl洗涤

液，倒尽液体，如此反复洗涤5次，最后将酶标板翻扣在厚叠吸水纸上拍干。

4、在所有孔中加入100ul HRP酶联二抗（绿色），37︒C温育45分钟。

5、洗板：重复步骤3操作。

6、在所有反应孔中加入100 µl TMB底物显色液。，置室避光反应25-30分钟。

7、在所有反应孔中加入100 µl终止液。

8、使用标准酶标仪在450nm波长下，测每孔的OD值。

【Cut-off 值】

Cut-off值0.15+空白孔OD值（均值）

【结果判断】

阴性和阳性判断

（1）cut-off 值± 10% 的范围区间为分区

（2）以cut-off值90%为阴性

（3）以cut-off值110%为阳性

致敏程度定量分级