单宁含量测定(三种方法)

方法二、EDTA络合滴定法
一、 实验目的
了解单宁的性质及熟练掌握单宁含量的测定方法
二、实验原理
根据单宁可与重金属离子形成络合物沉淀的性质，在样品提取 根据单宁可与重金属离子形成络合物沉淀的性质， 液中加入过量的标准Zn(Ac)2溶液，待反应完全后，再用EDTA 溶液，待反应完全后，再用 液中加入过量的标准 标准溶液滴定剩余的，根据EDTA标准溶液的消耗量，可计算出 标准溶液的消耗量， 标准溶液滴定剩余的，根据 标准溶液的消耗量 样品中单宁的含量。 样品中单宁的含量。
三、材料、仪器与试剂 材料、
1、材料：香蕉（未熟透） 、材料：香蕉（未熟透） 2、仪器 ：天平 、 烧杯（ 、 烧杯（50、100mL） ） 滤纸（Φ15㎝ 滤纸（Φ15㎝）2张 研钵 漏斗 刻度试管（ 10mL） 刻度试管（5、10mL）
三角瓶（100mL） 量筒10mL 三角瓶（100mL） 量筒10mL 25mL碱式滴定管 25mL碱式滴定管 容量瓶 100mL 恒温水浴锅50 50℃ 恒温水浴锅50℃ 3 、试剂 标准溶液：称取约1.60g 溶于1000mL蒸馏水中， 1000mL蒸馏水中 ①0.01 mol/L KMnO4 标准溶液：称取约1.60g KMnO4溶于1000mL蒸馏水中，盖 上表面皿，加热至沸并保持微沸状态约1h 冷却后， 1h。 上表面皿，加热至沸并保持微沸状态约1h。冷却后，放暗处约一周后用垂熔 玻璃漏斗或玻璃丝过滤。将滤液转至棕色瓶内暗处保存。 标定KMnO 玻璃漏斗或玻璃丝过滤。将滤液转至棕色瓶内暗处保存。用NaC2O4标定KMnO4 。 硫酸溶液： 138.8mL浓硫酸稀释至1000mL。 浓硫酸稀释至1000mL ②2.5 mol/L硫酸溶液：取138.8mL浓硫酸稀释至1000mL。 ③活性炭 四、操作步骤 称取5g样品在研钵中研磨成匀浆， 5g样品在研钵中研磨成匀浆 100mL， 1、称取5g样品在研钵中研磨成匀浆，用漏斗转移容量瓶定容至 100mL，混匀后 用干燥滤过滤，保留滤液。 用干燥滤过滤，保留滤液。 吸取样品滤液5.0mL 5.0mL， 100mL三角瓶中 三角瓶中， 10mL水和 水和5mL 2、吸取样品滤液5.0mL，于100mL三角瓶中，加10mL水和5mL 2.5 mol/L H2SO4， 混匀，微热（50℃）5min后用0.01 mol/L KMnO4 标准溶液滴定至淡粉色维持 混匀，微热（50℃）5min后用 30s不褪色即为终点 记下消耗的体积V 重复一次做两个平行样。 不褪色即为终点， 30s不褪色即为终点，记下消耗的体积V1，重复一次做两个平行样。 吸取样品滤液5.0mL 5.0mL， 100mL烧杯中 并加3g活性炭，加热搅拌10min 烧杯中， 3g活性炭 10min， 3、吸取样品滤液5.0mL，于100mL烧杯中，并加3g活性炭，加热搅拌10min，过滤 用少量的热蒸馏水冲洗残渣，收集的滤液中加2.5 硫酸5mL 5mL， 用少量的热蒸馏水冲洗残渣，收集的滤液中加2.5 mol/L硫酸5mL，同样用 标准溶液滴定至终点，记下消耗的体积V 0.01 mol/L KMnO4 标准溶液滴定至终点，记下消耗的体积V2,重复一次做两 个平行样。 个平行样。
方法三、高锰酸钾法 法三、
一、目的
了解单宁性质及熟练掌握单宁含量的测定方法
二、原理
作为多酚，单宁是一种强还原剂，极易被氧化剂氧化，还可 作为多酚，单宁是一种强还原剂，极易被氧化剂氧化， 被活性炭吸附。本测定以高锰酸钾为氧化剂， 被活性炭吸附。本测定以高锰酸钾为氧化剂，根据样品中单宁 可以被活性炭吸附，测定样品液用活性碳吸附前后的氧化值之 可以被活性炭吸附， 计算单宁物质的含量。 差，计算单宁物质的含量。
管号 试剂
标准单宁溶液/ml 标准单宁溶液 乙醇（75%）/ml 乙醇（ ） 60g/L偏磷酸溶液 偏磷酸溶液/ml 偏磷酸溶液 蒸馏水 /ml
0
0 1.7 0.1 25 2.5 10
1
0.1 1.7 0.1 25 2.5 10
2
0.2 1.7 0.1 25 2.5 10
3
0.4 1.7 0.1 25 2.5 10
不同方法测定单宁（ 不同方法测定单宁（tannin）含量 ）
的比较研究
测定单宁 测定单宁含量的方法 单宁含量的方法
一、比色法 二、EDTA 二、EDTA络合滴定法 三、高锰酸钾滴定法
三种方法的比较
方法一、 方法一、 比色法
一、 实验目的
了解单宁的性质及熟练掌握单宁含量的测定方法
二、实验原理
样品中的单宁在碱性溶液中将磷钨钼酸还原， 样品中的单宁在碱性溶液中将磷钨钼酸还原，生成深蓝 色化合物，其颜色的深浅与单宁的含量成正比， 色化合物，其颜色的深浅与单宁的含量成正比，可与标准 进行比较定量。 进行比较定量。
三、材料、仪器与试剂 材料、
1、材料： 香蕉（未熟透）50g 、材料： 香蕉（未熟透） 2、仪器： 天平 、仪器： 组织捣碎机 烧杯 移液管 分光光度计 容量瓶 恒温箱 （30℃） ℃ 3、试剂 ： 、
标准单宁酸溶液（ ）：准确称取标准单宁 ① 标准单宁酸溶液（0.5mg/mL）：准确称取标准单宁 ）： 酸50 mg，溶解后用水稀释至 ，溶解后用水稀释至100 mL，用时现配。 ，用时现配。 试剂： ② F-D( Folin-Donis)试剂：称取钨酸钠（Na2WO4·H2O） 试剂 称取钨酸钠（ ） 50g、磷钼酸 锥形瓶中， 水溶解， 、磷钼酸10g，置于 ，置于500mL锥形瓶中，加375mL水溶解， 锥形瓶中 水溶解 再加磷酸25mL，连接冷凝管，在沸水浴上加热回流 ，冷却 再加磷酸 ，连接冷凝管，在沸水浴上加热回流2h， 后用水稀释至500mL。 后用水稀释至 。 偏磷酸溶液。 ③ 60g/L 偏磷酸溶液。 碳酸钠溶液： ④ 1 mol/L碳酸钠溶液：称取无水碳酸钠 碳酸钠溶液 称取无水碳酸钠53g，加水溶解并稀释 ， 至500mL。 。 ⑤ 95%和75%乙醇溶液。 和 乙醇溶液。 乙醇溶液
四、结果计算
c × 10 x = × 100 m×K
式中: x—样品中单宁的质量分数，%； 样品中单宁的质量分数， ； 样品中单宁的质量分数 c— 比色用样品溶液中单宁的含量（由标准曲线查得 ）， 比色用样品溶液中单宁的含量（ µg； ； m — 样品质量，g； 样品质量， ； K —稀释倍数，如按上述方法取样 时，K=（20/200） 稀释倍数， 稀释倍数 如按上述方法取样50时 （ ） ×（2/100）=1/500 ）
20~30min.冷却，用水定容至100mL，充分混匀，静置、过滤 冷却， 充分混匀，静置、
（处滤液弃去）。 处滤液弃去）。 3.滴定 准确吸取滤液10mL，置于150mL锥形瓶中。加水40mL、 锥形瓶中。 NH3-NH4Cl缓冲溶液12.5mL、铬黑T指示剂10滴，混匀。用 混匀。 0.0500mol/L的ＥＤＴＡ标准溶液滴定，溶液由酒红色变为纯 ＥＤＴＡ标准溶液滴定， 标准溶液滴定 蓝色金额为终点。 蓝色金额为终点。
四、实验步骤
1.样品处理 1.样品处理 称取切碎混匀的样品5~10g，置于研钵中，加少许石英砂 称取切碎混匀的样品5~10g，置于研钵中， 5~10g 研磨成浆状（干样品经磨碎过筛后，准确称取1~2g），转入 研磨成浆状（干样品经磨碎过筛后，准确称取1~2g），转入 1~2g）， 150mL锥形瓶中，用50mL水分多次洗净研钵，洗液一并转入锥 150mL锥形瓶中， 50mL水分多次洗净研钵， 锥形瓶中 水分多次洗净研钵 形瓶中，振动、提取10~15min. 形瓶中，振动、提取10~15min. 2.络合沉淀 2.络合沉淀 在100mL容量瓶中，准确加入Zn（Ac）2标准溶液5mL、浓氨 100mL容量瓶中，准确加入Zn（Ac） 标准溶液5mL、 容量瓶中 Zn 5mL 水3.5mL，摇匀（开始有白色沉淀产生，摇动使沉淀溶解）。 3.5mL，摇匀（开始有白色沉淀产生，摇动使沉淀溶解）。 慢慢将提取物转入容量瓶中，不断振摇，在35℃水浴中保温 慢慢将提取物转入容量瓶中，不断振摇， 35℃水浴中保温
４．结果计算
( c1V1 − 1 0 c 2V 2 ) × 0 .1 5 5 6 x = × 100 m
式中: 样品中单宁的质量分数，％ 式中 χ——样品中单宁的质量分数，％ 样品中单宁的质量分数 Ｃ１——Ｚｎ（Ａｃ）２标准溶液的浓度，ｍｏｌ／Ｌ Ｚｎ（Ａｃ） 标准溶液的浓度，ｍｏｌ／Ｌ 吸取Ｚｎ（Ａｃ） 标准溶液的体积， Ｖ１——吸取Ｚｎ（Ａｃ）２标准溶液的体积，mL 吸取 Ｃ２——EDTA标准溶液的浓度，ｍｏｌ／Ｌ 标准溶液的浓度，ｍｏｌ／Ｌ 标准溶液的浓度 V2——滴定时消耗ＥＤＴＡ标准溶液的体积， mL 滴定时消耗ＥＤＴＡ标准溶液的体积， 滴定时消耗ＥＤＴＡ标准溶液的体积 0.1556——由实验得出的比例常数，ｇ／ｍｍｏｌ 由实验得出的比例常数，ｇ／ｍｍｏｌ 由实验得出的比例常数 样品质量，ｇ ｍ——样品质量，ｇ 样品质量 10——分取倍数，及样品络合沉淀后定容至100mL，吸取其中的 分取倍数，及样品络合沉淀后定容至 分取倍数 ， 1/10进行滴定。 进行滴定。 进行滴定
4
0.6 1.7 0.1 25 2.5 10
5wk.baidu.com
0.8 1.7 0.1 25 2.5 10
6
1.0 1.7 0.1 25 2.5 10
F-D试剂 /ml 试剂 1mol/l 碳酸钠溶液/ml 碳酸钠溶液
2、样品测定 、 果实去皮，迅速称取50 加入95%乙醇 50mL、偏磷酸 果实去皮，迅速称取 g，加入 乙醇 50mL、水50mL，置于高速组织捣碎机中打浆 min（或在研钵 置于高速组织捣碎机中打浆1 中研磨成浆状）。称取匀浆20于 ）。称取匀浆 容量瓶中， 中研磨成浆状）。称取匀浆 于100容量瓶中，加75%乙醇 容量瓶中 乙醇 40mL，在沸水浴中加热 min，冷却后用 在沸水浴中加热20 冷却后用75%乙醇稀释至刻 乙醇稀释至刻 充分混合，以慢速定量滤纸过滤，弃去初滤液。 度。充分混合，以慢速定量滤纸过滤，弃去初滤液。 吸取上述滤液2置于已盛有 置于已盛有25 蒸馏水、 吸取上述滤液 置于已盛有 mL蒸馏水、2.5mLF-D试剂的 试剂的 50mL容量瓶中，然后加入，剧烈振摇后，以水稀释至刻度， 容量瓶中，然后加入，剧烈振摇后，以水稀释至刻度， 充分摇匀（此时溶液的蓝色逐渐产生）。同时做空白试验。 ）。同时做空白试验 充分摇匀（此时溶液的蓝色逐渐产生）。同时做空白试验。 恒温箱中放置后，用分光光度计在波长处， 于30 ℃恒温箱中放置后，用分光光度计在波长处，以试剂 空白调零，测定吸光值。 空白调零，测定吸光值。
−6
五、注意事项
1、样品处理时要尽快进行，以免单宁氧化而造成误差。 、样品处理时要尽快进行，以免单宁氧化而造成误差。 试剂作用产生蓝色， 2、维生素C也能与 、维生素 也能与F-D试剂作用产生蓝色，因此当样品含 也能与 试剂作用产生蓝色 有维生素C时需要进行校正 时需要进行校正， ㎎维生素C相当于 相当于0.8㎎ 有维生素 时需要进行校正，1㎎维生素 相当于 ㎎单宁 酸。
四、注意事项
1.单宁遇 3+会发生颜色反应，因此处理样品时，不能与分歧 单宁遇Fe 会发生颜色反应，因此处理样品时， 单宁遇 接触，切碎样品应采用不锈钢刀。 接触，切碎样品应采用不锈钢刀。 2.单宁容易被氧化，样品处理后应立即进行测定。同时要注意 单宁容易被氧化，样品处理后应立即进行测定。 单宁容易被氧化 控制加热温度，加热过程中要加些摇动数次，意识反应完全。 控制加热温度，加热过程中要加些摇动数次，意识反应完全。
四、实验步骤
1、标准曲线的绘制 、 按下表编号， 容量瓶， 按下表编号，分别加入试剂 于50mL容量瓶，加完后，剧 容量瓶 加完后， 振摇，以蒸馏水稀释至刻度，充分混合， 烈 振摇，以蒸馏水稀释至刻度，充分混合，于30℃恒温箱中放 ℃ 1.5h后，用分光光度计在波长 处测定吸光值， 置 ， 后 用分光光度计在波长680处测定吸光值，并 处测定吸光值 绘制标准曲线。 绘制标准曲线。
三、材料、仪器与试剂 材料、
1、材料： 香蕉（未熟透）5g 、材料： 香蕉（未熟透） 2、仪器：容量瓶 电子天平 研钵 碱式滴定管 仪器：
3、试剂： 试剂： ①1.000 mol/L醋酸锌标准溶液：准确称取Zn(Ac)2·H2 O mol/L醋酸锌标准溶液：准确称取Zn(Ac) 醋酸锌标准溶液 21.95g,用水溶解后定容至100mL。 21.95g,用水溶解后定容至100mL。 用水溶解后定容至100mL ②0.0500 mol/L乙二胺四乙酸二钠（EDTA）标准溶液：准确称 mol/L乙二胺四乙酸二钠（EDTA）标准溶液： 乙二胺四乙酸二钠 取乙二胺四乙酸二钠9.306g,溶解于水，并用水稀释至500mL. 取乙二胺四乙酸二钠9.306g,溶解于水，并用水稀释至500mL. 9.306g,溶解于水 ③pH=10的NH3-NH4Cl缓冲溶液：称取54gNH4Cl 加水溶解后加入 pH=10的 Cl缓冲溶液：称取54gNH 缓冲溶液 浓氨水350mL,用水定容至1000mL。 浓氨水350mL,用水定容至1000mL。 350mL,用水定容至1000mL ④铬黑T指示剂：称取0.59铬黑T，溶于10mL pH=10的NH3-NH4Cl 铬黑T指示剂：称取0.59铬黑T 溶于10mL pH=10的 0.59铬黑 缓冲溶液中，用95%乙醇定容至100mL。 缓冲溶液中， 95%乙醇定容至100mL。 乙醇定容至100mL