疟原虫血片制作及染色(ppt)

厚、薄血膜的优缺点及其适用范围
薄血膜 用血量约为1-1.5μl，涂制成2cm宽×2.5cm长面
积的薄血膜。由于在制备过程中，血片通常经甲 醇固定，使红细胞及其内疟原虫的形态保持完整， 适用于对疟原虫虫种的鉴定。 由于用血量少，为保证检测的敏感性，常耗时较 多，不适用于大规模调查。特别在医院的检验室， 由于要求在短时间内作出诊断，因而极有可能出 现漏诊。
薄血膜
取洁净的载玻片2张，1张以左手拇指，食指夹持 载玻片两端（手指切勿接触玻片表面），用另1张 边缘平滑（最好为磨口边缘）的载玻片做推片， 用推片一端边缘的中点从取血部分取约1微升的血 量（相当于1/4火柴头大小），使血滴与平置的载 玻片接触，并形成25~30度夹角，待血液向两侧 扩展约2cm长度时，均匀而迅速地轻轻向左推出 （约2.5cm长）。
疟原虫血片制作及 染色(ppt)
（优选）疟原虫血片制作及染 色
主要内容
血膜制作 血膜染色 影响染色效果的因素
血膜制作（血膜分类）
用于检查疟原虫的血涂片有两种：一种是将血液涂呈
薄膜状，称薄血膜；一种是血液涂成圆盘状，称厚 血膜。厚血膜上的血细胞是重叠堆积在玻片上面，而
薄血膜上的血细胞则要求平辅在玻片上面。
血膜制作（涂片操作）
厚血膜 用推片的一角，从取血部位刮取约4-
5微升血量（相当于火柴头大小），使血滴与 平置的载玻片接触，再由里向外一个方向旋转 ，转2~4圈，再回到圆心收起，涂成直径 0.8~1cm大小圆形厚血膜。水平放置，务必使 血膜厚薄均匀，过厚易于脱落，过薄达不到检 出率的要求。
血膜制作（涂片操作）
将推玻片向1的方向稍抽回，当血液充满推 玻片适当宽度（约2cm）后，以一定均匀的 速度向2的方向滑动（约2.5cm）。
血涂片质量评价： 血膜均匀、厚薄度合适、无空泡、无划痕 薄血膜头体尾位置和形状好、无停顿起伏、
两侧留出空间
注意：血滴大，速度快、角度大 血膜厚
血滴小，速度慢、角度小 血膜薄
血膜制作的注意事项
1. 玻片清洗时，避免玻片碰撞、磨损。制作血膜的 载玻片必须完全清洁而毫无油渍或污垢。制片时， 手指只能持载片的边缘，不能接触玻片表面，以免 油污使薄血膜产生空白区以及厚血膜脱落。作为推 片的玻片边缘一定要平滑，才能使推出的血膜均匀 一致。
血膜制作的注意事项
2. 刚涂制的血膜要平放在标本盒内，厚血膜未 干前勿使标本盒倾斜，以免血膜倾向一侧，造 成血膜厚薄不均，厚处不易溶血和着色而影响 检查结果；晾干血膜时应注意防尘、防止苍蝇 、蟑螂等昆虫吮吸血膜，凉干后应及时装入标 本盒并盖严，新的木制标本盒需敞开放置一段 时间，让醇、醛等物质挥发后才能使用，以免 厚血膜红蛋白被其固定，不能溶血导致染色效 果不佳。
血膜染色 一、染液的种类及染色原理
血膜制作的注意事项
3. 血膜让其自然干燥，切忌用太阳晒或火烤， 干透后才能用甲醇固定薄血膜，并对厚血膜溶 血。夏天标本尽可能24~48小时内固定、溶血 和染色；冬天也不能超过72小时。放置时间越 久，厚血膜越不易溶血，染色效果也差。若不 能及时染色，薄血膜宜先用甲醇固定，然后用 蒸馏水（或过滤的清水）对厚血膜溶血，晾干 固定后装入盒内盖严，待以后染色。
血膜制作（取血时间）
取血时机 现症病人一般可随时取血，疟疾普 查时可不考虑取血时机。但在诊断或需要某期 疟原虫作标本时，则应掌握适宜的取血时机。
血膜制作（取血时间）
间日疟
前驱期相当于肝内期疟原虫发育，因原虫密度太低， 镜检多为阴性。 发冷（寒战）期相当于红内期成熟裂殖体涨破 红细 胞期，镜检多为裂殖体和环状体。 发热期外周血中以环状体（小滋养体）为主，也可见 到裂殖 体； 出汗期因原虫密度太低，镜检多为阴性。 发作后数小时，间歇期外周血中以大滋养体为主，形 态较易辩认，为诊断的有 利时机； 发作36-48h，可检出裂殖体； 发作1-2次后，配子体出 现较多。
标本片
疟疾调查时，每张玻片
可涂制2~3人血膜。
发热病人血片
厚、薄血膜的位置
每张载玻片上可做1个薄血膜和1个厚血膜，如图
2.5cm
各种不同的疟疾血片涂制法：
标准血片
门诊发热病人血片 居民普查血片
血膜制作（涂片操作）
血膜编号 血膜制成后，立即用特种蜡笔或 水笔于玻片面上写上受检者的号码，以防 差错，待薄血膜干后再用铅笔于薄血膜中 写上血片种类的代号和受检者的个人编号， 依次顺序插入标本盒内。
血膜制作（取血时间）
恶性疟较理想的取血时间是在发作后至 20h内取血， 发作后2小时左右，此时环状体发育至最高峰，初发 患者退热后常查不到原虫。末梢血血检到恶性疟原虫 配子体，是在末梢血出现环状 体之后的7-10天。
血膜制作（工具准备）
一次性采血针、75%酒精、棉棒（球）,载玻片， 推片，记号笔或铅笔。
血膜制作（取血操作）
取血方法 采血部位一般人为耳垂，指头， 通常在耳垂取血。先用75%酒精棉球消毒 取血部位（冬季用手捻动耳垂使其充血后 再行消毒），待酒精干后，用左手拇指和 食指紧捏耳垂上方，右手持消毒采血针（ 一人一针，避免血传疾病）迅速刺入耳垂 下端1~2毫米，不宜过深或过浅。然后用 右手中指轻轻向上挤压出血。
血膜制作（涂片操作）
涂制厚、薄血膜的位置 通常是将厚、薄血膜涂 在一张载片上。方法是将载片分为6等分，第1 、2格备贴标签及编号用；厚血膜涂在第3格中 央，薄血膜涂在第4格前缘至第6格中部。作为 标本的血片每张玻片涂厚、薄血膜各1个；门诊 和发热病人血片每片1人，
涂2个厚血膜1个薄血膜，
标标签签
以防血膜脱落而影响检查；ห้องสมุดไป่ตู้
门诊或现场发热病人血片
标本片
厚、薄血膜的优缺点及其适用范围
厚血膜
用血量约为4μl～5μl,涂制成直径0.8 ～ 1cm的厚
血膜,由于在制备过程中红细胞已溶解，疟原虫在 形态上仍可分辨，但胞浆和胞核不可避免地形成一 定程度的固缩。受影响较大的有大、裂殖体的形态。 由于厚血膜与薄血膜相比血量大，须查范围小，节 省时间，阳性检出率较高。厚血膜能查出疟原虫数 是薄血膜的15～25倍。所以，我们推荐疟疾诊断 （门诊检验及现场普查）应以检查厚血膜为主。