环境微生物综合性实验报告

环境微生物综合性实验报告

官洲河段不同断面微生物群落分布的测定

见习类型专业见习

院别化学与环境学院

专业环境工程

指导教师成文老师

班级2010级环境工程

姓名翟锦亮

学号20102400132

2012年12月

目录

1. 前言...................................... 错误！未定义书签。

2. 实验方案与思路 (3)

3. 实验方法 (3)

3.1 仪器 (3)

3.2 试剂 (4)

3.3内容 (4)

4. 实验结果 (8)

4.1 水样观察 (8)

4.2 水样细菌总数的计算 (9)

4.3 水样菌落的培养观察 (9)

4.4 水样菌落数的计算 (11)

4.5 微生物个体菌种形态的观察 (12)

5. 实验分析 .................................. 错误！未定义书签。

5.1 实验结果分析 (13)

5.2 实验存在问题 (14)

5.3 实验改进意见 (15)

6. 实验结论 (15)

7. 实验收获 (15)

参考文献..................................... 错误！未定义书签。

1. 前言

微生物的群落结构与功能是微生物生态学的研究主题之一。水体中微生物与区域环境有着密切的联系,其数量及种群分布与水的类型、有机物含量、微生物的拮抗作用等多种因素密切相关。对它的研究将有助于了解水体的富营养现状及水域中C、N、P循环方式,并可为水体的整体治理方案提供依据[2]。

本实验将大学城官洲河段到入珠江段分为三个断面（对照断面，控制断面，消减断面），在同一天同一时间段对各断面水体的水样分别采样比较，测定水体中微生物的种类和数量，了解官洲河段不同断面的水体中存在的微生物的种类和数量，分析各断面中微生物群落的分布特点，了解各断面水体污染情况以及污染物对水体中微生物群落的影响。

2、实验方案与思路

2.1 采样容器的洗涤和灭菌

2.2 水样的采集

2.3 水样微生物的观察

2.4 培养基的制备

2.5 微生物的纯种分离与培养

2.6 微生物菌种的革兰氏染色

2.7微生物菌种的观察与鉴定

3.实验方法

3.1 实验仪器

高压灭菌类：培养皿（12个）、试管（9支）、移液管（3支，1mL）、高压蒸汽灭菌器、

锥形瓶（1个）

制备培养基类：烧杯（1000mL）、药物天枰、玻璃棒、药匙、pH试纸、加热器、超净工作室、恒温培养箱

观察类：显微镜、接种环、酒精灯、载玻片、盖玻片、血球计数板、滴管、

烧杯、

量筒（1个，10mL）

3.2 实验试剂

肉膏胨淀粉培养基配方[1]：牛肉膏3g，蛋白胨10g，淀粉2g，氯化钠5g,琼脂15-20g，蒸馏水1000mL，pH：7.4~7.8,。

灭菌条件：0.101MPa(121o C，15~20min)。

革兰氏染色液一套：草酸铵结晶染色液，革兰氏碘液，体积分数为95%的乙醇，番红染液

其他：去离子水、无菌水

3.3实验内容

①实验器材的洗涤与灭菌【1】

将培养皿、试管、移液管用洗衣粉洗刷并用自来水冲洗干净，再用去离子水冲洗1—2次，然后用报纸包好放入高压蒸汽灭菌器中灭菌（121o C，相对蒸汽压力0.103MPa，15—20min），灭菌后放入无菌室备用。

②水样的采集

按下图所示分别到三个采样点进行采样。采样时，应小心开启包装纸或瓶盖，避免瓶盖或瓶颈受到杂菌污染。

③水样的保存

为防止微生物发生质的改变, 装好的样品瓶要在绝热箱中运送。当外界温度较高时还要冷却, 采样容器也不要受任何直接阳光照射, 以免紫外线杀死微生物。采好的水样应立即送往实验室, 一般从取样到检验不宜超过两小时, 否则应使用10o C以下的冷藏设备保存样品, 但不得超过6小时,实验室接到送检样品后, 应将样品立即放入冰箱, 并在两小时内进行检验, 如果因路途遥远, 送检时间

超过6小时, 应考虑采用延迟培养法[4]。

④水样微生物的观察与计数

A.水样微生物的观察

（1）观察比较从三个断面（对照断面、控制断面、削减断面）取回来的水样，简单描述三个水样的外观特征。

（2）用压滴法分别制片观察三个断面的原水样水中微生物的种类、数量和形态。*压滴法制片方法[1]：如下图所示，取一片干净的载玻片放在实验台上，用滴管吸取样品于载玻片中央，用干净的盖玻片覆盖在液滴上（注意不要有气泡）即成标本片，用低倍镜和高倍镜观察，要充分利用显微镜的移片夹的移动，注意观察微生物组成。

B.水样细菌总数的测定【1】

（1）血球计数板的细胞计数

1）稀释：将样品稀释至合适的浓度，一般将样品稀释至每一中格约有15~20个细胞数为宜。本实验为了方便操作，故直接使用用于水样细菌稀释培养的稀释水样观察。因此，水中微生物计数应该在水中微生物纯种分离之后，以防止污染稀释水样。

2）加被测水样至血球计数板：取已洗净的血球计数板，将盖玻片盖住中央计数室，用细口滴管吸取少量已经充分摇匀的稀释水样于盖玻片的边缘，水样则自行渗入计数室，静止5~10min，待水样自然沉降并稳定后即可计数。实验过程中，可根据各断面水样的外观初步判断取用的稀释倍数。如控制断面的水样明显较浑浊，则应先选取1000倍的稀释液计数。

3）计数：先用低倍镜寻找大方格网的位置，找到计数室后将其移至视野的中央，再换高倍镜观察和计数。需不断地上、下旋动细调节轮，以便看到计数室内不同深度的菌体。为了减少误差，所选的中格位置应布点均匀，如规格为25个中格的计数室，通常取4个角上的4个中格及中央的1个中格共5个中格进行计数。当样品的细胞数较少时，应计算所有中格的细胞数。

（2）计算方法

结果计算：先求得每中格菌数的平均值，乘以中格数（16或25），即为一大格（0.1mm3）中的总菌数，再乘以104，则为每毫升稀释液的总菌数。如要换算成原液的总菌数，乘以稀释倍数即可。两种不同规格的血球计数板的计算方法如下：

①16×25的计数板计算公式：

细胞数（mL）＝（100小格内的细胞数/100）×400×10 000×稀释倍数②25×16的计数板计算公式：

细胞数（mL）＝（80小格内的细胞数/80）×400×10 000×稀释倍数