旋毛虫感染鼠血清P53抗体消长规律的观察

第２ ７ 天达 到最高峰 ，第 ２ ７ 天～ 第 ４ ９ 天 抗体水平 １ ． ２ ． ２ 抗体规律 测定方法 旋毛虫肌 幼虫感染 昆 维持稳 定，随后抗体水平开始呈下 降趋势 ，但直 明 鼠。取 旋毛虫传代 鼠肌 肉加入温 水放入组织捣 到第 ５ ７ 天 以前 Ｏ Ｄ 、Ｏ Ｄ ６ ３ ０ ｎ ｍ 一直保 持在 １ ． ０ 以 碎 机捣碎 ，随后置 于含 盐酸 １ ％、 胃蛋 白酶 １ ． ５ ％ 上 。
１ ． １ ． ４ 血清
抗 体 稀 释 液 中聚 乙 二 醇 ６ ０ ０ ０（ Ｐ Ｅ Ｇ ６ ０ ０ ０ ） 以
［ 收稿 日期】 ２ ０ １ ３ — ０ ５ — ３ １
【 作者简介】 朱江巍（ １ ９ ８ ０ 一 ） ， 男， 硕 士， 兽医师 ， 主要 从事宠物诊
疗、 人兽共患病 、 寄生虫及动物 防疫方面工作 。
别作 用 ３ ０ 、６ ０ 、９ Ｏ 和１ ２ ０ ｍ ｉ ｎ 进行 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ试验 ， 释液 中Ｐ Ｅ Ｇ ６ ０ ０ ０ 的浓 度为 ４ ％；酶标二抗 浓度 １ ：
确定最佳酶标二抗 的反应 时间。
１ ． ２ ． １ ． ６ 间接 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ判 定标 准 的 确 定
经历成虫和新 生幼虫 的发育阶段 ，最终在横纹肌 离 出的血清 即为旋 毛虫病 阳性血清 ；采取健康 昆 纤维 中发育为肌 幼虫 ，宿主对此过程 产生免疫应 明小 鼠血清 即为 阴性血清 。 答 ，出现抗体 。旋毛虫感染过程 中，排泄分泌抗 １ ． １ ． ５ 其他材料 原 （ Ｅ Ｓ 抗原 ）是 诱 导宿 主产 生 丙烯酰胺 、Ｎ Ｎ 亚 甲基双丙烯 酰 胺 、十 二烷基 磺酸 钠 （ Ｓ Ｄ Ｓ ） 、二硫
试验综逋
畜 牧 兽 医
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《 【 摘 要】 以纯化的旋毛形线虫Ｐ ５ ３ 排 泄分泌重组蛋 白包被微量反应板 ， 建立检测旋毛虫抗体的间 《 ｉ 接Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 方法， 并以本方法测定旋毛形线虫感染的试验小鼠， 试验显示， 以１ ０ ０ 条肌幼虫／ 只经 口 饲喂感 ；
０ ％、 ２ ％、４ ％、８ ％几 个 稀 释 度 稀 释 一 抗 、二
抗 ，选择 Ｐ ／ Ｎ最大为最佳稀释液。
２ ０ １ ３ ． ０ ７《 晷 》
畜 牧 兽 医
试验综ｉ ｄ ｉ
１ ． ２ ． １ ． ３ 酶标 二抗作 用浓度 的选择 酶标 二抗分 应用 己建立的 Ｐ ５ ３ 一 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ检测方法分别对采
清 、标准 阳性血清按最适稀释度稀释，３ ７ ℃下分 ２ 结果 别 作用 ３ Ｏ 、６Байду номын сангаас０ 、９ ０ 和１ ２ ０ ｍ ｉ ｎ ，按 间接 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ程 序进行试验 并测定 Ｏ Ｄ 。 值。 １ ． ２ ． １ ． ５ 酶标二 抗作 用时间的选择 确定Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ方法各项参数为 ：抗原 的稀释倍
性 血清 ，按 照 已确 立 的最 适反 应条 件进 行 间接 线如 图 １ 所示 。
Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ检测 ，通过 统计学方法计算 阴性血清 的平 由图 １ 可 以发现 ， 昆明 鼠感染旋毛 虫肌幼虫
均Ｏ Ｄ 。 值 和 标 准 偏 差 （ Ｓ Ｄ ） ， 以平 均 Ｏ Ｄ … 后 ，Ｐ ５ ３ 蛋 白的抗 体在 免 疫后 第 ５ 天开 始 出现 ， 值＋ ３ Ｓ Ｄ作为临界值 。
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数１ ： ２ ０ ０（ 即抗 原包被 浓度 为 １ Ｉ ｘ ｇ ／ ｍ Ｌ ） ；血清稀
酶标 二抗 分 释倍数 为 １ ： １ ０ ０ ；以０ ． ５ ％聚 乙烯 醇为封 闭液 ；稀 １ ０ ０ ０ ０ ；一抗作 用条件 为 ３ ７℃ ２ ｈ ；酶标二 抗作
取２ ０ 份 阴 用条件为 ３ ７℃ １ ｈ ；临界值 为０ ． ３ ３ ４ 。抗体消长 曲
别作 １ ： ５ ０ ０ ０ 、１ ： １ ０ ０ ０ ０ 、１ ： １ ５ ０ ０ ０ 和１ ： ２ ０ ０ ０ ０ 稀 集 的试验组和对照组 的血清进行检测 ，每个样 品 释 ，按 间接 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ程序进行 间接 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ试验确定 ２ 次 重 复 ， 同时 设 阴性 和 阳 性对 照 。试验 结束 酶标二抗反应浓度 。 １ ． ２ ． １ ． ４ 一 抗 作 用 时 间的 选择 后 ，根据 ２ ５ 只试验 昆明 鼠平均抗 体水平绘制 Ｐ ５ ３ 将 标 准 阴性 血 抗体消长 曲线 ，观察并分析其抗体消长规律ｐ 。
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旋 毛 虫病 （ Ｔ ｒ ｉ ｃ ｈ ｉ ｎ ｅ １ １ ｏ ｓ ｉ ｓ ）是一 种严 重 的人 阴性血 清 制备 方 法如 下 ：本 地 毛形 线 虫肌 幼虫 兽共患寄生虫病 ，其肌幼虫在感 染宿主后 ，依次 ２ ０ ０ 条 感染健康 昆明小 鼠，３ ０ ｄ 后 眼球采 血 ，分
白，表 达 该 蛋 白的菌种 由本 实 验室保存 。
１ ． ２ ． １ ． ２ 封 闭液及 稀 释 液 的选 择
分
别用 ５ ％脱 脂 乳 、 ３ ％ 明胶 、 １ ％牛 血 清 白蛋 白 Ｂ Ｓ Ａ） 、０ ． ５ ％聚 乙烯醇 （ Ｐ Ｖ Ａ ）作 为封 闭液 ，进 本地 毛形线虫标准 阳性血清 和标准 （ 行Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ试 验 ，选择 Ｐ ／ Ｎ最大 为最佳 封 闭液 。将
２ 《 染 抗 体 ２ ５ 水 只 平 昆 开 明 始 鼠 呈 ， 于 下 第 降 趋 ５ 天 势 可 检 出 抗 体 ， 第 ２ ７ 天 达 到 最 高 峰 ， 第 ２ ７ 天 到 第 ４ ９ 天 抗 体 水 平 维 持 稳 定 ， 随 后ｌ
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［ 关键词】 旋毛形线虫； Ｐ ５ ３ Ｅ Ｓ 蛋白； 间接Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ ； 抗体消长规律