菠菜中胡萝卜素的提取与鉴定

一、实验目的

1、掌握从新鲜菠菜中提取、鉴定胡萝卜素的方法。

2、掌握测定胡萝卜素紫外—可见吸收光谱的计算方法。

二、实验原理

绿色植物如菠菜中含有叶绿素（绿）、胡萝卜素（橙）和叶黄素（黄）等多种天然色素。植物色素中的胡萝卜素是具有长链结构的共轭多烯，有三种异构体，即α-、β-、γ-胡萝卜素，其中β-体含量较多，也最重要。β-体具有维生素A的生理活性，其结构由两分子的维生素A在链端失去两分子水结合而成。在生物体内β-体受酶催化氢化作用即形成维生素A。目前β-体也可由工业生产，可以作为维生素A使用，同时也能作食品工业中的色素。胡萝卜素不溶于水，可溶于有机溶剂中。

三、仪器与试剂

1、仪器：紫外—可见分光光度计、层析柱、玻璃漏斗、分液漏斗、抽滤装置一套、

研钵、试管、烧杯；

2、试剂：菠菜叶、乙醇、石油醚、丙酮、无水硫酸钠、硅胶GF254、中性三氧化二铝、

石英砂。

四、实验步骤

a)样品处理：

取约5g新鲜菠菜叶，洗干净后用滤纸吸干并用剪刀剪碎，于研钵中捣烂，用30mL2:1的石油醚—乙醇浸取。抽滤浸取液，滤液转移到分液漏斗中，加等体积的水洗1次，洗涤时要轻轻振荡，以防止乳化，弃去下层的水—乙醇层，石油醚层再用等体积的水洗2次，除去乙醇和其他水溶性物质。有机相用无水硫酸钠干燥。蒸除大部分溶剂至体积约为1mL为止，取四分之三作柱层析分离。

b)柱层析分离

在层析柱底部垫一点棉花，加入15cm高的石油醚，将中性三氧化二铝从玻璃漏斗中缓慢加入，小心打开柱下活塞，保持石油醚高度不变，必要时用装在玻璃棒上的橡皮塞轻轻地在柱周围敲击，使吸附剂装得平整致密。柱内溶剂面始终不低于吸附剂。

装完后，再在上面铺一层2—3mm高地石英砂。打开下端活塞，放出溶剂，直到液面刚好与石英砂平面相切时为止。

将上述所剩的菠菜色素浓缩液用滴管小心的加到柱顶，加完后打开活塞，让液面下降到柱面以下1mm左右，关闭活塞，加数滴石油醚并打开活塞，使液面下降，反复几次，使色素全部进入柱体。先用9:1（体积比）石油醚—丙酮洗脱，当第一滴黄色液体流出时，换一接收瓶接收，即为胡萝卜素。

c)TCL分析

在硅胶板上，用分离后的胡萝卜素和原先剩余的四分之一原料点样，9:1的石油醚—丙酮展开，计算其展开的Rt值。

d)胡萝卜素紫外光谱测定

将上述分离得到的胡萝卜素稀释后加到1cm的比色皿中，以石油醚作空白试剂，用紫外光度计测定400—600nm范围内的吸收。

五、数据记录及处理

从基线至展开剂斑点中心的距离(X)

Rf = ________________________________

从基线至展开剂前沿的距离(Y)

Rf 0.85 0.88 平均值Rf 0.865

紫外光谱图